顱咽管瘤組織中 IFN-α、IFN-αR、OPN的表達(dá)變化及意義

黃廣龍，吳欣洪，郭邦明，漆松濤

(1南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣州 510515;2廣東省東莞市塘廈人民醫(yī)院)

顱咽管瘤是鞍區(qū)常見腫瘤，腫瘤與周圍重要結(jié)構(gòu)粘連緊密，手術(shù)剝離困難，術(shù)后可遺留嚴(yán)重并發(fā)癥，且復(fù)發(fā)率較高，是神經(jīng)外科的難題之一。顱咽管瘤的炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致其與周圍組織粘連的重要原因［1，2］。IFN-α 和骨橋蛋白(OPN)都是重要的炎癥相關(guān)細(xì)胞因子，與腫瘤的發(fā)病密切相關(guān)。2010年5月～2012年5月，本研究觀察了顱咽管瘤組織中IFN-α、IFN-α 受體(INF-αR)及 OPN 的表達(dá)變化，并探討其意義。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集南方醫(yī)院神經(jīng)外科收治并手術(shù)切除，術(shù)后病理證實(shí)為顱咽管瘤的患者58例(顱咽管瘤組)，所有患者術(shù)前均未接受過放化療。其中男42例，女16例。年齡2～61(31±18.9)歲。造釉細(xì)胞型顱咽管瘤41例，鱗狀乳頭型17例。初發(fā)43例，復(fù)發(fā)15例。其中首次手術(shù)43例，術(shù)后復(fù)發(fā)再次手術(shù)者15例。另取12例正常腦組織標(biāo)本(為同期腦腫瘤造瘺切除組織)作為對(duì)照組。

1.2 試劑 一抗為兔抗人IFN-α干擾素多克隆抗體(稀釋1∶200)，兔抗人IFN-αR多克隆抗體(稀釋1∶200)，鼠抗人 OPN 單克隆抗體(稀釋 1∶100)，用PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG。即用型快帶免疫組化EnvisionTM試劑盒。HE染色試劑盒。

1.3 組織學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)前將標(biāo)本從液氮罐中取出，經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)4 μm厚切片，進(jìn)行HE染色。切片常規(guī)用二甲苯脫蠟，乙醇脫水，蘇木素染色1～2 min，自來水沖洗10 min，鹽酸乙醇分化30 s，自來水沖洗5 min，水洗返藍(lán)，伊紅液染色30 s～1 min。常規(guī)脫水，透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。

1.4 IFN-α、IFN-αR、OPN 的檢測(cè) 石蠟包埋標(biāo)本塊以4 μm 厚切片分別進(jìn)行 IFN-α、IFN-αR 及 OPN免疫組化染色。①EnvisionTM二步法免疫組化染色:按試劑盒說明書操作。將已知陽(yáng)性片(采用Santa Cruz公司陽(yáng)性對(duì)照片)設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。②結(jié)果判定:以細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)被染成棕黃色或棕褐色為IFN-α、OPN陽(yáng)性細(xì)胞，以細(xì)胞膜被染成棕黃色或棕褐色為IFN-αR陽(yáng)性細(xì)胞。在400倍光鏡下每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算每個(gè)視野區(qū)內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞以及總細(xì)胞數(shù)，取平均值。陽(yáng)性細(xì)胞百分比=(陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù))×100%。陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜5%或被污染者為陰性(－)，5% ～20%為弱陽(yáng)性(+)，21% ～50%為中度陽(yáng)性(++)，＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++);+、++、+++判定為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織學(xué)觀察結(jié)果 41例造釉細(xì)胞型顱咽管瘤標(biāo)本均可看到角蛋白小結(jié)和囊實(shí)性混合的上皮分化為特征，還有纖維化、鈣化、陳舊性出血和膽固醇沉積等退化性改變的特征性表現(xiàn)。17例鱗狀細(xì)胞型顱咽管瘤主要為成熟的鱗狀上皮細(xì)胞，細(xì)胞呈多角形，腫瘤只有實(shí)性結(jié)構(gòu)呈乳突狀生長(zhǎng)，沒有囊性表現(xiàn)和退化成分。顱咽管瘤組織間質(zhì)中有血管分布，腫瘤組織中可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腫瘤周圍腦組織可見膠質(zhì)細(xì)胞增生。正常腦組織中未見炎性細(xì)胞聚集。

2.2 兩組 IFN-α、IFN-αR的表達(dá)比較 顱咽管瘤組IFN-α表達(dá)陽(yáng)性共52例，陽(yáng)性率89.7%，對(duì)照組2例弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率17%，兩組相比，P＜0.05。造釉細(xì)胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中IFN-α陽(yáng)性表達(dá)率分別為 92.68%(38/41)、82.35%(14/17)(P＜0.05)。復(fù)發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤組織中IFN-α陽(yáng)性表達(dá)率分別為 93.33%(14/15)和88.37%(38/43)，兩者相比，P＜0.05。顱咽管瘤組 IFN-αR 表達(dá)陽(yáng)性共54例，陽(yáng)性率93.10%，對(duì)照組分別為1例和8%，兩組相比，P＜0.05。造釉細(xì)胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中IFN-αR陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%(41/41)、76.47%(13/17)(P＜0.05)。復(fù)發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤中IFN-α陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%(15/15)和 90.70%(39/43)，兩者相比，P＜0.05。顱咽管瘤組織中IFN-αR與IFN-α的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.902，P＜0.01)。

