鐵皮石斛的組培及污染處理技術

鐵皮石斛為蘭科多年生附生草本植物。生長于海拔達1600m的山地半陰濕的巖石上，喜溫暖濕潤氣候和半陰半陽的環境，不耐寒。石斛可分為黃草、金釵、馬鞭等數10種，鐵皮石斛為石斛之極品，它因表皮呈鐵綠色而得名。鐵皮石斛具有獨特的藥用價值，民間稱其為“救命仙草”。

鐵皮石斛生長于懸崖峭壁之陰處，由于它生長條件十分苛刻，自然產量極為稀少，更因民間長期過度采挖，致使野生資源瀕臨滅絕。而組培技術的出現解決了這一難題，通過現代科學技術成功地將只能在野外生長的鐵皮石斛馴化進行人工種植，而通過組培技術可以獲得更多的鐵皮石斛種苗。

一、培養基的制作及接種

1.制作培養基 在制作培養基時（MS培養基），秤取藥品的誤差必須在一定范圍內，并要在培養基中加入活性炭。

2.接種 在更衣室將工作服換上，戴上口罩。進入接種室之前用95%的酒精將裸露在外面的部分滅菌。進入接種室后用清潔布將臺面擦拭干凈，在臺面上空噴75%酒精進行消毒，將滅菌盤放在臺上待用。待滅菌器溫度達到250℃時開始操作，將母苗在滅菌盤中用鑷子分好待用,拿一培養瓶打開瓶蓋,將滅菌器中的鑷子取出在培養基中冷卻，再用鑷子將滅菌盤中的母苗插入培養基中，每瓶可插入25～28個生長點。分苗時要將苗上的培養基和黃、老葉撿干凈，愈傷組織丟棄不要；在插苗時注意不能將大小苗混插，生長點數要插夠，以保證苗的質量。叢生芽單獨插1瓶。

二、培養及煉苗

在接種完成后將種苗放入組培室的架上，將組培室的燈開啟，提供足夠的光照（光照時間為12小時/天，光照強度為 2000lx）和溫度（25±2℃），濕度保持在70%～80%，以便種苗能夠正常生長。在組培室培養一段時間后，將種苗轉入大棚中進行煉苗，讓種苗長的更健壯，根據天氣情況適當地調節大棚中的溫度。光照強度大于10000lx時需遮蔭，一般采用70%遮蔭能達到理想效果。在大棚中放置2天后，解開綁扎封口膜的皮筋，但不要揭開封口膜（如是膠塞封瓶的，則將膠塞啟松，但不打開；如為密封的袋苗，則不需處理，直接放置），放置1周后出瓶。大約在大棚中培養3～5個月就能將種苗出售。

三、污染處理

在組織培養過程中，多種因素容易造成鐵皮石斛組培苗的污染，如發現污染的組培苗應及時處理掉，以免大面積感染。鐵皮石斛組培苗的污染主要有以下幾種情況。

1.螨蟲污染 螨蟲屬節肢動物門蛛形蜱螨亞綱的一類體型微小的動物，身體大小一般都在0.5mm左右，有些小到0.1mm，大多數種類小于1mm。螨蟲污染主要與培養基中水分過多有關。

2.玻璃化苗 在組培過程中，組培苗葉片和嫩梢呈透明水漬狀的現象，它是組培苗的一種生理失調癥狀。玻璃化大大降低了試管苗有效增殖系數，嚴重影響苗的質量。影響玻璃化苗產生的因素主要有生長調節劑、溫度、濕度、光照時間等。

3.褐變 是苗在培養過程中體內的多酚氧化酶被激活，使細胞里的酚類物質被氧化為棕褐色的醌類物質，這種致死性的褐化物不但向外擴散，致使培養基逐漸變成褐色，而且還會抑制其他酶的活性，嚴重影響苗的脫分化和器官分化，最后變褐而死亡。影響組培苗褐變的因素主要有苗中酚類物質的含量、外植體的大小、培養基的成分、激素類型等。

4.真菌污染 污染苗呈現黑色和灰色霉菌，在接種3~10天后極易發生。造成真菌污染的原因主要有周圍環境不潔凈、工作臺的過濾裝置失效、培養瓶口徑過大等。

5.細菌污染 菌斑呈粘液狀物，一般在接種1~2天后極易發生。造成細菌污染的原因主要有初母苗帶菌或培養基滅菌不徹底，操作人員違規操作等。