補腎健脾方藥結合二甲雙胍對多囊卵巢模型大鼠的治療作用

陳高萍，沈明勤，魏愛醇

(海安縣中醫院，江蘇 海安 226600)

本文對補腎健脾方藥結合二甲雙胍對多囊卵巢模型大鼠的治療作用，進行了實驗研究，現將結果報告如下。

1 材料

1.1 動物 SD雌性大鼠，SPF級，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，動物合格證號：SCXK(滬)，2007-0005。

1.2 藥品與試劑 補腎健脾方藥，經煎煮、濃縮,制成含生藥量3 g/mL藥液,4 ℃保存，備用。二甲雙胍片，0.25 g/片,48片/瓶，批號：08051301，江蘇江中藥業集團股份有限公司生產。注射用人絨毛膜促性腺激素(HCG)，500 U/瓶，批號：0803091，上海第一藥業有限公司生產。中性胰島素注射液，400 U/10 mL，批號：0804215，江蘇萬邦生化醫藥股份有限公司生產。口服葡萄糖，350 g/袋，批號：080102，上海福億葡萄乳品有限公司生產。FSH、E2、P放免試劑盒，批號：081020，北京北方生物技術研究所生產。INS,北京福瑞特工程公司生產。

2 方法

2.1 PCO大鼠模型制備及分組 SD雌性大鼠100只,體質量250 g，隨機分為正常對照組10只和PCO模型組90只。正常對照組給予常規伺養。PCO模型組依照Poretsky法[1]每只大鼠皮下注射HCG 1.5 U,每日2次，共22 d，INS皮下注射于第1～11天內自0.5 U/d開始，每日遞增0.5 U，逐淅遞增至6.0 U/d，并按此劑量維持至第22天，注射前1 d起以5%葡萄糖溶液替代日常飲用水，造模最后1 d禁食過夜。

全部大鼠每周稱體質量1次。于第23天稱量體質量,眼眶后靜脈取血，測血清P、INS。正常對照組大鼠血清P、INS均在正常范圍內。PCO模型組大鼠血清P、INS升高者，為PCO模型大鼠。根據血清P、INS值選出PCO模型組大鼠，按體質量及P、INS值隨機分為模型對照(灌胃飲用水)組、陽性藥(二甲雙胍)組、二甲雙胍加補腎健脾方藥高、低劑量組、補腎健脾方藥高、低劑量組共6組，每組12只，未成模大鼠剔除。均將供試液配制成一定濃度后，按10 mL/kg灌胃給藥，正常對照組另給予等量飲用水。

2.2 給藥方法 二甲雙胍組大鼠按成人劑量的10倍(250 mg/kg)、補腎健脾方藥高、低劑量組按成人劑量的10倍、5倍量(通過人與大鼠體表面積比率換法計算出給藥量分別為30 mg/kg、15 mg/kg)，灌胃給藥。正常對照組和模型對照給大鼠每日灌胃蒸餾水1 mg/100 g體質量。均1次/d，連續14 d。

2.3 檢測項目及方法 末次給藥后禁食過夜，翌日稱重后，大鼠腹股溝靜脈取血，分離血清，放免法測血清雌二醇(E2)、孕酮(P)、促卵泡素(FSH)、胰島素(INS)水平，另取血清測血糖水平(GLU)，計算胰島素敏感指數(insulin sensitivity index，ISI，為空腹血糖值與空腹血胰島素值乘積的倒數，呈非正態分布，分析時取其自然對數值)。最后，放血處死動物，取子宮、卵巢稱臟器質量。卵巢病理檢查：每組隨機取4只卵巢進行切片、脫片、包埋、HE染色、光鏡檢查。

3 結果

3.1 補腎健脾方對多囊卵巢模型大鼠卵巢、子宮質量的影響 見表1。

表1 對多囊卵巢模型大鼠卵巢、子宮質量的影響(±s)

3.2 補腎健脾方藥對多囊卵巢模型大鼠血清E2、FSH、INS、P、ISI的影響 見表2。

表2 對多囊卵巢模型大鼠E2、FSH、INS、P水平的影響(±s)

3.3 補腎健脾方藥對多囊卵巢模型大鼠血糖和胰島素敏感指數(ISI)的影響 見表3。

表3 對多囊卵巢模型大鼠血糖和胰島素敏感指數(ISI)的影響(±s)

3.4 補腎健脾方藥對多囊卵巢模型大鼠卵巢病理組織學觀察結果 對照組：子宮內膜表面覆蓋單層柱狀上皮，腺體較豐富，卵巢組織內見各發育階段的卵泡及排卵后形成的黃體、白體。模型組：子宮內膜上皮為高柱狀，細胞質豐富，腺上皮細胞明顯增生呈假復層改變，卵巢組織內見多量擴張呈囊狀的卵泡，卵泡內見卵泡膜細胞及顆粒細胞。二甲雙胍組：子宮內膜表面覆蓋單層柱狀上皮，腺體較豐富，2例鼠卵巢組織改變與模型組相似,見多量擴張呈囊狀的卵泡，卵泡內見卵泡膜細胞及顆粒細胞,另2例鼠卵巢改變與正常對照組基本相似。補腎健脾方藥低劑量組：2例鼠子宮內膜與模型組改變相似，上皮為高柱狀，細胞質豐富,腺上皮細胞明顯增生呈假復層改變，另2例與對照組相似，表面覆單層柱狀上皮，腺體較豐富,各例鼠卵巢組織改變與模型組相似，見多量擴張呈囊狀的卵泡，卵泡內見卵泡膜細胞及顆粒細胞。 補腎健脾方藥高劑量組:2例鼠子宮內膜與模型組改變相似，上皮為高柱狀，細胞質豐富，腺上皮細胞明顯增生呈假復層改變，另2例與對照組相似，表面覆單層柱狀上皮,腺體較豐富，2例鼠卵巢組織改變與模型組相似，見多量擴張呈囊狀的卵泡,卵泡內見卵泡膜細胞及顆粒細胞，另2例鼠卵巢改變與正常對照組基本相似。

4 小結

本實驗[1]結果提示,二甲雙胍結合補腎健脾方藥對皮下注射HCG和INS引起的多囊卵巢模型(PCO)大鼠有明顯的治療作用,且比單獨使用二甲雙胍治療的陽性對照組的藥效作用有一定程度的好轉。

[1]劉新敏,李光榮,陳雙厚,等.多囊飲對多囊卵巢模型大鼠的影響[J].中華中醫藥雜志,2006,21(6):371-373.