CK8在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)及意義

王為民 謝朋木 侯洪春

細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)是1種細(xì)胞中間絲蛋白,具有顯著的分子多樣性，不同的上皮組織和細(xì)胞分化的不同階段表達(dá)不同的CK。正常宮頸組織中的各種細(xì)胞分別表達(dá)不同的CK，在正常宮頸組織向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)化的過(guò)程中，一些CK的表達(dá)會(huì)發(fā)生變化，并表現(xiàn)出一定的規(guī)律性，因此CK有望在宮頸癌診斷和預(yù)后判斷中發(fā)揮作用。本研究通過(guò)觀察CK8在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織中的表達(dá)情況，探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2008年1月～2009年10月在濟(jì)南市婦幼保健院行宮頸活檢、環(huán)形電切術(shù)、手術(shù)切除宮頸標(biāo)本89例，其中CINⅠ15例，CINⅠⅡ17例，CINⅢ21例，宮頸癌36例。36例宮頸癌中，宮頸鱗癌28例、宮頸腺癌8例。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌的標(biāo)本均經(jīng)病理檢查確診，病理診斷由至少2名以上資深病理科醫(yī)生確定。選取經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常宮頸組織的15例標(biāo)本作為對(duì)照組。所有患者年齡在28～66歲，中位年齡41歲，所有患者術(shù)前均未做放療、化療，無(wú)免疫、代謝性等疾病。

1.2 方法

采用SP免疫組化方法：標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋，4 μm厚切片,CK8單克隆抗體及SP試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。PBS代替一抗作陰性對(duì)照。按SP試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

CK8的陽(yáng)性表達(dá)部位為細(xì)胞質(zhì)。在400倍光鏡下隨機(jī)選取8個(gè)視野，每個(gè)視野觀察100個(gè)細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞，取平均值。按陽(yáng)性細(xì)胞染色數(shù)量和顯色強(qiáng)度分為4級(jí)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為0，不計(jì)分；1%～25%為1分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；76%以上為4分；染色強(qiáng)度按無(wú)著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計(jì)0～3分；兩項(xiàng)相加，0～1分為“-”，2～3分為“+”，4～5分為“++”，6～7分為“+++”，以+～+++為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)采用χ2檢驗(yàn)，F(xiàn)isher確切概率法及相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CK8在不同宮頸組織中的表達(dá)情況

CK8在正常宮頸組織中無(wú)表達(dá)、在CIN和宮頸癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為47.2%(25/13)和80.6%(29/36)，呈逐漸增高的趨勢(shì)。3組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.503，P<0.05)。經(jīng)χ2分割后比較(α'=0.0125)，CIN組陽(yáng)性率高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.189，P<0.0125)；宮頸癌組陽(yáng)性率高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.011，P<0.0125)；宮頸癌組陽(yáng)性率高于CIN組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.014，P<0.0125)。CIN組內(nèi)，從CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ，CK8的陽(yáng)性表達(dá)率分別為13.3%(2/15)、52.9%(9/17)和66.7%(14/21)，隨著病變級(jí)別的升高，陽(yáng)性表達(dá)率有逐漸增高的趨勢(shì)，F(xiàn)isher確切概率法得出，CINⅡ組陽(yáng)性率高于CINⅠ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016)；CINⅢ組陽(yáng)性率高于CINⅠ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；CINⅡ組和CINⅢ組陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 CK8的陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸病變程度的關(guān)系

CK8在正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸癌的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0、13.3%、52.9%、66.7%和80.6%。隨著宮頸病變程度的加重(正常宮頸→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌)，CK8的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增高，其陽(yáng)性表達(dá)率同宮頸病變程度呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.979，P<0.01)。

3 討論

宮頸癌的致病因素現(xiàn)在已非常明確，即HPV感染。但HPV感染正常宮頸組織后，究竟如何促使正常組織向惡性轉(zhuǎn)變，目前尚不清楚。隨著研究的深入，宮頸儲(chǔ)備細(xì)胞在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用日益受到人們的重視。研究顯示，儲(chǔ)備細(xì)胞為宮頸干細(xì)胞，是HPV感染的靶細(xì)胞[1]。當(dāng)受到激素的過(guò)度刺激或某些化學(xué)毒性物質(zhì)的影響，同時(shí)合并HPV的感染，這些細(xì)胞化生的過(guò)程就會(huì)受到影響，從而向癌前病變轉(zhuǎn)化，并進(jìn)一步向鱗癌、鱗腺癌和腺癌轉(zhuǎn)化。由此可見(jiàn)，儲(chǔ)備細(xì)胞在宮頸癌的形成中發(fā)揮著重要作用。而CK8為儲(chǔ)備細(xì)胞的分子標(biāo)志物[2]，因此研究CK8在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)無(wú)論是對(duì)于疾病的診斷還是對(duì)于疾病進(jìn)展的預(yù)測(cè)都有著重要意義。

