針刺對光老化大鼠皮膚組織CAT、GSH-Px和H2O2影響的實驗研究

張小卿 陶冶 田國偉 吳景東

[摘要]目的：研究針刺對UV照射引起的皮膚光老化大鼠皮膚組織中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）和過氧化氫（H2O2）的含量的變化，探討針刺對抗皮膚光老化的作用機理。方法：將大鼠隨機分成4組，除正常組外，其余各組模擬日光中UV（UVA+UVB）照射，造成皮膚光老化模型，每次造模前，針刺組給予電針刺激，陽性對照組采用VE涂抹造模部位，15周后對比各組生化指標結果。結果：模型組與正常組比較大鼠皮膚組織中CAT、GSH-Px活性明顯降低，H2O2含量明顯增加(P＜0.05)；針刺組與模型組比較CAT、GSH-Px活性增加，H2O2含量明顯降低(P＜0.05)，與VE組比較無統計學意義（P＞0.05）。結論：針刺可延緩UV引起的大鼠皮膚光老化，能增強皮膚組織中CAT、GSH-Px活性，降低H2O2含量。

[關鍵詞]針刺；光老化；過氧化氫酶；谷胱甘肽氧化酶；過氧化氫

[中圖分類號]R332 R758[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2012）06-0958-02

光老化導致皮膚過早出現干燥粗糙、皮溝加深、毛細血管擴張及色素異常沉著等損美性癥狀，嚴重影響了人們的外貌美觀，針刺通過經絡-腧穴的全身整合作用在美容抗衰老的治療方面有突出療效,可引起人體各系統生理、生化水平上多項指標同步變化。為了探討針刺治療皮膚光老化作用機理，本實驗通過測定光老化大鼠皮膚組織中與衰老有關的CAT、GSH-Px的活性及H2O2的含量來研究針刺抗氧化、延緩衰老的作用。

1材料和方法

1.1 實驗動物與分組方法：健康雄性SD大鼠40只，體重（220±25）g，由遼寧中醫藥大學實驗動物中心提供。隨機分為4組，每組10只，分別為正常組、模型組、針刺組、VE組。各組每5只放入一籠飼養，常規飼食和飲水，無不良因素影響，在相同的自然環境下飼養1周，待其適應實驗室環境后開始進行實驗。

1.2 主要試劑及設備：自制紫外線燈箱(40WUVB燈管4根，光譜集中在297nm；40WUVA燈管2根光譜集中在365nm)，UV輻照計(臺灣路昌)，6805D電針儀，勁霸電推剪；CAT試劑盒、GSH-Px試劑盒、H2O2試劑盒（南京建成生物有限公司）；維生素E膠丸（天海藥業）；-70℃冰箱、勻漿器、離心機、恒溫水浴箱、分光光度計均由遼寧中醫藥大學實驗教學中心提供。

1.3 實驗方法：模型組大鼠不予任何治療。針刺組大鼠在密封罐中用乙醚麻醉，昏迷后取出在大鼠固定架上捆綁，以28號0.5寸毫針針刺大鼠雙側“脾俞”、“腎俞”、“足三里”穴，直刺8mm，疏密波，刺激時間20min，以大鼠肢體或針柄微微顫動為度，每日一次,于針刺后30min開始造模。VE組大鼠于造模前30min，在背部剪毛區域內涂抹VE后造模。

1.4 造模方法：參考楊汝斌[1]SD大鼠皮膚光老化動物模型劑量及方法，每只大鼠均用電推剪剪除大鼠背部5.0cm×5.0cm區域內毛發，以后每次照射前用剃須刀剃除該部位的毛發。動物適應性喂養1周后，第2周開始將模型組、針刺組、VE組大鼠放入自制照射箱中，并置于距離光源30cm處的水平面上，第2周每天照射2h，第3～7周每天照射4h，第8～12周每天照射6h，照射以5天為一個周期，間隔2天，再開始下一個周期。至13周時終止UV暴露(UVA 照射強度累計為148.47J/cm2，UVB 輻照強度累計為48.67J/cm2)，繼續觀察1周。造模過程中每天觀察動物背部皮膚有無水皰及糜爛等，如果出現上述癥狀，立即停止照射2～3天，至上述癥狀消失后再繼續照射，直至造模成功。

