重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原-DR表達(dá)的觀察

孫海英，邵曉麗，劉淑梅，郭 平，周國忠，陳 溢

（1.浙江省紹興縣婦幼保健所兒童保健科，浙江紹興 312030；2.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院兒科，浙江紹興 312000；3.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江紹興 312000）

·論 著·

重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原-DR表達(dá)的觀察

孫海英1，邵曉麗2*，劉淑梅2，郭 平2，周國忠3，陳 溢2

（1.浙江省紹興縣婦幼保健所兒童保健科，浙江紹興 312030；2.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院兒科，浙江紹興 312000；3.浙江省紹興市人民醫(yī)院，浙江大學(xué)紹興醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江紹興 312000）

目的通過研究重癥肺炎支原體肺炎患兒靜脈血CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原-DR（human leukocyte antigen DR，HLA-DR）表達(dá)百分率的變化，評價(jià)患兒的免疫狀態(tài)及與疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后的關(guān)系。方法選擇重癥肺炎支原體肺炎患兒共65例，以臨床肺部感染評分（clinical pulmonary infection score，CPIS）≥6分為CPIS高分組共21例，CPIS＜6分為CPIS低分組共44例；正常對照組30例。重癥MPP患兒入院后第1天及出院當(dāng)日抽取靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率，并記錄入院當(dāng)天的CPIS。結(jié)果重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)CPIS高分組和CPIS低分組均明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；且CPIS高分組低于CPIS低分組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；2組治療后恢復(fù)期CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)均明顯升高（P＜0.01）。結(jié)論重癥肺炎支原體肺炎患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)持續(xù)低下提示患兒處于免疫抑制狀態(tài)。檢測CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)可用于判斷肺炎支原體肺炎患兒病情的嚴(yán)重程度和評估預(yù)后。

肺炎，支原體；抗原，CD14；兒童

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是由肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae，MP）感染導(dǎo)致的肺炎，已成為學(xué)齡期兒童社區(qū)獲得性肺炎的常見原因。目前重癥患兒增多，導(dǎo)致多臟器功能損害，引起國內(nèi)外學(xué)者的重視。近年來的研究證實(shí)，免疫功能紊亂在MPP的發(fā)生發(fā)展中起重要作用［1］。CD14+單核細(xì)胞人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）表達(dá)百分率是用于免疫功能抑制的指標(biāo)之一［2］。本研究通過觀察MPP患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率及臨床肺部感染評分（clinical pulmonary infection score，CPIS），評價(jià)CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率與疾病嚴(yán)重程度及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象：2008年1月—2011年10月我院收治的MPP患兒共65例，男性42例，女性23例，年齡3～8歲，平均（5.8±1.1）歲。根據(jù)《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第7版 MPP診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，病程早期采用PCR法檢測患兒咽拭子標(biāo)本中MP-DNA陽性，且發(fā)病1周后血清MP-IgM陽性，急性期抗體滴度≥1∶80，或恢復(fù)期較急性期抗體滴度升高4倍及以上為陽性；臨床符合MPP，無其他病原感染的臨床及實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。因目前重癥MPP尚無統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)，本文參考一般的表現(xiàn)及重癥支氣管肺炎的診斷，將病情重或出現(xiàn)嚴(yán)重肺外并發(fā)癥，或單用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周無反應(yīng)，或病程超過6周仍遷延不愈的，視為重癥［4］。排除標(biāo)準(zhǔn)如下。①患有肺結(jié)核等其他傳染病患兒；②近期有糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑使用史；③有使用糖皮質(zhì)激素的禁忌證；④合并細(xì)菌、病毒、衣原體等其他病原體感染；⑤病程中需要用激素或其他免疫調(diào)節(jié)劑者。其中CPIS≥6分為CPIS高分組（21例），CPIS＜6分為CPIS低分組（44例）。選擇年齡相匹配在我院體檢的健康兒童30例為正常對照組，均無近期感染，無個人及家族過敏及其他變態(tài)反應(yīng)性疾患史，其中男性17例，女性13例，年齡3～7歲，平均（5.1±1.7）歲。CPIS高分組、低分組及正常對照組3組間性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 治療原則：常規(guī)抗感染，吸痰叩背、臟器功能支持、霧化吸入、營養(yǎng)代謝支持及維持水、電解質(zhì)、酸堿平衡等對癥支持治療，避免使用皮質(zhì)激素等影響免疫功能的藥物。

