中成藥中非法添加吲哚美辛檢測方法的研究

楊景柳

（北京市房山區中醫醫院藥劑科，北京 102400）

·論 著·

中成藥中非法添加吲哚美辛檢測方法的研究

楊景柳

（北京市房山區中醫醫院藥劑科，北京 102400）

目的探討并建立中成藥中非法添加吲哚美辛的檢測方法。方法采用化學反應鑒別方法及薄層色譜法，對抗風濕類中成藥中非法添加的吲哚美辛進行快速檢測，并采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法進一步驗證。結果化學反應鑒別及薄層色譜法檢測抗風濕類中成藥中非法添加的吲哚美辛重復性好，專屬性強，HPLC法吲哚美辛對照品線性范圍79.5～715.5mg/L（r=0.999 8），平均回收率為99. 27%，相對標準差為1.08%（n=6）。結論采用化學反應鑒別方法及薄層色譜法對中成藥中非法添加的吲哚美辛進行檢測，操作簡單、方便，且專屬性強，靈敏度高，可作為中成藥中非法添加吲哚美辛的初步檢測。

中成藥；吲哚美辛；色譜法，薄層

處理時間長，有諸多不便，因此，中成藥便成了人們的首選［1］。為了提高中成藥的治療效果，部分中成藥制劑中添加了化學藥品，嚴重威害了人們的用藥安全。吲哚美辛具有止痛和消炎的特性，但易導致消化性潰瘍、出血、穿孔、高鉀血癥、高鈉血癥、高血壓等不良反應，嚴重者可導致死亡［2］。研究人員從市場中抽檢的中成藥樣品中含有吲哚美辛。本研究采用化學鑒別方法及薄層色譜法，對模擬添加了吲哚美辛的抗風濕類中成藥進行檢測，并以高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法進一步驗證，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器和試藥：高效液相色譜儀（Agilent 1200型），紫外檢測器（G1314BVWD），Agilent LC系統化學工作站；高效液相色譜儀（Waters 1525型），紫外檢測器（Waters 2487），Breeze3.0化學工作站；電子天平（德國BP211DSartorius）和FAl004電子天平均為萬分之一；SK250LHC型超聲波清洗器；929型薄層鋪板儀，20%氫氧化鈉溶液，0.03%重鉻酸鉀溶液，0.1%亞硝酸溶液［3］；色譜純，乙腈，甲醇；分析純。

1.2 試驗用樣品：風濕定膠囊，小活絡丸及舒筋活血片，將一次服用量加入約1/10的2.5mg吲哚美辛研細作為自制陽性樣品。市場抽得的風濕定膠囊、腰息痛膠囊、風痛安膠囊、風濕關節炎片、小活絡丸、骨龍膠囊及舒筋活血片作為試驗用陰性樣品。

1.3 化學鑒定方法

1.3.1 試驗方法：膠囊劑、顆粒劑、片劑或丸劑供試品者，取1次最大服用量研細，然后加10mL氯仿進行超聲處理5min，靜置約10min，然后過濾，蒸干濾液；口服液供試品者，取10mL置分液漏斗中，加入40mL氯仿分2次萃取，分取氯仿液蒸干。取上述殘渣加水10mL，并加入2滴氫氧化鈉溶液即制得供試液［4］；取3mL制得的供試液，加0.3mL重鉻酸鉀溶液，加熱至溶液沸騰，放冷后加3滴硫酸，置水溶上加熱，若溶液顯示為紫色，則判定其中有可能含有吲哚美辛［5］。另取3mL供試液，加0.3mL亞硝酸鈉溶液，同法加熱至溶液沸騰并放冷，然后加入0.5mL鹽酸，溶液即刻變成綠色，放置約3min后，漸變成黃色，則判定其中有可能含有吲哚美辛。對于可疑吲朵美辛陽性的應采用薄層色譜法和HPLC法進行測定。

1.3.2 方法驗證

1.3.2.1 樣本的干擾試驗：取陰性樣品按照上述試驗方法進行試驗后，結果均呈陰性，即判斷樣品中不含有吲朵美辛。取自制陽性樣品按照上述試驗方法中的方法進行試驗后，結果均呈陽性，即判斷樣品中可能含有吲朵美辛。

1.3.2.2 方法的專屬試驗：取1/3服用量的萘普生、保泰構、吲哚美辛、布洛芬及美洛昔康的對照品，按上述方法進行試驗［6］。

1.3.3 薄層色譜法

1.3.3.1 供試品溶液的制備：取一次服用量的樣品研細，置入50mL錐形瓶中（有瓶塞），將10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），勻，10min后濾過，取3mL濾液濃縮至1mL，即制得供試品溶液。

1.3.3.2 對照品溶液的制備：精密稱取適量吲朵美辛對照品，加入10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），制成每1mL混合溶液中含1mg吲哚美辛的溶液即對照品溶液［7］。

1.3.3.3 陽性對照溶液的制備：取一次服用量自制陽性樣品加約 10mg對照品適量，研細，加入10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），勻，10min后濾過，取3mL濾液濃縮至1mL，即制得陽性對照溶液。