1.5取材：15周后將各組大鼠斷頸處死，迅速取背部光老化處皮膚組織全層,保存于-70℃冰箱中待測。

1.6 生化指標測量：紫外分光光度計分別測定各組大鼠皮膚組織中CAT、GSH-Px和H2O2的含量。

1.7 統計學方法：本實驗數據采用SPSS（16.0）軟件，運用多個樣本均數比較的方差分析檢驗，數據以x±s表示，并用最小顯著差法（LSD法）作兩兩比較。

2結果與分析

2.1 各組大鼠皮膚組織中CAT活性比較：從表1可見，模型組大鼠皮膚組織中CAT活性明顯降低，與正常組比較有統計學意義 (P＜0.05)；而針刺組CAT活性與模型組比較結果有差異(P＜0.05)，與正常組比較結果無差異(P＞0.05)，提示針刺提升了光老化大鼠皮膚組織中CAT活力，具有抗皮膚光老化作用，其療效優于維生素E外用。

2.2 各組大鼠皮膚組織中GSH-Px活力比較：模型組大鼠皮膚組織中GSH-Px活力明顯降低，與正常組比較有統計學意義 (P＜0.05)；而針刺組和VE組GSH-Px活力分別與正常組和模型組比較均有差異(P＜0.05)，提示針刺和局部外涂維生素E均能提升光老化大鼠皮膚組織中GSH-Px活力,二者療效相似。

2.3 各組大鼠皮膚組織中H2O2含量比較：模型組大鼠皮膚組織中H2O2含量增加，與正常組比較有統計學意義(P＜0.05)；針刺組H2O2含量和模型組比較有差異(P＜0.05)。提示針刺在一定程度上可以降低光老化大鼠皮膚組織中H2O2含量療效顯著。

3討論

光老化是由于皮膚長期暴露于紫外線下而造成的慢性損傷。紫外線中UVB 可以直接作用于DNA，使其吸收能量，發生突變；而UVB與UVA產生的活性氧簇（ROS）可以間接損傷細胞核及線粒體DNA，導致細胞功能異常或凋亡。ROS分為兩大類：自由基（例如：超氧自由基和羥自由基），非自由基成分（單線態氧和過氧化氫）。UVA 和UVB均可導致皮膚細胞膜附近產生ROS[2]。UV照射產生的ROS氧化損傷蛋白質及脂質，引起相應功能及結構的異常[3]。

CAT是一種酶類清除劑，它可促使H2O2分解為分子氧和水，清除體內的過氧化氫，從而使細胞免于遭受H2O2毒害，是生物防御體系的關鍵酶之一。GSH-Px是機體內廣泛存在的一種重要的催化過氧化氫分解的酶。它特異的催化還原型谷胱甘肽（GSH）對過氧化氫的還原反應，可以起到保護細胞膜結構和功能完整的作用。

本課題組前期工作[4-6]曾研究過中藥提取物（如白藜蘆、葛根）對自然衰老小鼠皮膚組織中GSH-Px、抗超氧陰離子自由基、ATP酶、H2O2等指標的影響，結果均證實上述中藥具有清除自由基和提升相關酶類活性的作用。本研究以皮膚光老化大鼠作為研究對象，探討了針刺對細胞內抗氧化酶系CAT和GSH-Px的影響。結果表明了針刺可以提高光老化大鼠皮膚組織中CAT和GSH-Px的活力，從而降低H2O2對皮膚細胞的損傷，起到抗皮膚光老化的作用。

[參考文獻]

[1]楊汝斌,萬屏,劉玲,等．SD大鼠皮膚光老化動物模型建立方法的探索[J].中國皮膚性別學雜志,2011,25(3):199-202．

[2]Emri G,Horkay I,Remenyik E.The role of free radicals in the UV-induced skin damage [J].Photoaging Orv Hetil,2006,147(16):731-735.

[3]廖勇.皮膚光老化的分子機制[J].中國美容醫學,2010,19(3)：444- 447.

[4]王培,吳景東,張惠淑,等.白藜蘆醇對自然衰老小鼠H2O2含量和ATP酶活力影響的實驗研究[J].中國美容醫學,2010,19(1):63-64.

[5]張效莉,吳景東.白藜蘆醇對衰老小鼠GSH和抗超氧陰離子自由基含量變化的影響[J].中國美容醫學,2011,20(4):600-602.

[6]李東子,吳景東,王培.葛根及葛根素對自然衰老小鼠GSH-Px活性變化的實驗研究[J].中國美容醫學,2011,20(12):1921-1922.

[收稿日期]2012-03-08[修回日期]2012-04-23

編輯/張惠娟