1.3 檢測方法：上述重癥MPP患兒入院后24h內(nèi)抽取外周靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率。靜脈血用乙二胺四乙酸抗凝。取實(shí)驗(yàn)管加入 10μL異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）標(biāo)記小鼠抗人CD14抗體、10μL LPE標(biāo)記小鼠抗人HLA-DR抗體。對照管加入等體積FITC、PE標(biāo)記同型小鼠IgG（FITC標(biāo)記小鼠抗人CD14抗體、PE標(biāo)記小鼠抗人HLA-DR抗體及相應(yīng)的同型小鼠免疫球蛋白均為美國BeckmanCoulter公司產(chǎn)品）。再向試管加50μL抗凝靜脈血，混勻，室溫下避光孵育15min，應(yīng)用Coulter Q-PREP溶血儀溶血后，避光儲存待測。檢驗(yàn)標(biāo)本前應(yīng)用Coulter公司標(biāo)準(zhǔn)液校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀（美國Beckman Coulter公司Coulter EPICSXL型）使流量系數(shù)（volume cofficient，CV）值在2%以內(nèi)。檢測時(shí)每管收集100 000個細(xì)胞，分別記錄CD14+單核細(xì)胞中HLA-DR的陽性率。與此同時(shí)，計(jì)算出并記錄當(dāng)天的CPIS。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以±s表示，各指標(biāo)變化的組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

入院當(dāng)天CPIS高分組與低分組CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率均低于正常對照組，且CPIS高分組低于低分組（P＜0.05）。治療后，CPIS高分組和低分組CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率均升高，與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 重癥MPP患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)變化Table 1 PeriPheral blood CD14+mononuclera cells HLA-DR exPression in severe MPP children（±s，%）

表1 重癥MPP患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)變化Table 1 PeriPheral blood CD14+mononuclera cells HLA-DR exPression in severe MPP children（±s，%）

*P＜0.01 vs normal control group #P＜0.01 vs CPIS high group△P＜0.01 vs before treatment by q testHLA-DR：human leukocyte antigen DR；CPIS：clinical pulmonary infection score

HLA-DR Before treatment Recovery phase CPIS high 21 35.09±8.97* 68.20±6.03 Groups n△CPIS low 44 52.42±9.67*# 68.89±11.51△Normal control 30 75.13±11.43 75.13±11.43 F＜0.01 ＜0.05 101.20 3.85 P

3 討 論

MPP是兒童的常見病和多發(fā)病，重癥MPP表現(xiàn)為起病急，以劇烈咳嗽、氣喘起病，并很快出現(xiàn)發(fā)熱和呼吸困難，肺外并發(fā)癥多見，肺部病變嚴(yán)重，可合并肺膿腫、大量胸腔積液、壞死性肺炎以及閉塞性支氣管炎或閉塞性毛細(xì)支氣管炎等［5］。迄今MPP發(fā)病機(jī)制還不十分清楚。1996年Bone等［6］針對感染或創(chuàng)傷時(shí)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的內(nèi)源性抗炎反應(yīng)，提出了代償性抗炎癥反應(yīng)綜合征。重癥MPP可能并不像以往所認(rèn)為的是“過度炎癥反應(yīng)”，更多的可能是由于“過度抑制”導(dǎo)致機(jī)體“免疫系統(tǒng)發(fā)生故障”，不能清除病原體所致［7］。

單核細(xì)胞作為機(jī)體重要的免疫細(xì)胞之一，參與其中每個過程，有著不可或缺的作用。它的功能變化在一定程度上反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)。CD14+單核細(xì)胞HLA-DR是單核吞噬細(xì)胞表面的抗原表達(dá)，其功能是把經(jīng)單核吞噬細(xì)胞吞噬并處理后的抗原提呈給T輔助細(xì)胞，繼而激活包括T細(xì)胞、B細(xì)胞和吞噬細(xì)胞在內(nèi)的所有免疫細(xì)胞，所以，足夠的HLA-DR表達(dá)對于特異性免疫和非特異性免疫功能都十分重要。