1.3.3.4 陰性對照溶液的制備：取一次服用量的陰性樣品研細，加入10mL丙酮與乙醇的混合液加入瓶中（9mL丙酮，1mL乙醇），勻，10min后濾過，取濾液即制備陰性對照溶液。

1.3.4 高效液相色譜法

1.3.4.1 色譜條件：Kromasil C18柱為色譜柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈（57）/冰醋酸溶液（43）為流動相，檢測波長為257nm；流速為1.0mL/min，柱溫為25℃；理論板數6 901；T 0.985。

1.3.4.2 供液品溶液的制備：取一次服用量的片劑或丸劑供試品研細，加入15mL甲醇超聲提取，10min后濾過，取濾液置于25mL量瓶中，加適量流動量稀釋至刻度，混勻，即制備供試品溶液。取一次服用量膠囊內容物研細，以同法制得。

1.3.4.3 對照品溶液的制備：精密稱取適量吲朵美辛對照品，加甲醇超聲溶解，制備300mg/L對照品貯備液，取3mL置于10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，混勻。

1.3.4.4 線性關系考察：取1、3、5、7、9mL吲哚美辛對照品貯備液（0.795ng/L），置于10mL量瓶中，加入流動量稀釋至刻度，混勻，分別取10μL注入高液液相色譜儀，以濃度和峰面積分別作為橫坐標和縱坐標，得出標準曲線回歸方程。

1.3.4.5 精密度試驗：取對照品溶液進樣6次，并測定峰面積。

1.3.4.6 重復性試驗：取自制陽性品6份，制得供試品溶液，分別測定峰面積。

1.3.4.7 穩定性試驗：取自制陽性樣品6份，制得供試品溶液，在0、0.5、1、3、5、24min時分別進樣，測定峰面積。

1.3.4.8 空白試驗：取陰性樣品制得供試品溶液，按要求注入液相色譜儀。

1.3.4.9 回收率試驗：精密稱取適量陰性樣品，加入約10mg吲朵美辛對照品，制備供試品溶液，測定其含量，計算回收率。

2 結 果

2.1 方法驗證結果：吲朵美辛呈陽性，其他均呈陰性，即本試驗方法檢測吲朵美辛專屬性強。

2.2 薄層色譜法結果：經陰性對照試驗及20批樣品試驗觀察［8］，確認本法可行。

2.3 高效液相色譜法結果：Y=2.750 876×10X+ 4.850 003×10，r=0.999 8，吲朵美辛對照品濃度在79.5～715.5mg/L時，線性關系良好。相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為0.20%，即本法精密度良好。RSD為0.51%，即本法重復性良好。RSD為0.36%，即本法穩定性良好。對照品溶液成分色譜峰的位置上未出現其他色譜峰，即在該色譜條件下，雜質無干擾。平均回收率為99.27%，RSD為1.08%（n=6）。

3 討 論

根據吲哚美辛在各種溶液中的溶解性情況，分別對氯仿、丙酮與乙醇及丙酮與乙醇的混合液作為提取劑進行考察。由于抗風濕類中成藥成分較為復雜，干擾因素眾多，而氯仿提取的樣品相對其他提取劑而言，干擾相對較少，因此，本研究采用氯仿作為提取溶劑，以使提取出來的吲朵美辛干擾成分盡可能減少［9］，而且使提取過程變得更為簡單，易于操作，適于在基層開展快速檢測。本研究結果顯示，超聲在3min以上，勻在5min以上，即超聲效果較好，由于吲朵美辛可以略溶于氯仿，本研究便將超聲時間設置為5min，以使吲朵美辛提取更為完全。研究［10］表明，吲哚美辛的氫氧化鈉與重鉻酸鉀溶液可與硫酸反應，呈紫色；與亞硝酸鈉及鹽酸溶液反應先呈綠色，可漸變至黃色。這也是本研究判斷樣品中是否含有吲朵美辛的理論依據。

在本研究中取吲哚美辛對照品加適量甲醇超聲溶解，再加適量流動相制成濃度為13mg/L的溶液，并設相應的空白對照溶液進行分光光度測定時，在200～400nm范圍內掃描得到的紫外線吸收圖譜顯示吲哚美辛在波長為257nm時有最大吸收，故選擇257nm為分析波長。

綜上所述，采有化學反應鑒別方法及薄層色譜法和HPLC法可對抗風溫類中成藥中的吲哚美辛成分進行初步篩查，操作簡單，穩性性好，專屬性強，但是若要明確結論，還需要對可疑組分提取純化并進行鑒定［11］。

［1］ 徐軍輝，李存金，王仕平，等.中成藥中非法添加化學藥品吲哚美辛檢測方法的研究［J］.中國藥品標準，2010，11（6）：416-420.

［2］ 徐軍輝，李存金，王仕平，等.中成藥中非法添加吲哚美辛檢測方法的研究［J］.中國藥事，2010，24（9）：894-897.

［3］ 李文霞，朱妙飛，陳勇，等.DAD光譜庫在中成藥非法添加化學成分檢測中的應用［J］.中國藥師，2011，14（3）：321-324.

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［8］ 國家藥典委員會.《中國藥典》2010年版二部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：254.

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（本文編輯：趙麗潔）

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楊景柳（1968-），男，北京人，北京市房山區中醫醫院副主任藥師，從事藥學管理研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.040