蛋白質(zhì)組學及其在奶牛蹄葉炎研究中的應用前景

董書偉，李 巍，嚴作廷，王旭榮，高昭輝，荔 霞＊

（1.中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所 農(nóng)業(yè)部獸用藥物創(chuàng)制重點實驗室／甘肅省中獸藥工程技術中心，甘肅蘭州730050；2.鄭州牧業(yè)高等專科學校，河南鄭州450000；3.甘肅省牦牛繁育重點實驗室，甘肅蘭州730050）

隨著奶牛養(yǎng)殖業(yè)的規(guī)模化和集約化發(fā)展，口蹄疫、結核病和布魯氏菌病等傳染病已經(jīng)得到了有效的控制，而蹄病作為奶牛的常見病，卻成為了危害奶牛生產(chǎn)的三大疾病之一。據(jù)報道［1］，我國每年因蹄病被迫過早淘汰的奶牛占總淘汰頭數(shù)的15%～30%，給奶牛業(yè)造成經(jīng)濟損失達2 250萬元。李玉文等［2］調(diào)查了唐山市奶牛發(fā)病情況，發(fā)現(xiàn)因患乳房炎而被淘汰的奶牛占到32%，因患蹄病而被淘汰的奶牛占到21.5%，由此可見，蹄病對奶牛生產(chǎn)的影響僅次于乳房炎，已成為當?shù)匾鹉膛Ｌ蕴疃嗟牡诙蠹膊　?/p>

蹄葉炎是奶牛最為常見的一種蹄病，41%的蹄病是蹄葉炎，72%的奶牛至少有一個蹄發(fā)生過此病［3］。據(jù)楊前鋒調(diào)查［4］，豫北某奶牛場在春夏季蹄葉炎發(fā)病率高達18%，可見奶牛蹄葉炎發(fā)病率較高。由于蹄葉炎可導致奶牛蹄變形，蹄底潰瘍及白線病等多種蹄病，引起奶牛疼痛不安，嚴重影響了奶牛福利，導致奶牛生產(chǎn)性能明顯下降［5］，造成了很大的經(jīng)濟損失，制約了奶業(yè)的健康發(fā)展，因此，對該病開展病因、發(fā)病機理、診斷和防治等方面的研究，為控制奶牛蹄葉炎，提高奶牛生產(chǎn)性能和改善動物福利，具有重要的實用價值和現(xiàn)實意義。

蛋白質(zhì)組學是生命科學研究進入后基因組時代的重要標志，已成為生命科學研究的重要技術手段，被廣泛應用于生命科學研究的多項領域［6］。因此，應用蛋白質(zhì)組學研究奶牛蹄葉炎，能進一步在蛋白水平揭示其發(fā)病機制，為該病的診斷與治療提供新的理論依據(jù)，并為其防治藥物的研發(fā)提供新思路，開辟新途徑。本文綜述了奶牛蹄葉炎的主要研究進展，并探討了蛋白質(zhì)組學在該病研究中的應用前景和價值。

1 奶牛蹄葉炎的研究現(xiàn)狀

1.1 奶牛蹄葉炎的病因

奶牛蹄葉炎是蹄壁真皮乳頭層和血管層的彌漫性、漿液性、非化膿性炎癥［7］。由于蹄葉炎發(fā)生多呈慢性經(jīng)過，從表面上看不出對奶牛生產(chǎn)和繁殖性能的影響，因此，未引起飼養(yǎng)管理者的足夠重視，致使蹄葉炎成為奶牛的一個隱形殺手。