當(dāng)前，檢測免疫功能的方法很多，但能夠作為定量的診斷免疫抑制的檢查，目前首推CD14+單核細(xì)胞的HLA-DR。Venet等［8］證明，以CD14+單核細(xì)胞HLA-DR＜30%為閾值能夠可靠地篩選出膿毒癥免疫抑制的患者。他們發(fā)現(xiàn)，燒傷后發(fā)生膿毒癥患者HLA-DR＜30%或持續(xù)降低超過5d患者病死率及膿毒血癥發(fā)生率遠(yuǎn)高于對照組。本研究結(jié)果顯示，重癥 MPP患兒的外周血 CD14+單核細(xì)胞的HLA-DR表達(dá)率明顯低于正常對照組，臨床表現(xiàn)為病情重或出現(xiàn)嚴(yán)重肺外并發(fā)癥，或單用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周無反應(yīng)等。提示CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)持續(xù)低下的患兒處于免疫抑制狀態(tài)，易發(fā)生持續(xù)且嚴(yán)重的感染。

CPIS最早由Pugin提出，它將胸部X線片以及實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果和臨床相結(jié)合，用于評估肺部感染嚴(yán)重程度，分值越高提示肺部感染越重［9］。本研究結(jié)果顯示，重癥 MPP中外周血 CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)水平可反映重癥MPP患者肺部感染程度，CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)水平越低，肺部感染程度越重。與Gogos等［10］的研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果顯示，治療后患兒CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)百分率均明顯升高，與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與文獻(xiàn)報(bào)道一致［11］。說明CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)可用于判斷MPP患兒病情的嚴(yán)重程度，并在重癥MPP的發(fā)生發(fā)展和疾病轉(zhuǎn)歸中起重要作用。

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（本文編輯：劉斯靜）

OBSERVATION OF THE EXPRESSION OF CD14+MONOCYTE HUMAN LEUKOCYTE ANTIGEN DR IN SEVERE MYCOPLASMA PNEUMONIAE PNEUMONIA

SUN Haiying1，SHAO Xiaoli2*，LIU Shumei2，GUO Ping2，ZHOU Guozhong3，CHEN Yi2
（1.Department of Pediatrics，Shaoxing County Maternity and Child Care Centers，Zhejiang Province，Shaoxing 312030，China；2.Department of Pediatrics，Shaoxing People′s Hospital&Zhejiang University Shaoxing Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China；3.Department of Medical Molecular Biology，Shaoxing People′s Hospital&Zhejiang University Shaoxing Hospital，Zhejiang Province，Shaoxing 312000，China）

ObjectiveTo monitor the change of the expression of CD14+monocyte human leukocyte antigen DR（HLA-DR）in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia children and evaluate their immunological condition，relationship between severity of illness，prognosis and CD14+monocyte HLA-DR.MethodsSixth-five cases of severe mycoplasma pneumoniae pneumonia children were collected and divided into the following groups，total 44 cases with clinical pulmonary infection score（CPIS）≥6 were CPIS high grade；total 21 cases with CPIS＜6 were CPIS low grade，and 30 normal cases were selected as control group.The levels of venous blood CD14+monocyte HLA-DR were detected at the first day after admission and discharge.The CPIS grade of the patients was recorded at the first day after admission.ResultsThe levels of CD14+monocyte HLA-DR in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia were obviously lower no matter in CPIS high grade and in CPIS low grade than normal cases with statistically significant differences（P＜0.01），and the level in CPIS high grade waslower than the CPIS low grade（P＜0.01）.The levels of CD14+monocyte HLA-DR in the 2 groups were increased significantly after treatment（P＜0.01）.ConclusionPersistent low level of the expression of CD14+monocyte HLA-DR in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia indicate the patients are in the states of immunosuppression.Detection of the expression of CD14+monocyte HLADR can be used to evaluate the severity of disease and predict prognosis in severe mycoplasma pneumoniae pneumonia.

pneumonia，mycoplasma；antigens，CD14；child

R563.1

A

1007-3205（2012）09-1021-04

2012-01-30；

2012-04-28

孫海英（1977-），女，浙江紹興人，浙江省紹興縣婦幼保健所主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事小兒呼吸內(nèi)科疾病診治研究。

*通訊作者。E-mail：nuannuan717@126.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.09.011