HPLC在中藥及其制劑有效成份分析中的應用

王喜明

HPLC在中藥及其制劑有效成份分析中的應用

王喜明

目的分析HPLC在中藥及其制劑有效成分分析中應用的價值。方法采用HPLC法分析中藥中熊果酸和齊墩果酸的含量。結果熊果酸的平均回收率為102.6%，RSD為0.65%，齊墩果酸的平均回收率為103.4%，RSD為2.06%。結論在進行中藥及其制劑有效成分分析中采用HPLC能夠同時測定出熊果酸和齊墩果酸的含量，可有效用于進行測量中藥材的質量。

高效液相色譜法；中藥；有效成分；熊果酸；齊墩果酸

中藥和中藥制劑中所含的成分非常復雜，并且成分之間的相互干擾非常嚴重，在中藥制劑質量標準和藥材檢驗的研究中，通常采用具有生理活性的化學分成作為控制指標和質量評價的依據。高效液相色譜法（HPLC）是一種分離效率高、分析速度快、應用范圍廣、自動化程度高的一種分析方法，并且 HPLC能夠用于分析樣品中的熱不穩定點、高沸點以及大分子量的有效成分，是中藥及其制劑有效成分含量測定的一種應用廣泛的方法[1]。本文主要研究采用HPLC法測定中藥中熊果酸和齊墩果酸的含量，并測定每種中藥成苷形式或游離形式的含量。

1 儀器與試藥

1.1中藥材女貞子、澤蘭、毛冬青、白花蛇舌草、茵陳、紫蘇、枇杷葉、夏枯草、連翹、山楂等，對照品為熊果酸、齊墩果酸（中國藥品生物制品檢定所）。

1.2檢測儀器高效液相色譜儀 LC-10A，色譜數據工作站采用V4.0+。

1.3色譜條件色譜柱，CLC-ODS150mm× 6.0mm，5μm；流動相：甲醇:水:冰乙酸:三乙胺（87:13:0.04:0.02）。檢測波長 210nm，靈敏度0.05AUFS。在此色譜條件下，熊果酸和齊墩果酸的理論塔板數均＞5000，拖尾因子均＜1.5。

2 方法與結果

2.1醇提取方法分別選取所檢測藥材粉末各1.0g，放置在100ml燒瓶中，加入50ml無水乙醇，水浴加熱回流2h，冷卻、過濾，取續濾液進行測定。

2.2酸解提取方法分別選取所檢測藥材粉末各1.0g，放置在100ml燒瓶中，然后加入鹽酸和50ml乙醇回流提取2h，接著定量轉移到容量瓶中滴加飽和NaOH，使其PH為5.0，乙醇定容、過濾、取續濾液1ml離心，取上清液進行測定[2]。

2.3對照品溶液的制備首先精密選取熊果酸對照品15mg，齊墩果酸對照品10mg，然后將選取的熊果酸和齊墩果酸對照品放進 50ml的容量瓶中，最后采用無水乙醇進行定容，其中熊果酸為1.44mg?ml-1，齊墩果酸0.98mg?ml-1。

2.4精密度試驗首先選取同一批樣品中的同一種藥材 6份并進行精密稱定，樣品中的熊果酸峰面積 RSD為 1.86%，齊墩果酸峰面積 RSD為1.43%。

2.5線性實驗分別吸取熊果酸和齊墩果酸對照溶液0.3ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、10.0ml。然后將選取的熊果酸和齊墩果酸對照品放入容量瓶中，并采用無水乙醇進行定容，測定，以峰面積和對照品的濃度進行線性回歸，其熊果酸和齊墩果酸的線性回歸的計算方程式為：A=2.35394009C-7.4043782（r=0.9992），A=1.5136777C+3.7376834（r=0.9995），線性范圍為10.2～408.0μg/ml、29.8～1192.0μg/ml，對照品檢測的上下限值分別為10.2μg/ml、29.8μg/ml。

2.6重復性試驗選取同一批樣品中的同一種藥材6份，進行精密稱定，分別按照樣品處理的醇提取的方法制備成樣品液，測定、計算含量，熊果酸含量RSD為2.95%，齊墩果酸含量RSD為2.71%。

