紅細胞平均體積聯合葡萄糖－6－磷酸脫氫酶活性測定在地中海貧血初篩中的價值研究

袁明生，易旺云

地中海貧血 (Thal，地貧)是由于珠蛋白基因缺失或突變，導致珠蛋白鏈合成障礙的遺傳性疾病，是一種“可防難治”的遺傳性疾病，重型地貧的患者終生需要輸血和去鐵治療，根治的方法只有進行骨髓移植，手術難度大且風險系數高;如果能在產前做好地貧篩查和診斷，就可以將下一代患重型地貧的機會減至最低。廣東地區既是地貧的高發地之一，同時又是葡萄糖－6－磷酸脫氫酶 (G6PD)缺乏癥的高發地區之一，中山地區已將地貧的篩查和G6PD活性檢測作為產前免費檢驗項目。國內已有許多報道顯示:地貧患者的G6PD活性增高，G6PD活性測定可以應用于地貧的初篩［1－2］。本文回顧性分析了229例樣本，綜合評價紅細胞參數中紅細胞平均體積(MCV)和6PD酶活性檢測在地貧初篩中的聯合應用價值［3－4］，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年我院進行地貧基因檢測患者229例的血清標本，年齡20～50歲。通過基因檢測，將α－地貧患者作為α－地貧組，共94例;將β－地貧患者作為β－地貧組，共53例;兩者均有的患者作為α+β－地貧組，共16例，以上統稱地貧組，共163例。選取無地貧基因而紅細胞參數正常的人群為對照組，共66例。所有患者排除G6PD缺乏、缺鐵和其他原因引起的增生性貧血。

1.2 儀器和試劑 G6PD活性定量檢測儀器為日立7170A生化分析儀，試劑由廣州科方生物技術有限公司提供，測定方法:液體雙試劑、速率法，選用廣州科方生物技術有限公司生產的室內質控;紅細胞參數MCV檢測儀器為日本Sysmex三分類血液分析儀KX－21，試劑由中山市創藝生化工程有限公司提供，測定方法為鞘流電阻抗法，選用Sysmex室內質控;地貧基因檢測送廣東省中山市人民醫院檢驗中心進行聚合酶鏈式反應 (PCR)分子遺傳學測定。

1.3 方法及參考范圍 肘正中靜脈采血3～4 ml于肝素抗凝劑真空管檢測G6PD活性，將肝素抗凝全血樣本4 000 r/min(相對離心力為3 130×g)離心5 min后吸取20μl壓積紅細胞到1 ml裂解液中，紅細胞溶解后用日立7170A全自動生化分析儀25 min內測定完畢G6PD活性，按G6PD試劑說明書進行參數設定，G6PD參考范圍:6.7～14.0 U/gHb;2 ml于EDTA－K2真空管內進行MCV檢測，參考范圍:80～100 fl;3～4 ml于無抗凝劑真空管送中山市人民醫院檢驗中心進行PCR地貧基因檢測。

檢測方法包括單項檢測:MCV、G6PD檢測;兩項并聯(前兩項任一陽性為并聯陽性);兩項串聯 (前兩項均為陽性為串聯陽性)。

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件進行數據統計處理。均數比較采用t檢驗;率的比較采用χ2檢驗;將α－地貧組、β－地貧組、α+β－地貧組及對照組資料錄入SPSS 13.0統計軟件 (MCV和G6PD.sav)，采用兩獨立樣本非參數檢驗。采用Binary Logistic進行逐步Logistic回歸分析產生各個體預測概率的新變量PRE。以新變量PRE為檢驗變量，診斷結果為狀態變量，作ROC曲線分析，計算曲線下面積 (AUC)。以p＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 地貧組與對照組G6PD活性和MCV結果比較 α－地貧組、β－地貧組及α+β－地貧組G6PD活性均高于對照組，且差異有統計學意義 (t值分別為3.89、7.46、3.71，均 P=0.000);α－地貧組、β－地貧組以及α+β－地貧組MCV均顯著低于對照組，差異有統計學意義 (t值分別為10.90、11.21、5.18，P=0.000，見表1)。

2.2 應用非參數檢驗ROC曲線評價G6PD、MCV和兩項聯檢對地貧的診斷效能 以MCV、G6PD和兩項聯檢為檢驗變量，以診斷結果為狀態變量，利用SPSS 13.0中的非參數檢驗ROC曲線功能繪制ROC曲線圖，ROC曲線計算各指標曲線下面積(AUC):MCV、G6PD和兩項聯檢分別分0.905、0.757和0.907(95%可信區間均不包括參考線面積0.5，見圖1)。