長期以來，普遍認為奶牛蹄葉炎是機體代謝紊亂的局部表現(xiàn)［7］；乳酸、內(nèi)毒素和組織胺是誘發(fā)該病的主要因素［8-9］。但多數(shù)學者認為，蹄葉炎是由綜合因素所致，包括日糧中碳水化合物過多、疾病、遺傳和管理等多種因素［10］。蹄形不正，如高蹄、低蹄、過長蹄等，使蹄的機能發(fā)生障礙，影響蹄部血液循環(huán)也會誘發(fā)本病；還有蹄葉炎繼發(fā)于瘤胃酸中毒、胎衣不下、乳房炎、子宮內(nèi)膜炎、酮病等［11］。另外，管理不善也會誘發(fā)蹄葉炎，包括圈舍條件，特別是地面質(zhì)量、有無墊草及奶牛運動量等［12］。奶牛妊娠后期，后肢水腫，使蹄部真皮層的抵抗力降低；持續(xù)而不合理的過度負重；甲狀腺機能減退等都可能是誘發(fā)本病的因素。

1.2 奶牛蹄葉炎的發(fā)病機制

由于蹄葉炎的病因比較繁雜，其發(fā)病機理也尚無定論，因此，截止目前，還沒有成功建立起公認的奶牛蹄葉炎病理模型［13］。但是，在發(fā)病機理方面比較普遍的觀點是：蹄部組織由于血液回流阻力大和久負重體，再加上血管活性物質(zhì)的共同作用，引起蹄組織毛細血管充血、淤血，血液回流受阻，導致蹄局部微循環(huán)障礙，蹄組織供氧不足，代謝紊亂，使蹄組織處于 “臨界應激”狀態(tài)，極易發(fā)生蹄葉炎［3，14］。Morgan S J等［15］通過觀察蹄葉炎組織病理學的變化，發(fā)現(xiàn)單層上皮黏膜受損，趾間血管的血液灌注量不足，鱗狀細胞分離和退化，真皮層毛細血管內(nèi)存在血栓和脈管炎，這可能是導致蹄葉炎的潛在原因。

近年來，很多學者開始關注金屬蛋白酶對基底膜的破壞作用，發(fā)現(xiàn)蹄部薄膜組織結構中存在有金屬蛋白酶MMPs，能催化降解蹄部許多重要的組織結構，如基底膜（BM）、半細胞橋粒（上皮細胞膜中的局部增厚組織），最終使BM和基部上皮細胞分離，使組織結構喪失生物學功能，在機體健康情況下，這些金屬酶處于鈍化態(tài)，不具有催化活性。當有大量的微生物代謝毒素時，這些酶被激活，從而引起薄膜組織結構的損傷［16-17］。含血小板結合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶 （ADAMTS）也有相同的作用，迄今共發(fā)現(xiàn)有19個金屬蛋白酶成員，它們在維持凝血系統(tǒng)的穩(wěn)定、器官生成、炎癥和發(fā)育等方面有重要作用，其中ADAMTS-4和ADAMTS-5在哺乳動物關節(jié)炎炎癥中起關鍵作用［18］。試驗證明［19］，幾種細菌內(nèi)毒素可不同程度的激活MMP-2和MMP-9，雖然ADAMTS-4和ADAMTS-5的激活機制還不清楚，但是，MMP-2和ADAMTS-5在降解細胞外基質(zhì)中可能起關鍵作用［20］。當奶牛采食大量精料時，瘤胃中以牛鏈球菌為主的有害菌，能在充足的底物、較低的pH環(huán)境中迅速繁殖為優(yōu)勢菌株，將碳水化合物降解為以L-乳酸為主的酸類，而細菌自身代謝的內(nèi)毒素和其他血管活性物質(zhì)則通過血液循環(huán)，激活蹄部真皮毛細血管壁中的金屬蛋白酶，使血管壁的通透性增強，也可引起紅細胞和血小板凝聚，形成血栓；使生角質(zhì)細胞發(fā)生營養(yǎng)供應不足，從而合成角質(zhì)出現(xiàn)障礙［21］。另一方面，瘤胃內(nèi)乳酸含量升高，pH下降，在多種細菌作用下，組氨酸脫羧，產(chǎn)生大量的組胺，作用于蹄部真皮，引起淋巴停滯、嚴重充血和血管損傷，最終引起蹄葉炎［22］。

