液質聯用技術在中藥研究中的應用概述

吳定慧，陳關鍵

(重慶市合川區中醫院藥劑科，重慶 401520)

液質聯用技術在中藥研究中的應用概述

吳定慧，陳關鍵

(重慶市合川區中醫院藥劑科，重慶 401520)

液質聯用技術(LC－MS)是近年來發展起來的一門綜合性分析技術，LC的高分離效能與MS的高靈敏度、高選擇性使之成為藥物研究中強有力的工具。HPLC是目前分離復雜體系最為有效的分析工具，由于其儀器自動化、普及化程度愈來愈高，已成為中藥分析最常用的儀器之一。MS是一種高靈敏度的檢測器，且不同化合物的特征性強，可用于部分解析未知化合物的結構［1］。LC－MS將HPLC的高分離效能與MS的強大結構測定功能組合起來，既有液相色譜對復雜樣品較強分析能力的特性，又具有質譜的高靈敏度、高選擇性以及提供相對分子質量和豐富結構信息的特性，還具有分析極性大、揮發性熱不穩定等類型的化合物的能力，彌補了GC－MS技術在樣品上的局限性［2］。LC－MS的發展為中藥藥效質基礎、藥物質量控制以及藥理學研究提供了一個高效、可靠的分析方法。

1 在中藥成分分析研究中的應用

液質聯用技術在中藥成分分析研究中已經得到了廣泛的應用［3］，包括對已知成分的定性定量分析。在對未知成分的研究中，質譜檢測器可以給出大量的結構信息，結合同類已知結構化合物的裂解規律，或結合其它檢測方法，即可對未知成分進行直接分析。因此，在以生物活性為指導的化學篩選中，可以對目標化合物進行靶分析。

在中藥成分分離中的應用。盧定強等［4］用LC－ESI－MS法對銀杏葉樣品進行了初步研究。得到了樣品總離子流和選擇離子流圖，以及相應色譜峰的ESI－MS質譜圖，并對其進行了解析，鑒別出白果內酯及銀杏內酯A、B、C、J。谷利偉等［5］用HPLC－ESI－MS對大豆胚芽中的異黃酮進行了定量和定性分析，證明ESI－MS能靈敏而準確地反應色譜峰成分的結構特征，完成了在HPLC分析過程中對微量和不穩定的異黃酮進行定量。王兆基等［6］用LC－MS法測定烏頭屬藥種及中成藥中烏頭類生物堿的含量，結果被分析樣中各烏頭堿濃度在0.5～40mg/L范圍內，色譜峰面積與濃度有良好的線性關系。

在中藥成分鑒定中的應用。Fuzzati等［7］用LC－MS法直接分析了人參根提取物中含有的人參皂苷，共檢測到25種人參皂苷，并分別檢測其MS/MS譜，獲得這些人參皂苷所連接的糖基和苷元結構。賈強等［8］分析了枳殼和枳實中的黃酮及生物堿類化合物，鑒定了柚皮苷、橙皮苷、辛弗林等成分，并比較了這些成分在枳殼和枳實中的含量。王子燦等［9］用LCMSn法分析刺五加中抗疲勞化學成分，在樣品中發現了12個化學成分，其中有6個位新化合物，為進一步研究刺五加化學成分提供了依據。朱國元等［10］用LC－ESI－MS/MSn法分析鑒定了白花前胡中的8個香豆素類化合物，其中3’，4’－二異戊酰氧基二氫邪蒿內酯首次從白花前胡中發現。

