山菠蘿藥材中總黃酮的含量測定※

黎永潔鐘 鳴

山菠蘿藥材中總黃酮的含量測定※

黎永潔1鐘 鳴2

目的建立紫外分光光度法測定山菠蘿總黃酮的方法。方法采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色劑，在波長 505nm 處對山菠蘿藥材中總黃酮進行含量測定。結果總黃酮在 0.025～0.124mg/ml范圍內線性關系良好（r=0.9992）；該法的平均加樣回收率為99.27%，RSD=0.83%（n=9）；山菠蘿藥材中總黃酮的平均含量為13.75mg/g，3批藥材含量差異較大（RSD=8.77%，n=3）。結論紫外分光光度法簡便快速，穩定可靠，適用于山菠蘿中總黃酮的含量測定。

山菠蘿；紫外分光光度法；總黃酮；含量測定

山菠蘿（Pandanus odoratissimus）為露兜樹科（Pandanaceae）植物露兜樹（Pandanus tectorius Soland）的根部，廣東、廣西和云南均有出產，民間用于感冒發熱、腎炎水腫、泌尿系統感染等病癥的治療[1]。目前國內外對山菠蘿的化學成分以及質量控制方面的研究報道甚少，曲文浩等[2]對山菠蘿的化學成分進行研究，從該植物的根及根莖乙醇提取物中分離得到四個甾體化合物。鑒于山菠蘿具有潛在的藥用價值，因此很有必要對山菠蘿的化學成分等方面進行研究。筆者針對山菠蘿化學成分進行預試驗，發現山菠蘿含有黃酮類化合物。眾所周知，該類化合物具有廣泛的生物活性和藥理作用，包括抗心肌缺血及再灌注損傷、改善冠脈血流量、降低血脂、清除自由基、抗氧化、抗過敏、抗病毒等[3]，推測黃酮類成分可能與山菠蘿的藥理活性密切相關。為進一步研究該植物的黃酮類成分，本文采用紫外分光光度法測定山菠蘿總黃酮的含量，該法穩定、簡便、快速，為山菠蘿的藥材質量控制提供試驗依據。

1 儀器與試藥

Agilent 8453型可見-紫外分光光度計（Agilent公司）；BS1103電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SB-4200DTS型超聲波清洗儀（寧波新芝生物科技股份超聲儀器有限公司）；LK-400B中藥粉碎機（上海新諾儀器設備有限公司）。山菠蘿（采于廣西靖西縣，鑒定為露兜樹科 Pandanaceae植物露兜樹 Pandanus tectorius Soland的根，批號分別為20100727、20101018、20110314）；蘆丁對照品（供含量測定用，購于中國藥品生物制品檢定所，批號100080-200306）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1溶液的制備

2.1.1對照品溶液的制備稱取經 120℃干燥至恒重的蘆丁對照品約 12mg，精密稱定，加甲醇適量使溶解，轉移入50ml量瓶中，用甲醇定容，搖勻，制成每1ml含蘆丁0.248mg的對照品溶液。

2.1.2樣品溶液的制備[4-5]取山菠蘿干藥材適量，粉碎，過2號篩，取2～3號篩之間的粉末約2g，精密稱定，加95%乙醇25ml，水浴回流提取2次，每次1.5h，濾過，合并濾液，揮干，殘渣加70%乙醇25ml使溶解，轉移至分液漏斗中，加石油醚萃取3次（20ml/次）去除脂溶性雜質，將乙醇水溶液相轉移至 50ml量瓶中，加70%乙醇定容至50ml，搖勻，即得。

2.2波長的選擇吸取樣品溶液1.00ml，加入5%亞硝酸鈉溶液1.00ml，搖勻，加入10%硝酸鋁溶液1.00ml，搖勻，加入4%氫氧化鈉溶液2.00ml，以試劑為空白參比溶液，在400～800nm波長范圍掃描絡合物的吸收光譜。結果顯示，絡合物于505nm波長處有最大吸收，故測定波長定為505nm。

2.3標準曲線的繪制精密吸取蘆丁對照液（0.248mg/ml）0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml分別置于 10ml量瓶中，加入 5%亞硝酸鈉溶液1.00ml，搖勻，加入10%硝酸鋁溶液1.00ml，搖勻，加入4%氫氧化鈉溶液2.00ml，搖勻，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置10min，制得5份標準溶液。以試劑溶液作為空白對照，于505nm處測定吸光度。對吸光度（A）和標準溶液濃度（C，mg/ml）進行線性回歸。回歸方程為 A=8.0926 C-0.0058（r=0.9992），線性范圍為0.025～0.124mg/ml。

2.4精密度試驗精密吸取樣品溶液1.00ml，置于10ml量瓶中，共6份，按標準曲線的繪制項下自“加入5%亞硝酸鈉溶液”起，同法操作，測定吸光度，計算總黃酮含量。總黃酮含量為 0.060mg/ml，RSD=0.83%（n=6），表明該儀器精密度良好。

2.5穩定性試驗精密吸取樣品溶液1.00ml，置于10ml量瓶中，按標準曲線的繪制項下自“加入5%亞硝酸鈉溶液”起，同法操作，分別于0、10、20、30、40和60min在505nm處測定吸光度。結果顯示吸光度 RSD=0.66%（n=6），提示樣品在 60min內穩定。