經(jīng)過國內(nèi)外學者幾十年的堅持不懈的努力研究，在奶牛蹄葉炎的病因和發(fā)病機理方面都做了大量的工作，但是，至今其發(fā)病機理尚無定論，并且大多數(shù)研究都僅僅關注組織中單個致病因素，而沒有從整體上系統(tǒng)的篩選，不足于深入認識 “蹄葉炎是全身代謝紊亂的局部表現(xiàn)”，那么，奶牛發(fā)生蹄葉炎后，機體內(nèi)的全部蛋白質(zhì)表達發(fā)生了什么樣的變化？這些變化之間又存在著怎樣的聯(lián)系？它們在蹄葉炎的發(fā)生發(fā)展過程中起著怎樣的作用呢？截至目前，國內(nèi)外尚未見到類似研究和報道。研究這些關鍵科學問題，是擺在我們科研工作者面前的巨大挑戰(zhàn)。如今，傳統(tǒng)的科研方法對研究蹄葉炎這一復雜疾病已有點力不從心，那么借助新興的科學技術和方法，從嶄新的視角去審視這一頑固的疾病，另辟蹊徑，或許會給我們提供新的思路。

2 蛋白質(zhì)組學的研究現(xiàn)狀

2.1 蛋白質(zhì)組學的研究內(nèi)容

蛋白質(zhì)組于1994年由Wilkins和Williams提出［23］，是指一種細胞、組織或機體在特定的生理或病理時期，表達的全部蛋白質(zhì)整體；蛋白質(zhì)組學是以蛋白質(zhì)組為研究對象，在整體水平上研究所有蛋白質(zhì)的組成、表達水平和修飾狀態(tài)，了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系及其變化規(guī)律的學科［24］。其主要研究內(nèi)容有：①功能蛋白質(zhì)組學：鑒定某個體系的蛋白質(zhì)組所有組分，并闡述其修飾特性及功能；②差異蛋白質(zhì)組學，即比較蛋白質(zhì)組學：以重要生理現(xiàn)象或疾病為對象，比較細胞或機體在生理和病理過程中的蛋白質(zhì)表達變化，尋找疾病的特異性標志蛋白或新的藥物靶標，為重大疾病的發(fā)病機理、早期診斷和防治提供理論和物質(zhì)基礎［25］，也為篩選藥物靶標分子提供了新的思路；③相互作用蛋白質(zhì)組學：利用多項技術研究蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡，繪制某個體系內(nèi)蛋白質(zhì)間相互作用和聯(lián)系的網(wǎng)絡圖譜［26］。

2.2 蛋白質(zhì)組學的主要研究技術

蛋白質(zhì)組學研究的主要技術有基于凝膠技術和質(zhì)譜技術兩大類，包括蛋白質(zhì)分離技術、蛋白質(zhì)鑒定技術和生物信息學分析，其特點是采用高分辨率的蛋白質(zhì)分離方法和高通量的蛋白質(zhì)鑒定技術，全景式地展現(xiàn)蛋白質(zhì)表達圖譜，研究蛋白質(zhì)組中功能分類與驗證，從而闡明重要現(xiàn)象的分子機制等［27］。蛋白質(zhì)組學研究的基本步驟包括蛋白質(zhì)樣品制備、分離、鑒定和生物信息學分析。

