豨薟草活性炭洗脫水溶部位的急性毒性研究

關(guān)建紅，劉炳辰，裴香萍，程艷婷

（山西中醫(yī)學院，山西太原030024）

豨薟草為菊科植物，它的地上部分作為中藥入藥，為傳統(tǒng)的祛風類中藥之一。以往我們對于豨薟草水煎劑的毒性進行了研究，但對豨薟草水煎劑中有毒成分的進一步研究尚未見報道。本實驗用活性炭柱，采用不同洗脫液進行洗脫，收集洗脫液部分對小鼠進行急性毒性實驗篩選，篩選出毒性成分的洗脫液部分，為進一步實驗研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料材料

1.1 實驗藥材 經(jīng)我院中藥鑒定室牛艷珍副教授對該藥形態(tài)、質(zhì)地、髓部、柔毛、氣味的性狀鑒別，表皮細胞、直徑、腺毛長度的顯微鑒別，鑒定為菊科植物豨薟草（Siegesbeckia pubescens Makino）。

1.2 實驗動物 取昆明種小鼠70只，體重20 g～22 g，雌雄各半，隨機分為7組，每組10只。實驗動物質(zhì)量合格證：醫(yī)動字第070201號。正常飼養(yǎng)3 d后供試，實驗室溫度為20℃～22℃，相對濕度50%～70%，具排氣通風設(shè)備，自然光照大約12 h，明暗周期。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥品制備 供試品溶液配制：豨薟草水煎粉劑2.133 g（每克豨薟草水煎粉劑相當于7.4 g生藥），加水30 mL溶解，攪拌均勻，備用。采用處理好的不同型號的大孔樹脂（D101、D3520、AB-8、S-8）各 0.5 g、活性炭0.4 g，分別放入具塞試管中，各加入供試品溶液6 mL，振搖10 min，觀察顏色變化。結(jié)果放入活性炭的試管中供試品溶液變?yōu)闊o色，初步推斷活性炭可將樣品中的有色成分吸附，故選擇了活性炭柱分離的方法。活性炭柱制備：2/3活性炭加水濕法裝柱，1/3活性炭與樣品液混合均勻后加于柱上，將水、50%乙醇、70%乙醇的活性炭洗脫液濃縮成外觀為棕紅色的黏稠浸膏，分別相當于生藥含量：17.2 g（生藥）/mL、27.4 g（生藥）/mL、74.5 g（生藥）/mL。原膏以生理鹽水配制成不同濃度應(yīng)用。

2.2 豨薟草活性炭柱水洗脫液部位LD50與其他部位的最大耐受量測定［1］通過預(yù)試測出D100（100%死亡劑量）為活性炭水洗脫液部位344 g（生藥）/kg，測出D0（0%死亡劑量）活性炭水洗脫液部位為90.4 g（生藥）/kg，分別以 1∶0.8的等比配制系列濃度；小鼠給藥前禁食不禁水16 h，灌胃給藥，給藥體積為20 mL/kg，連續(xù)觀察14 d，記錄動物所出現(xiàn)的毒性反應(yīng)及死亡情況，以改良寇氏法計算LD50及95%可信限。

豨薟草活性炭水洗脫液部位灌胃給藥后，動物均在給藥后立即出現(xiàn)豎毛、蜷伏、豎尾、跳躍、抽搐，然后出現(xiàn)終尿而死，大多數(shù)動物在10 min之內(nèi)死亡，少數(shù)在6 h之內(nèi)死亡，24 h后存活動物不再死亡；在以后14 d的觀察期內(nèi)，動物一般情況正常，活動、進食、排便均無異常，觀察期間，動物均無死亡。14 d后解剖動物，無肉眼可見的病理改變。豨薟草活性炭水洗脫液部位小鼠死亡情況及急性毒性實驗結(jié)果見表1、表2。

表1 豨薟草活性炭水洗脫液部位小鼠死亡情況記錄表 （只）

表2 豨薟草活性炭水洗脫液部位小鼠急性毒性實驗（LD50）

根據(jù)表1，以改良寇氏法計算LD50及95%可信限。豨薟草活性炭水洗脫液部位的LD50為157.56 g/kg，95%可信限為 123.6 g/kg～200.79 g/kg，平均可信限為（157.56±38.58）g/kg。50%乙醇活性炭洗脫液部位小鼠口服的最大耐受量為344 g（生藥）/kg，70%乙醇活性炭洗脫液部位在同等劑量灌胃給藥后均無死亡。

2.3 判斷豨薟草毒級 豨薟草活性炭水洗脫液部位按中藥毒性分級指標［2］，有毒中藥的七項指標中豨薟草水洗脫液部位符合3項指標，屬有毒中藥。結(jié)果見表3。

表3 豨薟草水洗脫液部位毒性分級指標觀察結(jié)果

3 討論

1次口服給藥豨薟草水洗脫液部位測得小鼠LD50為（157.56± 38.58）g（生藥）/kg，95%可信限為 123.63 g/kg～200.79 g/kg，與豨薟草水煎粉劑的 LD50一致［3］。50%乙醇活性炭洗脫液部位小鼠口服的最大耐受量為 411 g（生藥）/kg，最小致死量約在 411 g/kg～548 g/kg之間，與豨薟草水煎醇沉粉劑的LD50結(jié)果一致［2］。在實驗中采用活性炭柱，對豨薟草水煎液分別用水、50%乙醇及70%乙醇、95%乙醇洗脫，收集洗脫液，不同洗脫液的急性毒性實驗結(jié)果與豨薟草水煎粉劑篩選的結(jié)果相一致［4］，提示豨薟草活性炭柱洗脫液部位為豨薟草毒性成分所在部位，經(jīng)豨薟草工藝初探推測其毒性成分可能在水溶部位。因此采用活性炭柱對豨薟草水煎液進行洗脫是可行的，保留了豨薟草中的毒性成分，為進一步對有毒成分的分離研究奠定了基礎(chǔ)。

豨薟草是臨床常用祛風濕藥物，隨著近年來中草藥研究的深入，該藥的臨床應(yīng)用范圍更為廣泛。我們已經(jīng)報道了豨薟草水煎粉劑和豨薟草水煎醇沉粉劑的LD50以及豨薟草水煎粉劑亞毒實驗出現(xiàn)的肺毒性［4-6］。按有毒中藥的分級七項指標中豨薟草水煎粉劑符合五項指標，豨薟草水洗脫液部位符合三項指標，介于大毒與小毒之間，屬有毒中藥，與《藥典》所載豨薟草無毒不相符。實驗進一步證明豨薟草水煎液的毒性在臨床應(yīng)用時是不容忽視的，其毒性成分到底為何種物質(zhì)，有待進一步研究。

［1］陳奇.中藥藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：112.

［2］關(guān)建紅.豨薟草水煎醇沉物口服小鼠急性毒性［J］.中國中藥雜志，2005，30（21）：1564.

［3］關(guān)建紅，薛征，任晉斌.豨薟草水煎劑小鼠急性毒性及亞急性毒性的實驗研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2007，13（11）：49.

［4］關(guān)建紅，裴香萍，劉炳辰.豨薟草不同提取部位毒性比較研究［J］山西中醫(yī)學院學報，2009，10（1）：15.

［5］翁維良.臨床中藥不良反應(yīng)的探討［J］.中藥新藥與臨床藥理，1996，7（2）：4.

［6］關(guān)建紅，薛征，劉炳辰.豨薟草水煎粉劑對小鼠肺毒性研究［J］中國中藥雜志，2008，33（23）：2820-2821.