2.3 以 MCV ＜80 fl［6］、G6PD ＞14.0 U/gHb作為診斷地貧的最佳臨界值，MCV、G6PD、兩項并聯和串聯診斷地貧的靈敏度分別為99.4%、37.4%、99.4%和37.4%，特異度分別為47.0%、93.9%、43.9%和97.0%，MCV與兩項并聯的靈敏度和特異度比較，差異無統計學意義 (χ2=0.075，P＞0.05)，G6PD與兩項串聯的靈敏度和特異度比較，差異亦無統計學意義 (χ2=0.043，P＞0.05)，MCV診斷地貧的靈敏度顯著高于兩項串聯的靈敏度 (χ2=159.7，p＜0.01)，兩項串聯診斷地貧的特異度顯著高于MCV的特異度 (χ2=159.7，p＜0.01，見表2)。

2.4 地貧基因突變類型及其構成比 在163例地貧陽性樣品中，其中α－地貧患者占57.7%，β－地貧患者占42.3%，在α－地貧基因型者又以 －SEA/aa基因型為主，占44.6%，－SEA(東南亞型缺失)攜帶者;在β－地貧基因型者又以41－42M/N基因型為主，占13.5%;α－地貧合并β－地貧占9.8%(見表3)。

圖1 MCV、G6PD和兩項聯合診斷地貧的ROC曲線Figure 1 The ROC curves of MCV，G6PD and two joint diagnosis to the thalassanemia

表1 各組G6PD活性和MCV檢測結果分析Table 1 The analysis of G6PD activity and MCV test results

表1 各組G6PD活性和MCV檢測結果分析Table 1 The analysis of G6PD activity and MCV test results

組別 例數 G6PD(U/gHb) MCV(fl)α－地貧組94 12.54±3.53 69.41±4.95 β－地貧組 53 14.15±2.97 65.97±4.11 α+β－地貧組 16 12.80±1.75 69.24±3.29地貧組 163 13.09±3.29 68.28±4.80對照組66 10.63±2.18 82.58±10.13

表2 MCV、G6PD和兩項聯檢診斷地貧結果比較〔n(%)〕Table 2 Thecomparative statement of MCV，G6PD and two joint diagnosis to the thalassanemia

表3 地貧基因突變類型及構成比Table 3 The thalassemia mutations type and constitute ratio

3 討論

地貧是自體隱性遺傳疾病，由于α珠蛋白基因或β珠蛋白基因缺失，使血紅蛋白中的一種或一種以上的珠蛋白鏈缺如或不足所致。廣東省是地貧的高發區之一，但用于確診地貧的基因檢測由于操作繁瑣、費用高、實驗條件要求苛刻，使其難以廣泛應用于臨床，不能作為地貧診斷的首選，因此地貧的篩查就顯得尤為重要，篩查的方法有MCV和血紅蛋白電泳等［5－7］。近年來有許多報道，紅細胞G6PD活性的增高可以作為各類地貧的輔助診斷［8－9］。

本研究顯示，各地貧組G6PD活性均較對照組增高，G6PD活性可用于地中海貧的診斷，ROC曲線分析本次研究顯示:G6PD活性診斷地中海地血ROC曲線下面積為0.757，也支持G6PD活性可用于地中海貧的診斷，與國內的研究結論相同。

眾所周知，MCV作為地貧初篩方法已使用多年，本研究數據與許多國內研究一致［10－12］，其中MCV診斷地貧的ROC曲線下面積為0.905，對小細胞性貧血如:地貧、缺鐵性貧血等有診斷意義，但需通過血紅蛋白電泳、游離鐵測定、轉鐵蛋白測定等實驗進行鑒別診斷。

作為篩選指標，應有較高的靈敏度，以減少漏診［13－14］，本項研究表明:MCV、G6PD、兩項并聯和兩項串聯診斷地貧的靈敏度分別為99.4%、37.4%、99.4%和37.4%，MCV、MCV與G6PD活性兩項并聯可作為篩選地貧指標，靈敏度高，均為99.4%，其漏診率最低，均為0.6%，因兩者靈敏度相同或相近，在地貧的初篩實驗中，MCV與G6PD兩項并聯應用的價值跟單一MCV指標無差異，無需并聯篩選。而兩項串聯的靈敏度低，容易漏診，漏診率62.6%，不符合作為篩查指標的要求。因此，在地貧的初篩實驗中MCV與G6PD聯合應用的篩選價值不大，但如果MCV＜80 fl的同時，G6PD同時升高 (串聯)，在排除缺鐵性貧血等增生性貧血的情況下，診斷地貧的特異度為97.0%，遠高于MCV單獨指標的特異度(47.0%)，地貧的可能性愈大。本組資料顯示:地貧主要是以α－地貧為主，而血紅蛋白電泳對α－地貧篩選價值有限，如果MCV＜80 fl的同時，G6PD同時升高 (串聯)，而血紅蛋白電泳正常，則要考慮可能是α－地貧。因此，G6PD活性可作為α－地貧輔助篩選指標。

綜上所述，在地貧的初篩試驗中，MCV與G6PD活性并聯的價值與MCV單項相近。但兩項串聯應用，可提高診斷地貧的特異度。

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