2.3 蛋白質(zhì)組學的主要研究進展

蛋白質(zhì)組學已廣泛應用于生物醫(yī)學、藥學、微生物學和農(nóng)學等研究領域，取得了可喜的進展。通過比較病變組織與正常組織或疾病不同發(fā)展階段的組織中蛋白質(zhì)的表達差異，尋找與疾病相關的特異蛋白質(zhì)，為研究疾病的早期診斷、生物標志物、新藥靶標和分子發(fā)病機制提供線索［28］。Lee I等［29］利用蛋白組學技術研究慢性丙型肝炎，發(fā)現(xiàn)補體蛋白過高表達，認為其可作為與該型肝炎相關的特異性蛋白標志物。Huang Z等［30］比較了食管癌及癌旁組織的蛋白質(zhì)組表達差異，發(fā)現(xiàn)在癌組織中磷酸丙糖異構酶、錳超氧化物歧化酶和熱休克蛋白表達上調(diào)，而鱗狀細胞癌抗原、細胞角蛋白和膜聯(lián)蛋白表達下調(diào)，該結果為闡明食管癌的發(fā)生機制提供了線索，也為尋找食管癌潛在標志物奠定了理論基礎。另外，通過蛋白質(zhì)組學技術研究藥物的毒理作用機制，尋找毒性的蛋白標志物，以此預測或評價藥物的毒性，對新藥研發(fā)和早期預測在的毒性作用具有重要意義。Yamamoto T等［31］用2-DE-MS方法比較了4種肝毒性藥物（對乙酰氨基酚、胺碘酮、四環(huán)素和四氯化碳）干預后的肝組織蛋白表達譜，發(fā)現(xiàn)CA3、HSP60、AK4等8種蛋白在肝損傷組織中均發(fā)生改變，發(fā)現(xiàn)其蛋白質(zhì)表達模式的變化與血液生化指標及組織病理等傳統(tǒng)的毒性評價結果一致，說明蛋白質(zhì)組學在藥物先導化合物的毒性篩選中具有重要的指導作用。

迄今，國內(nèi)外學者利用蛋白質(zhì)組學技術已在白血病、乳腺癌、結腸癌、膀胱癌、前列腺癌、肺癌、腎癌和神經(jīng)母細胞癌等重大疾病研究方面進行了大量的探索，發(fā)現(xiàn)了1 500多個潛在的新的疾病蛋白標志物［32］，為腫瘤的發(fā)病機理、早期診斷、新藥篩選和療效判定提供了重要物質(zhì)基礎和理論依據(jù)。由此可見，蛋白質(zhì)組學技術已經(jīng)成為生物醫(yī)學領域簡單、快速、得力的研究工具。

3 蛋白質(zhì)組學在奶牛蹄葉炎研究中的應用

3.1 蛋白質(zhì)組學在獸醫(yī)科研中的應用

雖然蛋白質(zhì)組學在生命科學研究中取得了可喜的成績，但在獸醫(yī)學研究領域應用卻是剛剛起步［33］，主要集中在病原與宿主相互作用的機制研究，以期篩選病原的致病或耐藥機制相關蛋白和疫苗候選抗原或藥物靶標。如盧占軍［34］對馬立克病病毒（MDV）感染SPF雞后不同感染階段的法氏囊組織進行蛋白質(zhì)組學研究，提出載脂蛋白ApoaI持續(xù)的過量表達可能與MDV粒子跨膜感染機制有關，同時以ApoaI過表達為主導的脂類代謝紊亂可能是最終導致MDV感染易引起動脈粥樣硬化的主要原因。Sun J F等［35］應用2D-DIGE技術分析豬感染豬瘟病毒強毒后，其血清蛋白質(zhì)組表達發(fā)生變化，發(fā)現(xiàn)4種蛋白表達上調(diào)，6種蛋白表達下調(diào)，功能涉及血管生成、血凝機制和抗炎途徑。劉永杰等［36］首次研究了Asia 1型口蹄疫病毒（FMDV）感染BHK-21細胞后蛋白質(zhì)組學差異，結果發(fā)現(xiàn)感染組細胞蛋白表達上調(diào)251個點，下調(diào)221個點，新合成蛋白點30個，為揭示該病毒侵入細胞的分子機制提供了線索。楊艷玲等［37］應用蛋白質(zhì)組學和Western blot方法，篩選羊布魯菌膜蛋白的候選抗原，發(fā)現(xiàn)12種蛋白能夠被牛、羊兩種血清共同識別，涉及布魯菌的能量代謝，蛋白合成，脂肪酸代謝及糖和輔酶的合成等生理過程，為研制布魯菌亞單位疫苗提供了候選抗原。由此可見，將蛋白質(zhì)組學策略引入獸醫(yī)科研中，為一些重大復雜疾病的防控研究開辟了新思路，提供了新的線索。

