CK19 mRNA表達水平在乳腺癌微轉移檢測及治療監測中的應用

唐亨力　區奕猛　余炯標

[摘要] 目的 探討細胞角蛋白CK19 mRNA表達水平在乳腺癌微轉移檢測及治療監測中的應用。方法 選擇我院2004年2月～2011年8月健康體檢者30例作為對照組，同時選擇良性乳腺腫瘤30例，乳腺癌30例，對健康體檢者、30例良性乳腺腫瘤和30例乳腺癌患者進行外周血中CK19 mRNA水平檢查，統計比較組間的差異。結果 CK19 mRNA在乳腺癌組表達明顯高于良性乳腺疾病組，乳腺癌淋巴結轉移組明顯高于無淋巴結轉移組，差異均有統計學意義（P < 0.05）。結論 FQ-PCR檢測CK19 mRNA對乳腺癌診斷特異性較高，具有確切的預測價值，可有效監測乳腺癌微轉移和療效，臨床值得推廣。

[關鍵詞] 乳腺癌微轉移；CK19 mRNA；預測

[中圖分類號] R737.9[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）21-0022-02

CK19作為上皮組織來源的組織特異性指標，近年來研究發現CK19的異常表達與乳腺癌的微轉移及其療效具有密切關系[1-3]。FQ-PCR可以進行核酸定量分析，靈敏性高、特異性高，具有同時進行擴增和檢測的雙重優勢，診斷乳腺癌微轉移具有一定的臨床應用價值，引起人們的廣泛關注。選擇我院2004年2月～2011年8月健康體檢者30例作為對照組，同時選擇良性乳腺腫瘤患者30例，乳腺癌患者30例，對健康體檢者、30例良性乳腺腫瘤患者和30例乳腺癌患者進行外周血中CK19 mRNA水平檢查，統計比較組之間的差異，現總結報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2004年2月～2011年8月健康體檢者30例作為對照組，同時選擇良性乳腺腫瘤患者30例，乳腺癌患者30例，對健康體檢者、30例良性乳腺腫瘤患者和30例乳腺癌患者進行外周血中CK19 mRNA水平檢查，統計比較組間的差別。入選者均心、肺、肝、腎等功能健全；30例乳腺癌患者均經病理確診。兩組間患者年齡比較差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2方法

術前1周內取晨血5 mL，為抗凝加少量的EDTA(1 mg/mL)，生理鹽水稀釋2倍，借助淋巴細胞分離液將淋巴細胞分離完全，提取細胞總RNA[3]。并設計CK19的引物和探針。逆轉錄反應體系50 μL，在分析儀上對標本、陽性對照、陰性對照和標準品進行擴增和分析。采用Bieche的標準曲線制備方法，線性范圍：（1 022～1 066）/mL。儀器根據標準曲線自動計算出標本中CK19的拷貝數/ mL，定量分析GAPDH的拷貝數/mL，CK19/GAPDH比值。

1.3統計學方法

數據使用SPSS17.0統計學軟件，多組間計量資料比較采用方差分析,兩兩比較進行t檢驗,計數資料采用卡方檢驗,P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1對照組與疾病組CK19測定結果

表1可見，CK19在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組（P < 0.05）；CK19/GAPDH在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組（P < 0.05）；GAPDH組間差異不明顯。

表1 對照組與疾病組CK19測定結果（x±s）

注：乳腺癌組與良性乳腺疾病組比較具有統計學意義（▲P ＜0.05）

2.2比較FQ-PCR和RT-PCR用于乳腺癌微轉移診斷的評價

我們比較了RT-PCR法和FQ-PCR兩種方法檢測乳腺癌靈敏度，表明FQ-PCR對乳腺癌診斷的靈敏度、特異性顯著高于RT-PCR法（P < 0.05）。見表2。

表2 兩種方法對乳腺癌靈敏度、特異性比較

注：兩組比較具有統計學意義（▲P ＜0.05）

3 討論

近年來分子生物學廣泛應用，現代醫學認為角蛋白19是一種酸性蛋白[4-6]。CK19在正常上皮和各種上皮來源的腫瘤中，均會有表達，但是在正常情況下，外周血、骨髓、淋巴結內不會表達。CK19在甲狀腺癌、肝膽管細胞癌、肝細胞癌、非小細胞肺癌、肺鱗狀細胞癌等均有不同程度的表達，特別是在肺鱗狀細胞癌中的診斷、監測、預后起重要作用。如果外周血中檢測發現有CK19 mRNA，表明腫瘤細胞已經進入血液，說明腫瘤轉移。目前在臨床上已肯定CK19 mRNA表達水平在乳腺癌診斷及治療監測中的應用價值[7,8]。

本研究結果顯示，CK19在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組，CK19/GAPDH在乳腺癌組明顯高于良性乳腺疾病組（P < 0.05），GAPDH組間差異沒有明顯差異（P ＞ 0.05）；表明CK19 mRNA表達水平明顯減弱。我們比較了RT-PCR法和FQ-PCR兩種方法檢測結果，表明FQ-PCR對乳腺癌診斷的靈敏度顯著高于RT-PCR法。

綜上所述，CK19的基因表達水平可有效監測乳腺癌微轉移和療效，FQ-PCR法不僅具有普通PCR的高靈敏性，而且由于熒光探針的作用，可以獲得定量的結果，所以FQ-PCR還具有DNA雜交的高特異性和光譜技術的高精確性，結果更加可靠，檢驗更加方便。可以有效地用于乳腺癌檢測。健康人與乳腺癌微轉移患者之間CK19的基因表達水平具有明顯差異；同時，外周血CK19 mRNA的表達水平，為臨床判斷乳腺癌血行轉移的高危險因素的患者提供參考指標，也為患者的個體化治療提供依據。我們認為CK19 mRNA表達水平對預測乳腺癌微轉移具有重要價值，值得推廣應用。

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（收稿日期：2012-05-14）