Bobrow等[3]研究了CK8在高級(jí)別CIN(≥CINⅡ)和宮頸浸潤(rùn)癌中的表達(dá)，結(jié)果顯示在22例高級(jí)別CIN中，9例有CK8的表達(dá)，而在17例宮頸浸潤(rùn)癌中，CK8全部有表達(dá)。Angus等[4]研究了從CINⅠ到宮頸浸潤(rùn)癌CK8表達(dá)的變化情況，結(jié)果為CK8表達(dá)率分別為CINⅠ 0(0/20)，CINⅡ 4.5%(1/22)，CINⅢ 22.7%(5/22)，浸潤(rùn)癌73.3%(11/15)，說(shuō)明隨著病變的進(jìn)展，CK8的表達(dá)是逐漸增高的。Carrilho等[5]研究了64例患者，其中正常10例，CINⅢ10例，宮頸浸潤(rùn)癌44例，結(jié)果CK17在其中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為0、44.4%、57.1%，說(shuō)明隨著病變進(jìn)展，CK8的表達(dá)增高，認(rèn)為CK8是宮頸惡性轉(zhuǎn)變的特異標(biāo)志物。Ikeda等[2]研究了134例患者，其中CINⅠ 39例，CINⅡ 31例，CINⅢ 43例，浸潤(rùn)癌21例，結(jié)果CK8的陽(yáng)性表達(dá)率分別為12.8%、22.6%、 62.8%和 71.4%，CK8陽(yáng)性率同CIN級(jí)別的增高相關(guān)聯(lián)，CINⅠ< CINⅡ< CINⅢ<浸潤(rùn)癌，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示有顯著性差異(P<0.0001)。作者認(rèn)為CK8可作為評(píng)價(jià)CIN級(jí)別的標(biāo)志物，并可能在篩查宮頸癌高危病例中發(fā)揮作用。Smedts等[6]的研究結(jié)果也顯示，隨著病變由CINⅠ到浸潤(rùn)癌的改變，CK8的表達(dá)會(huì)逐漸增高，并由此認(rèn)為，病變表達(dá)CK8有可能進(jìn)展，不表達(dá)則有可能消退或持續(xù)存在但并不進(jìn)展。

我們的研究結(jié)果顯示，從正常宮頸→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宮頸癌，隨著病變程度的逐漸加重,CK8的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增高，通過(guò)相關(guān)性分析，兩者之間呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.979，P<0.01)，即宮頸病變程度越重,CK8的陽(yáng)性表達(dá)率越高。由此可以認(rèn)為，通過(guò)CK8的表達(dá)情況，可以預(yù)測(cè)宮頸病變未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)，即表達(dá)CK8的宮頸病變，將來(lái)很有可能進(jìn)一步發(fā)展，相反，不表達(dá)CK8的宮頸病變，將來(lái)進(jìn)一步發(fā)展的可能性很小。因此，我們認(rèn)為CK8可作為高級(jí)別CIN和宮頸癌診斷及預(yù)測(cè)病變進(jìn)展趨勢(shì)的標(biāo)志物。

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[2]Ikeda K,Tate G,Suzuki T,et al.Coordinate expression of cytokeratin 8 and cytokeratin 17 immunohistochemical staining in cervical intraepithelial neoplasia and cervical squamous cell carcinoma：An immunohistochemical analysis and review of the literature 〔J〕.Gynecologic Oncology,2008,108(3):598.

[3]Bobrow LG,Makin CA,Law S,et al.Expression of low molecular weight cytokeratin proteins in cervical neoplasia 〔J〕.J Pathol,1986，148(2):135.

[4]Angus B,Kiberu S,Purvis J,et al.Cytokeratins in cervical dysplasia and neoplasia：a comparative study of immunohistochemical staining using monoclonal antibodies NCL-5D3,CAM 5.2,and PKK1〔J〕.J Pathol,1988,155(1):71.

[5]Carrilho C,Alberto M,Buane L,et al.Keratins 8,10,13,and 17 are useful markers in the diagnosis of human cervix carcinomas 〔J〕.Hum Pathol,2004,35(5):546.

[6]Smedts F,Ramaekers FC,Vooijs PG.The dynamics of keratin expression in malignant transformation of cervical epithelium：a review 〔J〕.Obsetet Gynecol,1993,82(3)：465.