3.2 蛋白質(zhì)組學在奶牛蹄葉炎研究中的應用

蹄葉炎是奶牛全身代謝紊亂的局部表現(xiàn)［7］，因此，奶牛發(fā)生蹄葉炎后，其血漿蛋白組必定發(fā)生相應的變化，開展血漿蛋白質(zhì)組學研究，尋找并鑒定疾病發(fā)生過程中差異表達的蛋白質(zhì)，為發(fā)現(xiàn)疾病相關的特異性生物標志物、藥物作用靶點和闡明疾病發(fā)生機理提供了新思路［38］。Andersson L等［39］研究了74例臨床蹄葉炎奶牛血清中蛋白的表達變化，發(fā)現(xiàn)γ-球蛋白和α-球蛋白呈現(xiàn)明顯的變化。但是，蛋白質(zhì)組學在奶牛蹄葉炎研究中的應用尚未見報道，筆者在2012年2月25日在PubMed文獻資源庫中進行了檢索，在“題目／摘要”范疇內(nèi)，以“蛋白質(zhì)組學”、“蛋白質(zhì)組學和牛”、“蛋白質(zhì)組學和蹄葉炎”為檢索詞，分別檢出40724、102、1篇論文，將“蛋白質(zhì)組學”、“牛”和“蹄葉炎”等主題詞聯(lián)合檢索時，其結果為“0”。而在馬蹄葉炎的研究上，Johnson P J等［40］為了尋找基質(zhì)金屬蛋白酶MMP對蹄小葉基底膜降解的標志物，發(fā)現(xiàn)蹄葉炎馬血清中Ⅳ型膠原蛋白含量顯著高于健康馬。Hannah G H等［41］采用蛋白組學方法研究馬蹄葉炎的蹄部組織時，發(fā)現(xiàn)37個蛋白表達上調(diào)，而22個蛋白表達下調(diào)，并且認為差異表達的軟骨基質(zhì)蛋白（COMP）和角蛋白會被進入血液，從而可能作為生物標志物用來判斷馬蹄葉炎的發(fā)展階段。因此，將蛋白質(zhì)組學技術應用到奶牛蹄葉炎的研究中，必定也會帶來新的發(fā)現(xiàn)。

4 展望

近年來，蛋白質(zhì)組學不論在基礎理論還是在技術方法上，都在不斷成熟和完善，并與其他學科的交叉合作也日益加強，如蛋白質(zhì)組學與基因組學、轉錄組學、代謝組學和生物信息學等領域的結合，呈現(xiàn)出嶄新的系統(tǒng)生物學研究模式，其整體性研究為特征的學術思想為研究那些復雜的疾病提供了全新的思路。盡管蛋白質(zhì)組學還是一門新興的學科，但隨著科學技術日新月異的發(fā)展，不斷涌現(xiàn)出新的蛋白質(zhì)分離和鑒定技術，如毛細管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用（CE-MS）、二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術、蛋白質(zhì)芯片技術等，使之對復雜的蛋白質(zhì)體系進行高分辨率的分離及高成功率的鑒定成為可能，極大地促進了蛋白質(zhì)組學的發(fā)展及其在其他學科中的應用。如今，蛋白質(zhì)組學在生物醫(yī)學研究中已逐步顯示出其巨大的應用價值和前景，已經(jīng)成為人類進行生命科學研究最強有力的手段。

在奶牛蹄葉炎研究中，應用蛋白組學策略研究奶牛血漿或組織中蛋白質(zhì)組的表達變化，不僅可進一步揭示奶牛蹄葉炎的發(fā)生機制，為蹄葉炎的早期防治提供新途徑，而且可豐富和補充奶牛蹄葉炎的病因學和發(fā)展階段理論，提高我國奶牛疾病的研究水平。因此，應用蛋白質(zhì)組學研究奶牛蹄葉炎具有重要的理論意義與實用價值，相信在不久的將來，我們會利用這些先進的學術思想和科學技術，破解奶牛蹄葉炎研究中現(xiàn)存的科學之謎。

［1］ 嚴作廷，王東升，王旭榮，等.我國奶牛主要疾病研究進展［J］.中國草食動物，2011，33（6）：69-73.

