P53、MDM2在基底細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

艾東方 馮世軍 馬敬

[摘要]目的：研究p53和MDM2蛋白在皮膚基底細(xì)胞癌中的表達(dá)，探討基底細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。方法：選取50例基底細(xì)胞癌標(biāo)本，30例正常皮膚組織。采用免疫組化S-P法檢測(cè)p53與MDM2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：p53、MDM2蛋白在基底細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為58%（29/50）、46%（23/50），與正常皮膚組織比較，有顯著性差異（P<0.05）?；准?xì)胞癌組織中p53蛋白的表達(dá)與MDM2蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.460）。結(jié)論：p53和MDM2蛋白在基底細(xì)胞癌中的異常表達(dá)，說(shuō)明在基底細(xì)胞癌的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中起重要作用。

[關(guān)鍵詞]p53；MDM2；基底細(xì)胞癌；免疫組織化學(xué)

[中圖分類(lèi)號(hào)]R739.5[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2012）06-0939-03

基底細(xì)胞癌（BCC）大約占所有皮膚癌的75%，而且以3%～8%的速度逐年遞增，BCC好發(fā)于頭頸部，雖然生長(zhǎng)緩慢，很少轉(zhuǎn)移，但卻有毀損性。BCC的發(fā)生是多基因相互作用的結(jié)果，目前，在其他多種腫瘤中可以檢測(cè)到突變型p53和MDM2的表達(dá)，而對(duì)于二者在BCC組織中的表達(dá)情況及相關(guān)性，則研究較少。我們?cè)诖瞬捎妹庖呓M織化學(xué)方法檢測(cè)了p53、MDM2在BCC組織及正常皮膚組織中的表達(dá)情況，探討p53、MDM2在BCC發(fā)病中的意義。

1資料和方法

1.1 一般資料：組織標(biāo)本來(lái)自2005年10月～2009年10月期間滄州市中心醫(yī)院門(mén)診及住院患者，手術(shù)切除后經(jīng)病理證實(shí)為BCC。50例BCC中，男性26例，女性24例，年齡36～82歲，平均62.34歲，病程6個(gè)月～12年，平均40.25個(gè)月，頭面部42例(84%)，軀干部位8例(16%)。排除標(biāo)準(zhǔn)：取材前1年內(nèi)腫瘤經(jīng)過(guò)放射線治療；取材前3個(gè)月內(nèi)局部應(yīng)用過(guò)咪喹莫特、干擾素等藥物或系統(tǒng)應(yīng)用過(guò)維甲酸等化療性藥物。另選取正常人包皮手術(shù)切除標(biāo)本30例，年齡18～40歲，平均23歲。

1.2 研究方法：手術(shù)切除標(biāo)本均經(jīng)10%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚度4μm，使用S-P免疫組化染色方法對(duì)切片進(jìn)行染色，免疫組化操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。鼠抗人p53單克隆抗體及鼠抗人MDM2單克隆抗體均購(gòu)自上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司。用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用堿性磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷：p53免疫組化陽(yáng)性信號(hào)位于細(xì)胞核，呈棕黃色或棕褐色，MDM2免疫組化陽(yáng)性信號(hào)位于細(xì)胞核或胞漿，呈棕黃色，染色結(jié)果參照文獻(xiàn)[1]評(píng)分方法，高倍鏡下取5個(gè)不同視野，各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)分：陽(yáng)性數(shù)＜5%為0；35%＞陽(yáng)性數(shù)≥5%為1；70%＞陽(yáng)性數(shù)≥35%為2；陽(yáng)性數(shù)＞70%為3。著色強(qiáng)度計(jì)分：不著色為0，弱著色（呈淡棕黃色）為1，強(qiáng)著色（呈明顯的棕黃色）為2。陽(yáng)性分級(jí)：以上兩項(xiàng)相加，0～1分為(-)，2分為(±)，3分為(+)，4分為(++)，5分為(+++)，-～±記為陰性，+～+++記為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，p53和MDM2陽(yáng)性百分率的比較采用計(jì)數(shù)資料的χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

2.1 正常皮膚組織中p53蛋白表達(dá)率為0(0/30)；BCC組織中p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為58%(29/50)(見(jiàn)圖1、2)，癌組織中p53蛋白陽(yáng)性率與正常皮膚組織相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2正常皮膚組織中MDM2蛋白表達(dá)率為0(0/30)；BCC組織中MDM2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為46%(23/50)(見(jiàn)圖3、4)，癌組織中MDM2蛋白陽(yáng)性率與正常皮膚組織相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3p53蛋白與MDM2蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析，p53蛋白與MDM2蛋白有一個(gè)比較高的共同表達(dá)率，在50例BCC組織中有19例共同表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為38%，通過(guò)相關(guān)分析表明，二者在BCC組織中的表達(dá)有明顯的相關(guān)性（P<0.05），見(jiàn)表3。