2 在中藥指紋圖譜研究中的應用

指紋圖譜是國際公認的控制中藥質量最有效的方式之一。LC－MS的應用彌補了紫外檢測的不足，還提供了大量的化學成分信息，可實現對各主要流出組分的定性，從而為藥材及其制劑的鑒別及質量評價提供更加全面、可靠的依據。鄧亦峰等［11］用HPLC－(－)APCI－MS方法建立了半邊旗的總離子流色譜圖，對不同地區和不同采集時間的半邊旗LC－MS圖譜中的主要色譜峰進行了對比分析和質譜鑒定，鑒定了貝殼杉烷系二萜化合物4F、5F、6F的色譜峰，比較了各樣品中的含量。余靜等［12］用HPLC－UV－MS法分別對刺五加藥材水溶性和脂溶性成分進行指紋圖譜研究，并分別對水溶性成分指紋圖譜中5個色譜峰和脂溶性成分指紋圖譜中8個色譜峰進行了初步定性。根據化合物的質荷比、提取離子色譜(EIC)以及相關文獻，對圖中主要色譜峰進行了初步歸屬，主要成分為丁香苷、綠原酸、異綠原酸、咖啡酸、刺五加苷B1、芥子醛等。兩張指紋圖譜相互補充，為刺五加藥材的相關研究提供了較全面的參考。李松林等［13］應用HPLC－DAD－MS聯用技術測定四川GAP示范基地3個公司的9個川芎樣品，結果有21個共有峰，鑒定了11個色譜峰對應之化合物阿魏酸、川芎釅內酯I和H、Conife－rylferulate、藁本內酯等。所建立的液相色譜指紋譜特征性和專屬性強，可作為川芎藥材內在質量控制的有效方法。丁崗等［14］用LC－MS技術指出了茯苓藥材指紋圖譜中的9個主要色譜峰。張尊建等［15］用HPLC－UV－MS法對密花石斛進行指紋圖譜研究，標示了9個共有峰，對澤蘭內酯、鼓槌聯芐、大黃素或蘆薈大黃素等色譜峰進行了初步定性。王源園等［16］構建牛膝藥材的指紋圖譜，標示了4個共有峰，并借助LC－MS技術歸屬為5－羥甲基糠醛、蛻皮甾酮等。張尊建等［17］用HPLC－UV－MS法對忍冬和山銀花藥材進行指紋圖譜的研究，確認了忍冬指紋圖譜中的8個色譜峰(熊果酸、綠原酸、十三烷酸、香芥酚、corymbosin、3－甲基－4－羥基肉桂酸、異綠原酸、丁香酚)和山銀花圖譜中的5個色譜峰(綠原酸、香芥酚、丁香酚、異綠原酸、咖啡酸)，并比較了2種藥材指紋圖譜的差異。

3 在藥代動力學研究中的應用

通過對中藥藥代動力學的研究可以更科學更系統地闡明中藥組方原理，為研究古方、篩選新方、開發新藥提供科學依據和方法。中藥制劑中成分多樣，且結構較為復雜，含量一般都很低。進入體內后原藥及代謝物在血漿、膽汁、尿液等體液中的含量往往只有ng級水平，一般的方法如薄層掃描法、紫外測定法等難以檢測，從基質中分離的難度也很大，而LCMS技術只需對樣品進行簡單預處理或衍生化就能快速測定，因此對中藥藥代動力學研究具有重要意義。

在中藥有效單體成分研究中的應用。近年來天然藥物及其代謝物成為發現新藥的重要來源，中藥中已經發現了大量的活性成分，LC－MS技術的應用為研究其在體內的吸收、分布、代謝、排泄以及發現新的代謝產物提供了靈敏高效快速的檢測方法［18］。漢黃芩素(wogonin)是從唇形科草本植物黃芩中分離出的一種有黃酮類化合物結構特征的活性成分，由于黃酮類化合物在體內多與葡糖醛酸結合，因此原型藥物濃度通常很低，傳統的檢測方式難以滿足靈敏度的要求。杜玥等［19］首次采用LC－MS－MS測定大鼠血漿中的漢黃芩素，線性范圍為0.25～20μg/L、最低定量限為0.25μg/L。以質控樣品計算，在各濃度水平下，批內精密度為2.2%～13.1%、批間精密度5.9%～7.3%。該法靈敏、準確，可用于大鼠血漿中漢黃芩素濃度測定及臨床前藥動學研究。

在中藥制劑藥代動力學研究中的應用。鄭志華等［20］用LC－MS測定了大鼠灌胃掌葉大黃提取物后血漿中大黃酸的含量，繪制藥－時曲線，記錄了大黃酸血藥濃度變化，0～6h內大黃酸在血漿中均有分布，給藥后0.5h達到峰值。為大黃瀉下有效成分在體內的代謝研究提供了資料。王亞麗等［21］用LC－MS指紋圖譜方法，對當歸的乙醇提取物及其家兔灌胃后血液中的成分進行分析，發現23號色譜峰(藁本內酯二聚物)在血液中的相對含量比在原藥中明顯提高，說明有效成分藁本內酯在體內生成二聚物發揮作用。劉奕明等［22］用LC－ESI－MS/MS分析方法，多離子反應監測(MRM)，以人參皂苷Rg1和Re為指標，研究了參麥注射液的人體藥代動力學，靜脈滴注后兩者均符合二房室開放模型，T1/2α分別為0.28h和0.10h，T1/2β 分別為2.1h 和1.2h。

4 小結

中藥及天然產物活性成分及其代謝物在生物樣品中濃度較低，且生物樣品內源性雜質較多，對分析技術提出了很高的要求。液相色譜－質譜聯用技術經過10多年的發展，集LC的高分離能力和MS的高靈敏度、極強的定性、專屬特異性于一體，在對含量低、不易分離得到或缺乏特征紫外吸收的物質分析中有獨特的優勢，成為中藥研究中的重要方法。

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R284.1

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1004－2814(2012)01－065－02

2011－08－17

陳關鍵

●非藥物療法●