2.3 兩組OPN表達(dá)情況 顱咽管瘤組OPN表達(dá)陽(yáng)性共51例，陽(yáng)性率87.93%，對(duì)照組未見表達(dá)，兩組相比，P＜0.05。造釉細(xì)胞型和鱗狀乳頭型顱咽管瘤組織中OPN陽(yáng)性表達(dá)率分別為100%(41/41)、58.82%(10/17)(P＜0.05)。復(fù)發(fā)和初發(fā)顱咽管瘤中OPN陽(yáng)性表達(dá)率分別為93.33%(14/15)和86.04%(37/43)，P＜0.05。

2.4 顱咽管瘤組織中IFN-α與OPN表達(dá)的相關(guān)性顱咽管瘤組織中IFN-α與OPN的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.814，P＜0.01)。

3 討論

顱咽管瘤是顱內(nèi)最常見的鞍區(qū)腫瘤之一，盡管在病理學(xué)上其屬于良性腫瘤，但是由于腫瘤組織與周圍重要結(jié)構(gòu)如視神經(jīng)、視交叉、垂體柄、下丘腦、顱底動(dòng)脈環(huán)等緊密粘連，使得手術(shù)全切除難度大，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，術(shù)后并發(fā)癥嚴(yán)重，致殘率及病死率高［1，2］。臨床研究證明，顱咽管瘤的炎癥反應(yīng)是導(dǎo)致其與周圍結(jié)構(gòu)緊密粘連的一個(gè)重要原因［3～6］。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，在造釉細(xì)胞型顱咽管瘤中，腫瘤組織及腫瘤間質(zhì)中炎癥細(xì)胞聚集，炎癥相關(guān)因子明顯增強(qiáng)，患者血清、腦脊液及囊液中炎癥相關(guān)的C反應(yīng)蛋白明顯升高，都說明了造釉細(xì)胞型顱咽管瘤存在嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)［7～9］。

各種原因引起的炎癥介質(zhì)的過度和(或)持續(xù)性釋放是急慢性炎性疾病的主要病理機(jī)制，IFN-α是重要的炎癥標(biāo)記物，通過檢測(cè)IFN-α可以判斷炎癥的程度。同時(shí)，IFN-α具有抗腫瘤作用［10］，其可直接作用于腫瘤細(xì)胞，抑制原癌基因表達(dá)，誘導(dǎo)抑癌基因表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞增殖。有學(xué)者［11］發(fā)現(xiàn)IFN-α可通過JAK-STAT信號(hào)通路，激活STAT蛋白家族，作用于IFN激活的反應(yīng)原件(ISRE)，從而引發(fā)一系列IFN刺激基因的轉(zhuǎn)錄，如2'-5'腺苷酸合成酶(OAS)、Fas/FasL、XAF-1、DAP 激酶、TRAIL/Apo2L、Caspase-4、Caspase-8、IRFS、PML 等，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖。亦有研究認(rèn)為IFN-α的抗腫瘤效應(yīng)與 p53、COX-2等相關(guān)［12］。IFN還可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，激活包括巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD+4T細(xì)胞、CD+8T細(xì)胞、Th1細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞攻擊腫瘤細(xì)胞，使機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫機(jī)制抑制腫瘤增殖［12］。IFN-α還有很強(qiáng)的抗血管形成作用，可通過下調(diào)VEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BFGF)，抑制腫瘤血管生成，進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng)［13～15］。IFN-α 發(fā)揮作用需要與 IFN-αR 結(jié)合。研究表明，IFN-αR在顱咽管瘤中有廣泛表達(dá)，在造釉細(xì)胞型表達(dá)高于在鱗狀乳頭型，在復(fù)發(fā)者中的表達(dá)較初發(fā)者更強(qiáng)，這與本研究結(jié)果一致。IFN-α與IFN-αR作為一個(gè)功能整體，所組成的信號(hào)系統(tǒng)可能參與了顱咽管瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)調(diào)控過程，但其具體作用及機(jī)制目前尚不明確［16］。

OPN是炎癥激活的重要因子，OPN通過對(duì)炎癥細(xì)胞的趨化作用誘導(dǎo)某些細(xì)胞因子的表達(dá)，從而促進(jìn)炎癥的發(fā)生與發(fā)展［7，8］。本研究結(jié)果顯示，顱咽管瘤組織中OPN表達(dá)高于正常組織，且在造釉細(xì)胞型及復(fù)發(fā)的顱咽管瘤分別高于鱗狀乳頭型和初發(fā)者，顱咽管瘤組織中OPN與IFN-α的表達(dá)呈正相關(guān)，這表明IFN-α及其受體、OPN共同參與了顱咽管瘤的發(fā)生發(fā)展過程。本研究結(jié)果同時(shí)證實(shí)，顱咽管瘤發(fā)病過程中存在炎癥反應(yīng)，且造釉細(xì)胞型較鱗狀乳頭型、復(fù)發(fā)者較初發(fā)者炎癥反應(yīng)更重。

綜上，IFN-α、IFN-αR 及 OPN 在顱咽管瘤組織中高表達(dá)，三者共同參與了顱咽管瘤的發(fā)病，與腫瘤炎癥反應(yīng)程度有關(guān)。在以后的治療中有望通過對(duì)IFN-α的干預(yù)，在術(shù)前減輕顱咽管瘤的炎癥反應(yīng)，從而降低顱咽管瘤的手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)，術(shù)后利用IFN-α對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用降低腫瘤復(fù)發(fā)的幾率。

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