3討論

p53與基底細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系：p53蛋白分為野生型和突變型兩種，野生型p53阻礙受損傷細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期，抑制細(xì)胞的分裂和增殖，使受損的DNA有時(shí)間修復(fù)，或啟動(dòng)程序性死亡過(guò)程，防止細(xì)胞惡變，在p53基因缺失或突變的細(xì)胞，受損傷的DNA無(wú)法通過(guò)p53介導(dǎo)的途徑停止在G1期進(jìn)行修復(fù)，細(xì)胞的遺傳信息受阻，導(dǎo)致惡性轉(zhuǎn)化、增殖以及腫瘤的發(fā)生，但由于野生型p53基因的半衰期短，不易被檢測(cè)出，而突變型p53基因半衰期長(zhǎng)，所以一般認(rèn)為，免疫組化法陽(yáng)性的就表示存在突變型p53基因。BCC由正常角質(zhì)形成細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化而成，好發(fā)于曝光部位，過(guò)度紫外線照射是誘因之一，研究證明BCC存在p53突變，且大多數(shù)為光突變（C→T或CC→TT轉(zhuǎn)換），光照導(dǎo)致的p53基因突變參與光致癌過(guò)程。P53蛋白在BCC中的陽(yáng)性表達(dá)率報(bào)道結(jié)果不一，Gorji[2]認(rèn)為p53陽(yáng)性率為48.5%，而Adamkov[3]報(bào)道p53蛋白的陽(yáng)性率可高達(dá)90.3%，另有研究表明[4]p53的表達(dá)可以作為預(yù)測(cè)BCC侵襲性的一個(gè)標(biāo)記，而與患者年齡和腫瘤部位沒(méi)有相關(guān)性。我們的試驗(yàn)結(jié)果顯示：p53蛋白在BCC中的陽(yáng)性表達(dá)率為58%(29/50)，相對(duì)與Gorji的研究結(jié)果相近，和正常皮膚組織p53蛋白表達(dá)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明p53參與BCC的發(fā)病過(guò)程。

MDM2與基底細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系：MDM2是癌基因，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)有調(diào)節(jié)作用，參與細(xì)胞的基本生理活動(dòng)，但在正常組織中MDM2蛋白的表達(dá)水平很低，MDM2基因突變或表達(dá)異常后則會(huì)引起細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤的發(fā)生[5]，一方面，MDM2基因通過(guò)其編碼的P90蛋白與野生型p53基因結(jié)合，使p53基因失去正常功能，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[6]；另一方面，MDM2本身也可以通過(guò)數(shù)個(gè)非p53依賴(lài)性作用方式直接致癌。早期研究認(rèn)為只有在無(wú)p53突變的腫瘤中，才能夠有較高水平的MDM2基因擴(kuò)增以及相應(yīng)mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，然而近年來(lái)越來(lái)越多的具有p53突變的腫瘤也被發(fā)現(xiàn)存在MDM2蛋白的過(guò)度表達(dá)。BCC具有較高的p53突變率，Cho HS[7]報(bào)道MDM2蛋白在BCC中的陽(yáng)性表達(dá)率為50%，其中，MDM2(+)/p53(+)占39%，顯示MDM2蛋白在BCC中有較高的表達(dá)，并且與p53蛋白的表達(dá)有一個(gè)較密切的關(guān)系，近期，Almquist[8]分析了902例基底細(xì)胞癌和676例鱗狀細(xì)胞癌，發(fā)現(xiàn)攜帶MDM2SNP309G等位基因伴隨一個(gè)升高的非黑素瘤皮膚癌的風(fēng)險(xiǎn)。我們的試驗(yàn)結(jié)果顯示：MDM2蛋白在BCC中的陽(yáng)性表達(dá)率為46%(23/50)，與Cho HS的研究結(jié)果相近，和正常組織MDM2蛋白表達(dá)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明MDM2參與了BCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

p53與MDM2在基底細(xì)胞癌發(fā)病過(guò)程中的相互關(guān)系：腫瘤的發(fā)生、發(fā)展較為復(fù)雜，其中涉及到原癌基因的激活和抑癌基因的失活以及二者之間的相互作用，本試驗(yàn)表明p53和MDM2表達(dá)升高在BCC發(fā)病過(guò)程中扮演著重要角色，由于BCC好發(fā)于老年人，推測(cè)在BCC發(fā)病過(guò)程中，長(zhǎng)期的紫外線照射等誘因促使p53基因突變，突變型p53不能修復(fù)受損的DNA，DNA損傷后，激活MDM2并促使其表達(dá)，而MDM2降解突變型p53的能力減弱，導(dǎo)致突變型p53蛋白與MDM2蛋白的慢性蓄積，并反復(fù)加重此循環(huán)過(guò)程，最終引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化、增殖及腫瘤形成。在MDM2(+)/p53(-)病例，推測(cè)MDM2通過(guò)表達(dá)P90蛋白并與野生型p53蛋白結(jié)合，使野生型p53功能喪失，同樣不能使受損的DNA恢復(fù)正常，而且，作為癌基因的MDM2，有可能與啟動(dòng)整個(gè)細(xì)胞周期的基因啟動(dòng)子結(jié)合，使細(xì)胞從G1期向S期轉(zhuǎn)化，引起細(xì)胞成瘤性增強(qiáng)。由于BCC的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多基因相互作用的復(fù)雜過(guò)程，在均無(wú)MDM2、p53表達(dá)的病例，可能有不依賴(lài)于二者的作用機(jī)制促進(jìn)了BCC的發(fā)病，目前仍需要進(jìn)一步的研究。

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[收稿日期]2012-03-06[修回日期]2012-04-21

編輯/張惠娟