2.6重復性試驗精密吸取同一批山菠蘿藥材粉末6份，按照2.1.2項下制備樣品，分別取1.00ml，按標準曲線的繪制項下自“加入5%亞硝酸鈉溶液”起，同法操作，在505nm處測定吸光度，依據吸光度計算出總黃酮含量。山菠蘿中總黃酮含量平均值為15.01mg/g，RSD=0.95%（n=6）。

2.7加樣回收率試驗精密吸取已知總黃酮含量（15.01mg/g）山菠蘿粉末約1g，共 9份，精密稱定，分別加入蘆丁對照品，按照2.1.2項下樣品溶液的制備得到樣品溶液，精密吸取樣品溶液1.00ml，按標準曲線的繪制項下自“加入5%亞硝酸鈉溶液”起，同法操作，在505nm處測定吸光度，并計算加樣回收率。平均加樣回收率為99.27%，RSD=0.83%（n=9），結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果（n=6）

2.8樣品總黃酮的測定取不同批次的山菠蘿粗粉約2g，平行2份，共6份，精密稱定，按“2.1.2樣品溶液的制備”項下制備樣品液，分別精密吸取樣品液1.0ml，置于10ml量瓶中，按標準曲線的繪制項下自“加入5%亞硝酸鈉溶液”起，同法操作，測定吸光度，計算樣品中總黃酮的含量，取平均值。不同批次的山菠蘿中總黃酮的平均含量為 13.75 mg/g，結果見表2。

表2 山菠蘿藥材中總黃酮含量（n=3）

3 討論

黃酮類化合物廣泛存在于中草藥中，并具有顯著生物活性和藥理作用，測定方法較多，有紫外可見分光光度法、比色法、差示分光光度法、雙波長和導數分光光度法及色譜測定方法等[3]。本實驗采用紫外可見分光光度法[6]測定山菠蘿總黃酮含量的方法，以蘆丁為對照品，以亞硝酸鈉—硝酸鋁—氫氧化鈉作為顯色劑，在樣品溶液制備過程中，選用強親脂性溶劑石油醚去除一些親脂性的雜質，可以減少對測定的干擾。該法操作簡便、快速、穩定、可靠，為進一步研究該植物成分與質量控制提供理論依據。本文選用的3批山菠蘿藥材均采自廣西靖西縣，在3個時間點（2010年7月27日、2010年 10月18日和2011年3月14日）采集，含測數據（見表 2）顯示，10月份采集的山菠蘿（批號20101018）中總黃酮稍高，3批含測數據結果差異較大（RSD=8.77%），提示采集時間影響總黃酮的含量。應進一步考察產地、采集時間對山菠蘿總黃酮含量的影響。

[1]江蘇新醫學院.中藥大辭典[M].下冊.上海:上海人民出版社,1977:2738.

[2]曲文浩,王玉鈺,王明時.山菠蘿化學成分研究[J].中國藥科大學學報,1990,21(1):51-52.

[3]田永利,許志宇,葛林,等.總黃酮類化合物含量測定方法和藥理作用研究進展[J].河北醫藥,2010,32(5):2094-2096.

[4]童聲,范杰平,徐薇,等.江西道地藥材車前草中總黃酮超聲輔助提取研究[J].時珍國醫國藥,2012,23(3):553-555.

[5]楊鵬,巨敏,朱沛沛,等.正交優化微波輔助提取枸杞中總黃酮的工藝研究[J].食品工業,2012(1):28-30.

[6]姜秀娟,唐金成,白紅進.可見分光光度法測定刺山柑花蕾中總黃酮含量[J].食品科學,2010,31(18):252-254.

Determine of Total Flavonoids from Pandanus tectorius Soland

Li Yongjie Zhong Ming

ObjectiveTo establish the method of the UV spectrophotometry for determination of total flavonoids from Pandanus tectorius Soland.MethodsAdopted the UV spectrophotometry,Rutin as reference substance and through chromogenic reagent color at the 505nm wavelength determining the total flavonoids.ResultsThe flavonoids have a good linearity in the range of 0.025～0.124mg/ml (r=0.9992).The average recovery was 99.27%,RSD was 0.83% (n=9).The average content of total flavonoids was 13.75mg/g,the difference of the three batches of product content were significantly (RSD=8.77%,n=3).ConclusionThe UV spectrophotometry is simple,rapid,stable and reliable,suitable for the determination of total flavonoids from Pandanus tectorius Soland.

Pandanus tectorius Soland; UV spectrophotometry; Total flavonoids; Determination

1 廣東省中醫院，廣東廣州 510000

2 廣州漢方現代中藥研究開發有限公司，廣東廣州 510240

國家發展和改革委員會2011年國家工程研究中心創新能力建設項目，發改辦高技[2011]1896號。

黎永潔（1969.7-），女，大專，中藥師。主要從事醫院藥學工作。

鐘鳴（1973.2-），男，碩士，制藥高級工程師，主要從事中藥/天然藥物的研究與開發工作。電子郵件：gzmingzhong@126.com