［2］ 李玉文，于錄國.唐山市漢沽管理區(qū)奶牛蹄病發(fā)病情況調(diào)查及分析［J］.中國奶牛，2009（6）：38-41.

［3］ Boosman R，Nemeth F，Gruys E.Bovine laminitis：clinical aspects，pathology and pathogenesis with reference to acute equine laminitis［J］.Vet Q，1991，13（3）：163-171.

［4］ 楊前鋒，馬發(fā)順.奶牛急性蹄葉炎治療方法比較試驗研究［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學，2007（4）：161-163.

［5］ Van S M，Siani I，Bar D.Reduced test-day milk fat percentage in cows diagnosed with claw horn lesions during routine claw trimming［J］.J Dairy Sci，2011，94（4）：1858-1863.

［6］ Fields S.Proteomics in genomeland［J］.Science，2001，5507（291）：1221-1224.

［7］ 陳家璞，齊長明.大家畜肢蹄病［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2000.

［8］ 趙占中，劉 群.蹄葉炎：毒素、組織胺與代謝紊亂［J］.中國草食動物，2004，24（4）：29-30.

［9］ 齊長明，王青蘭.二磷酸組織胺誘發(fā)奶牛蹄葉炎病變的病理學研究［J］.畜牧獸醫(yī)學報，2000，31（3）：241-248.

［10］ Mgasa M N.Bovine pododermatitis aseptica diffusa （laminitis）aetiology，pathogenesis，treatment and control［J］.Vet Res Commun，1987，11（3）：235-241.

［11］ Kenneth V.Investigation strategies for laminitis problem herds［J］.J Dairy Sci，2004，87：（E.Suppl.）：E27-E35.

［12］ Bergsten C.Causes，risk factors and prevention of laminitis and related claw lesions［J］.Acta Vet Scand，2003，98：157-166.

［13］ 王洪斌.家畜外科學 ［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

［14］ 李志強.蹄葉炎發(fā)病機理淺析［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2003（4）：33-34.

［15］ Morgan S J，Hood D M，Wager I P，et al.Summural histopat-hologic changes attributable to peracute laminitis in horses［J］.Am Vet Res，2003，64（7）：829-834.

［16］ Belknap J K.The pharmacologic basis for the treatment of developmental and acute laminitis［J］.Vet Clin North Am E-quine Pract，2010，26（1）：115-124.

［17］ Laat M A，Kyaw-Tanner M T，Nourian A R，et al.The developmental and acute phases of insulin-induced laminitis involve minimal metalloproteinase activity ［J］.Vet Immunol Immunopathol，2011，140，（3-4）：275-281.

［18］ 王 利，王 憲，孔 煒.新型金屬蛋白酶ADAMTS家族的研究進展［J］.生理科學進展，2008，39（1）：49-52.

［19］ Bailey S R，Adair H S，Reinemeyer C R，et al.Plasma concent rations of endotoxin and platelet activation in the developmental stage of oligofructose-induced laminitis［J］.Vet Immunol Immunopathol，2009，129（3）：161-163.

［20］ Black S J.Extracellular matrix，leukocyte migration and laminitis［J］.Vet Immunol Immunopathol，2009，129（4）：16-18.

［21］ Momcilovic D，Herbein J H，Whittier W D，et al.Metabolic alterations associated with an attempt to induce laminitis in dairy calves［J］.J Dairy Sci，2000，83：518-525.

