淺談小麥全蝕病的田間診斷及室內(nèi)病原菌鑒定技術(shù)

汪涵真

[摘要] 小麥全蝕病是小麥生產(chǎn)上一種毀滅性較大的病害，本文通過田間診斷和病原鑒定的方法確診小麥全蝕病，最后使用柯赫氏法則驗(yàn)證全蝕病菌。

[關(guān)鍵詞] 小麥；全蝕病；田間診斷；病原菌鑒定

小麥全蝕病是小麥的重要病害之一。目前世界上許多產(chǎn)麥國家都有發(fā)生。我國早在五十年代曾在河北等省發(fā)現(xiàn)，近幾年在北部冬麥區(qū)、西北春麥區(qū)和長江下游麥區(qū)相繼發(fā)生，并有擴(kuò)大加重的趨勢。小麥感病后，分蘗減少，成穗率低，粒重下降。發(fā)病麥田一般減產(chǎn)1-2成，重者減產(chǎn)5成以上。對(duì)小麥生產(chǎn)威脅很大。已列為國內(nèi)植物檢疫對(duì)象。正確的識(shí)別小麥全蝕病，是摸清病害分布及時(shí)采取防治措施的基礎(chǔ)。

一、田間診斷

小麥全蝕病又稱小麥立枯病、黑腳病。是一種根部病害，只侵染根和莖基部1-2節(jié)，病株地上部矮化，變黃，重者枯死，造成白穗。（1）幼苗期。幼苗感病后，植株矮小，下部黃葉多，種子根和初生地中莖變?yōu)榛液谏?，?yán)重時(shí)造成麥苗連片枯死。（2）分蘗期。冬麥病苗返青遲緩、分蘗少，病株根部大部分變黑，在莖基部及葉鞘內(nèi)側(cè)出現(xiàn)較明顯的灰黑色菌絲層。（3）抽穗灌漿期。抽穗后田間病株成簇或點(diǎn)片狀發(fā)生早枯白穗，病根變黑，易于拔起。在莖基部表面及葉鞘內(nèi)側(cè)布滿緊密交織的黑褐色菌絲層，呈“黑腳”狀，后顏色加深呈黑膏藥狀，上密布黑褐色顆粒狀子囊殼。該病與其他小麥根病區(qū)別在于種子根和次生根變黑腐敗，莖基部生有黑膏藥狀的菌絲體。

二、病原

Gaeumannomyces graminis（Sacc.）Art et Oliver var.tritici（Sacc.）Walker稱核頂囊殼小麥變種，屬子囊菌亞門真菌。小麥變種的子囊殼群集或散生于衰老病株莖基部葉鞘內(nèi)側(cè)的菌絲束上，燒瓶狀，黑色，周圍有褐絲菌環(huán)繞，頸部多向一側(cè)彎曲，有具緣絲的孔口外露于表皮，子囊殼在子座上常不連生。子囊平等排列子囊腔內(nèi)，早期子囊間有擬側(cè)絲，后期消失，棍棒狀，無色。子囊孢子成束或分散排列，絲狀，無色，略彎，具3-7個(gè)假隔膜。成熟菌絲栗褐色，隔膜較稀疏，呈銳角分枝，主枝和側(cè)枝交界處各生一個(gè)隔膜，成倒“V”形。

三、病原菌鑒定

小麥全蝕病的識(shí)別，只靠田間癥狀診斷還不能確診，這里介紹室內(nèi)的病原鑒定法：

1.全蝕病菌的分離方法

用室內(nèi)組織培養(yǎng)法，可以測定小麥全蝕病菌的死活和在病組織上的存活時(shí)間，也可作為篩選防治小麥全蝕病藥劑的一種方法。小麥全蝕病菌在PDA（馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖）培養(yǎng)基上可以正常生長。分離時(shí)每平板加一至二滴25%乳酸或二百個(gè)單位鏈霉素，以抑制雜菌生長。組織表面消毒，新鮮材料用0.1%硝酸銀（AgNO3）處理5min，舊材料用1%硝酸銀處理5min，然后用無菌水沖洗三次移入平板。分離所用的材料以剝除葉鞘的病莖（切成3mm小段）及新病根最好。

2.全蝕病菌培養(yǎng)

將分離好的平板放入光照培養(yǎng)箱，25℃和每日14h光照培養(yǎng)，3-4d后長出菌絲，再把菌絲沿邊緣挑出放入新的PDA平板繼續(xù)培養(yǎng)，7d左右得到全蝕菌菌落。在PDA培養(yǎng)基上，菌落灰黑色，菌絲束明顯，菌落邊緣菌絲向中心反卷。

四、柯赫氏法則驗(yàn)證全蝕病菌

1.玉米粉、砂培養(yǎng)基的制作，擴(kuò)大培養(yǎng)全蝕病菌

將玉米粉、砂子和水按1：1.5：l（容量）玉米粉、砂、水按1：1.5：1的比例混合均勻，裝入三角瓶（每瓶裝容量的三分之一），滅菌2h后進(jìn)行接菌，將斜面或平皿培養(yǎng)的病原菌，在無菌條件下，移入三角瓶，置于25℃溫箱中培養(yǎng)30d。，待菌絲長滿時(shí)，平行搖動(dòng)一次，使菌絲體均勻生長。

2.滅菌土的準(zhǔn)備

取一定量的土壤放置在托盤內(nèi)，土壤厚度要均勻，放在干熱滅菌箱內(nèi)進(jìn)行干熱滅菌，160℃連續(xù)滅菌4h，放涼后備用。

3.接種采用兩種接種方法

（1）菌餅接種法：選大小均一的種子，用70%的酒精消毒7min，滅菌水充分洗滌后催芽備用。將滅菌土壤裝人塑料花盆中，表面壓平；從培養(yǎng)10d的PDA平板上，沿菌絲生長邊緣打取直徑Icm的菌餅，放到花盆內(nèi)，菌面向上，每盆5個(gè)菌餅；再將萌芽種子的根端置于菌餅上，每餅1粒種子；最后用滅菌砂子覆蓋。每個(gè)菌種接種3盆。于25℃和每日14h光照下培養(yǎng)30d。

（2）玉米砂接種法：選大小均一的種子，用70%的酒精消毒7min，滅菌水充分洗滌后備用。將滅菌土裝人塑料花盆中，然后將培養(yǎng)好的玉米砂接種體按1%的比例與滅菌土混勻，將麥種播入花盆中，每盆播10粒，每個(gè)菌種接種3盆，培養(yǎng)條件與菌餅接種法相同。

4.分離病原菌并鑒定

盆栽試驗(yàn)在播種后1個(gè)月調(diào)查發(fā)病情況。將發(fā)病小麥根部的材料洗凈，晾干，剪成3-5mm長的小段，進(jìn)行表面消毒。用硝酸銀（AgNO3）作表面消毒劑，材料可用0.1%的溶液消毒3-5min。用無菌水沖洗3次，移入平皿，置25℃恒溫箱中培養(yǎng)。每天觀察材料發(fā)病情況，發(fā)現(xiàn)材料長出菌絲后，挑出接入單皿，培養(yǎng)5-7d后鏡檢，該菌是否和原始菌為同一菌。

參考文獻(xiàn)

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