血漿1－3－β－D葡聚糖檢測在深部真菌感染患者中的臨床價值

李蘭亞（江蘇省沭陽縣中醫(yī)院檢驗科 223600）

隨著免疫抑制患者的增多，臨床中發(fā)生深部真菌感染的概率也越來越高。一般來說，深部真菌感染通常發(fā)生于危重患者，對于這些患者的治療成功與否很大程度上取決于能否快速識別入侵的病原菌。通過檢測體液中真菌抗原或代謝物來診斷深部真菌感染的研究很多［1-2］，其中之一就是關(guān)于真菌的細胞壁成分為1－3－β－D葡聚糖。除結(jié)合菌外，所有真菌的細胞膜上都含有1－3－β－D葡聚糖，而其他微生物、動物及人的細胞成分和細胞外液都不含這種成分，因此在機體的體液中檢測到1－3－β－D葡聚糖是診斷深部真菌感染的有效依據(jù)［3］。本研究采用MB－80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)，檢測了深部真菌感染患者的血漿1－3－β－D葡聚糖含量，并探討其臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 來自本院2010年1月至2011年10月住院深部真菌感染患者60例，其中男35例，女25例，年齡10～85歲，平均（58.6±26.9）歲。均經(jīng)培養(yǎng)證實存在深部真菌感染，感染部位包括呼吸道、血液、泌尿道及靜脈插管引起的系統(tǒng)性感染。診斷標準按照歐洲腫瘤研究治療組織（EORTC）深部真菌感染合作組（IFICG）和國家過敏及感染類疾病研究所（NIAID）真菌病研究組（MSG）對深部真菌感染的定義和分類進行判斷［4］，判斷過程結(jié)合臨床，患者出院后進行總結(jié)。另外選取健康體檢者30名作為健康對照組。

1.2 儀器與試劑 MB－80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)、T01智能恒溫儀、冰浴槽以及GKT－5M Set動態(tài)真菌檢測試劑盒（定量）均由北京金山川科技發(fā)展有限公司提供。

1.3 血漿1－3－β－D葡聚糖檢測方法

1.3.1 血漿樣品制備 用含有少許無菌抗凝劑（肝素鈉）的無菌玻璃注射器或一次性采血管采取靜脈血1～2 mL，緩慢放入無熱源離心管中，用滅菌鋁箔封閉管口以防污染，然后3 000 r／min離心60 s，分離得富血小板血漿（PRP），取出后立即放入冰水浴中直到下一步，若暫時不用，可在－30℃冰箱中保存1個月。取上述富血小板血漿0.05 mL，加入裝有0.45 mL樣品處理液中，混勻后70℃保溫10min，取出后立刻放入冰水浴中，即為待測血漿樣品。

1.3.2 測定分析 取待測血漿0.2 mL直接加入反應主劑中，溶解后使用微量加樣器轉(zhuǎn)移至10mm×75mm標準玻璃反應管中（不要產(chǎn)生氣泡），插入 MB－80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)中進行反應，反應結(jié)束后由標準曲線自動計算出待測血漿中1－3－β－D葡聚糖含量。操作過程中注意避免微生物及細菌污染。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用統(tǒng)計軟件包SPSS15.0進行t檢驗，取P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

深部真菌感染組血漿1－3－β－D葡聚糖含量最高為142.44 ng／L，最低為12.99 ng／L，平均值為（48.96±29.33）ng／L；健康對照組血漿1－3－β－D葡聚糖含量最高為6.48 ng／L，最低為0.40 ng／L，平均值為（2.55±1.97）ng／L。經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件t－檢驗分析，兩組1－3－β－D葡聚糖平均值差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。

3 討 論

隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，危重患者的生存時間越來越長，廣譜抗生素廣泛地用于危重患者感染的降階梯抗炎治療，免疫抑制劑的應用改善了器官移植患者的器官排異，但深部真菌感染亦較移植前更常見。盡管進行有力的抗真菌治療，深部真菌感染的病死率仍居高不下。真菌培養(yǎng)的確可為臨床提供最為直接的診斷依據(jù)，但培養(yǎng)方法耗時長，不適宜用作早期診斷。而免疫學方法，往往需要作多種真菌抗原或抗體檢測，既費時又不經(jīng)濟，且當抗原譜或抗體譜不全時也極易造成漏診。

葡聚糖廣泛存在于真菌細胞壁中，占其干燥質(zhì)量的80%～90%。1－3－β－D葡聚糖是一種多聚糖成分，特異的存在于除結(jié)合菌和隱球菌外的其他真菌。1－3－β－D葡聚糖可以被G因子檢測出來，G因子是馬蹄蟹的一種凝血因子。本研究利用真菌β葡聚糖激活酶反應主劑中的相應因子后形成凝固蛋白，根據(jù)其濁度變化對真菌β葡聚糖濃度進行定量。原核生物、病毒和人類的細胞都沒有葡聚糖，如出現(xiàn)在血和其他無菌體液中則提示深部真菌感染。國內(nèi)目前葡聚糖檢測手段有比濁法，一些國內(nèi)的研究證明其可以有效地診斷深部真菌感染。本研究深部真菌感染組的血漿葡聚糖水平明顯高于健康對照組，差異具有統(tǒng)計學意義，與研究結(jié)果一致［5-6］。

雖然檢測1－3－β－D葡聚糖只能提示有無真菌侵襲性感染，不能確定為何種真菌，這是此方法的缺陷，但也可能轉(zhuǎn)化為一種優(yōu)勢。近年來，一些罕見的條件致病真菌也可引起深部感染，這就要求一種能迅速確定有無深部真菌感染的方法，因系統(tǒng)抗真菌藥物種類較少，抗菌譜較廣，不因真菌種類而異。當檢測到標本中葡聚糖含量較高時，即刻予以系統(tǒng)治療，否則會貽誤最佳治療時機。本研究檢測的深部真菌感染患者均經(jīng)細菌培養(yǎng)證實為念珠菌感染，若以10 ng／L為cut－off值，則陽性率為100.0%；20 ng／L為cut－off值，則陽性率為91.4%。所以血清葡聚糖檢測可為臨床醫(yī)生早期診斷機體是否感染真菌的提供實驗依據(jù)，具有重要的臨床價值，值得推廣。

［1］Yoshida K.Recent advances of serodiagnosis for systemic fungal infections［J］.Nihon Ishinkin Gakkai Zasshi，2006，47（3）：135－142.

［2］熊祝嘉，徐英春.半乳甘露聚糖用于侵襲性曲霉感染實驗診斷的研究現(xiàn)狀［J］.中國真菌學雜志，2007，2（1）：52－54.

［3］廖軍，郝飛.深部真菌感染血清真菌成分檢測方法研究進展［J］.國外醫(yī)學：臨床生物化學與檢驗學分冊，2002，23（2）：85－86.

［4］Ascioglu S，Rex JH，de Pauw B，et al.Defining opportunisticinvasive fungal infections in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants：an internationalconsensus［J］.Clin Infect Dis，2002，34（1）：7－14.

［5］楊潔瓊.深部真菌感染患者血漿1，3－β－D葡聚糖檢測的臨床價值［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2009，24（2）：12－13.

［6］李軍，王浚霽，陳偉，等.（1，3）－β－D葡聚糖檢測對侵襲性真菌感染的診斷意義［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2010，7（17）：1804－1805.