［22］ Geoffroy R P，Didier S.The role of activated neutrophils in the early stage of equine laminitis［J］.Vet J，2011，189：27-33.

［23］ 錢小紅，賀福初.蛋白質(zhì)組學［M］.北京：科學出版社，1998.

［24］ Nilofer S A，Nabila R，Christina M A，et al.Proteomics in clinical trials and practice：Present uses and future promise［J］.Mol Cell Proteomics，2006，5：1819-1829.

［25］ Soo J L，Kyun H K，Ji S P，et al.Comparative analysis of cell surface proteins in chronic and acute leukemia cell lines［J］.Biochem Biophys Res Commun，2007，357：620-626.

［26］ Pandey A，Mann M.Proteomics to study genes and genomes［J］.Nature，2000，6788（405）：837-846.

［27］ Glen L H，Saeed A J，James C R.Proteomics：A new diagnostic frontier［J］.Clin Chem Jul，2006，52：1218-1222.

［28］ Li X H，Li Cui，Xiao Z Q.Proteomics for identifying mechanisms and biomarkers of durg resistance in cancer［J］，J Proteomics，2011，74：2642-2649.

［29］ Lee I，Cben C，Sheu J，et al.Identification of complement C3aas a candidate biomarker in human chronic hepatitis C and HCV related hepatocellular carcinoma using aproteomics approach［J］.Proteomics，2006，6（9）：2865-2873.

［30］ Huang Z，Zhao L，Zhang J，et al.Two-dimensional gelelectrop horesis-matrix assisted laser desorption／ionization timeof-flight mass spectronmetry to screen tumor-related proteins in esophageal carcinoma ［J］.Cancer Prev Treat，2007，14（12）：892-895.

［31］ Yamamoto T，Kikkawa R，Yamada H，et al.Investigation of proteomic biomarkers in vivo hepatotoxicity study of rat liver：toxicity differentiation in hepatotoxicants［J］.J Toxicol Sci，2006，31（1）：49-60.）

［32］ Lynne T，Michele A.Recent advances in blood-related proteomics［J］.Proteomics，2005，5（12）：3019-3034.

［33］ 董書偉，荔 霞，劉永明，等.蛋白質(zhì)組學研究概況及其在中獸醫(yī)學研究中的應用探討［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2012，39（1）：45-49.

［34］ 盧占軍.感染馬立克氏病病毒SPF雞法氏囊蛋白質(zhì)組學研究［D］.蘇江揚州：揚州大學，2009.

［35］ Sun J F，Shi Z X，Guo H C，et al.Proteomic analysis of swine serum following highly virulent classical swine fever virus infection［J］.Virol J，2011，8：107.

［36］ 劉永杰，張克山，尚佑軍，等.Asia1型FMDV感染BHK-21細胞差異蛋白質(zhì)點2-DE分析［J］.畜牧獸醫(yī)學報，2011，42（1）：145-149.

［37］ 楊艷玲，付曉霞，盛雪玲，等.免疫蛋白質(zhì)組學技術篩選布魯菌高免疫原性膜蛋白［J］.中國生物制品學雜志，2010，23（11）：1163-1168.

［38］ Joseph L M，David R G.Potential proteomic-based strategies for understanding laminitis：predictions and pathogenesis［J］.J Equine Vet Sci，2008，28（8）：484-487.

［39］ Andersson L，Liberg P.Blood serum and synovial fluid in bo-vine laminitis and arthritis，with particular reference to the protein composition［J］.Acta Vet Scandinavica，1980，21（4）：567-577.

［40］ Johnson P J，Kreeger J M，Keeler M，et al.Serum markers of lamellar basement membrane degradation and lamellar histopathological changes in horses affected with laminitis［J］.E-quine Vet J，2000，32（6）：462-468.

［41］ Hannah G H，Rebecca C，Renata L，et al.The big picture：using quantitative proteomics to investigate laminitis pathophysiology［J］.J Equine Vet Sci，2011，31：562-609.