2.7穩定性試驗在試驗的過程中，分別精密吸取同一樣品溶液，在24h內根據分配的時間進行重復選取樣品 6次，每次進樣5μl，樣品中熊果酸的峰面積 RSD為 1.77%，齊墩果酸峰面積 RSD為1.088%[3]。

2.8回收率測定精密稱取已測含量的藥材白花蛇舌草6份，然后分別加入相應量的熊果酸和齊墩果酸對照品，并按照樣品處理的醇提取的方法進行測定，計算含量和加樣回收率，通過分析，熊果酸和齊墩果酸的平均回收率分別為96.63%、96.42%，RSD分別為2.65%、2.06%。詳細數據見表1。

表1 白花蛇舌草加樣回收率檢測結果（n=6）

2.9樣品的測定通過采用醇提取法和酸解提取方法對女貞子、澤蘭、毛冬青、白花蛇舌草、茵陳、紫蘇、枇杷葉以及夏枯草等藥材中熊果酸和齊墩果酸進行測定，其測定的結果如表2。

表2 酸解提取法與醇提取法對樣品的測定比較

3 討論

中藥及中藥制劑的化學成分非常復雜，為了能夠安全合理、有效的使用藥物，需要對藥物的特點及有效成分、作用機理、制劑的體內過程、藥物反應等全面分析，在分析檢測的過程中采用HPLC檢測不僅分析時間短、自動化程度高、選擇性好，而且分析質量可靠，是臨床藥學研究和多數實驗研究的一種有效的分析方法[4]。

在分析檢測的過程中，采用醇提法進行檢測分析中藥中的游離形式，而酸解提取方法主要是檢測游離形式和皂苷形式的總和，通過試驗可以看出兩種方法測定結果差異無統計學意義，并且從中可以分析得出很多中藥成分中的熊果酸和齊墩果酸主要是以游離的形式存在。本研究主要采用高效液相色譜法對中藥及其試劑中的熊果酸和齊墩果酸的含量進行測定，從而為一些中藥及其制劑的研究分析提供思路。在對熊果酸和齊墩果酸進行分離以及含量測定的過程中采用高效液相色譜法進行測定熊果酸和齊墩果酸的測量，雖然分離不夠理想，但是如果加入適當的三乙胺和冰乙酸其分離效果也是非常良好的，并且還能夠產生弱酸性環境。

高效液相色譜法是目前中藥及其藥劑檢驗中最為常見的一種方法，但是目前仍然存在樣品分離效率低、色譜柱容易感染以及分析時間長等缺點，但是隨著HPLC檢測方法的研究工作的開展，各種自動化技術、聯用技術等科學技術不斷的更新發展，HPLC將會以高效、高速、靈敏準確及其自動化等優點，在中藥及其制劑有效成分分析測定中發揮重要的作用和價值。

[1]姚干,何宗玉,閆光凡,等.大孔吸附樹脂純化女貞子中齊墩果酸和熊果酸的研究[J].中草藥,2007,38(10):1498-1501.

[2]李曼玲,馮偉紅,康琛.高效液相色譜法測定女貞子藥材及飲片中齊墩果酸和熊果酸的含量[J].國際中醫中藥雜志,2007,29(6): 333-335.

[3]汪秋蘭,王文清,馬永貴.高效液相色譜法在中藥有效成分含量測定中的應用[J].醫藥導報,2011,30(11):1474-1475.

[4]劉春麗,劉滿倉,朱彭齡.高效液相色譜法分析中藥及植物藥的進展[J].分析化學,2000,28(5):631-643.

[5]秦少容,余佳文,岳廷哲,等.高效液相色譜法蒸發光散射檢測器測定紅參及育精膠囊中人參皂苷Rg1和Re的含量[J].中國中藥雜志,2001,26(8):544.

[6]羅新根,蔣琳蘭,趙樹進.高效液相色譜法同時測定白花蛇舌草中兩組分的含量[J].中國藥房,2004,15(3):175-176.

山西省醫藥與生命科學研究院，山西太原 030006