新制柴連湯加減治療兔細(xì)菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)研究

許 靜 趙海霞

細(xì)菌性角膜炎是由細(xì)菌感染引起的，以角膜上皮缺損及缺損區(qū)下角膜基質(zhì)壞死為表現(xiàn)的化膿性角膜炎，是主要的致盲眼病之一〔1〕。造成角膜炎的細(xì)菌種類眾多，其中以微球菌科（主要是葡萄球菌屬和微球菌屬）、鏈球菌屬、假單胞菌屬及腸桿菌科為主，約87%的細(xì)菌性角膜炎是由上述4類細(xì)菌所致〔2-4〕。本病屬于中醫(yī)“凝脂翳”范疇，多因黑睛表層損傷，風(fēng)熱邪毒乘隙襲入，若素有漏睛，邪毒已有蘊(yùn)伏，或因臟腑蘊(yùn)熱，火熱上攻，更易發(fā)病，為眼科疑難重病之一〔5〕。本文以兔為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停芯啃轮撇襁B湯煎劑配合抗生素滴眼液治療細(xì)菌性角膜炎的效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康無(wú)眼疾的成年新西蘭白兔40只（80只眼），體重2～3 kg，雌雄不限。采購(gòu)自內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，環(huán)境良好，飲食正常。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

金黃色葡萄球菌菌種（ATCC25923），菌種濃度2.5×1010CFU/ml（購(gòu)自南京便診生物有限公司，產(chǎn)品貨號(hào)：BKTW 23103）；熒光素染色條（購(gòu)自山東博士倫福瑞達(dá)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20093096）。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥品和主要儀器

中藥選擇新制柴連湯加減〔6-7〕：柴胡 10 g、黃芩10 g、黃連 5 g、 赤芍 10 g、蔓荊子 10 g、梔子 10 g、龍膽 5 g、木通 5 g、甘草 5 g、荊芥 5 g、防風(fēng) 5 g、金銀花15 g、蒲公英 15 g、連翹 10 g、白芷 10 g（本院中藥房）。0.3%氧氟沙星滴眼液（山東博士倫福瑞達(dá)制藥有限公司），0.3%妥布霉素滴眼液（安徽華源醫(yī)藥股份有限公司），0.5%丁卡因滴眼液（本院）。YZ2手持眼科裂隙燈（河北康明醫(yī)療器械貿(mào)易有限公司）。

1.4 動(dòng)物模型的制備

實(shí)驗(yàn)兔予耳緣靜脈注射鹽酸氯氨酮（0.2 ml/kg）麻醉，眼部予0.5%丁卡因滴眼液表面麻醉，待角膜反射消失后，置開瞼器開瞼，用4號(hào)半針頭將0.1 ml菌種濃度為2.5×1010CFU/ml的金黃色葡萄球菌菌液自角膜近中央處注入角膜實(shí)質(zhì)層內(nèi)，造成約4～5 mm的白色菌斑（造模成功的標(biāo)志〔8-9〕）。所有實(shí)驗(yàn)兔雙眼進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.5 分組處理

接種后的兔隨機(jī)分成2組：中藥治療組20只（40只眼），對(duì)照組20只（40只眼），分籠飼養(yǎng)。造模24 h后給藥。中藥治療組給予0.3%氧氟沙星滴眼液、0.3%妥布霉素滴眼液交替點(diǎn)眼，每天5～6次，每次1～2滴，同時(shí)給予新制柴連湯加減煎劑，取汁30ml，早晚分2次灌服〔10〕。對(duì)照組給予0.3%氧氟沙星滴眼液和0.3%妥布霉素滴眼液交替點(diǎn)眼，每天5～6次，每次1～2滴，同時(shí)取30 ml生理鹽水，早晚分2次灌服。

1.6 觀察指標(biāo)與療效評(píng)價(jià)

于造模后24 h，以及治療后第3、9、14天進(jìn)行裂隙燈檢查并做評(píng)分。采用McNeill[11]角膜病變程度分級(jí)方法記錄病變程度。0分：角膜實(shí)質(zhì)層透明清晰，光澤無(wú)混濁；1分：角膜輕度水腫，虹膜紋理清晰可見。2分：角膜水腫，混濁，虹膜紋理仍可窺見；3分：角膜明顯混濁，但可見到瞳孔緣，角膜表面見少量散在飄浮膿液；4分：角膜嚴(yán)重混濁，前房結(jié)構(gòu)無(wú)法窺見，前房及層間積膿。

療效標(biāo)準(zhǔn)：治療后第14天進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。參照《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》〔12〕擬定療效標(biāo)準(zhǔn)。治愈：流淚畏光等癥狀消失，角膜潰瘍愈合，熒光素染色陰性。好轉(zhuǎn)：癥狀減輕，角膜潰瘍面變小變淺，熒光素染色縮小＞2/3。無(wú)效：治療后病情無(wú)變化或加重。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，角膜評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，療效比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組治療前后角膜評(píng)分比較

造模24 h及治療后第3天，2組角膜評(píng)分接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后第9天和第14天，中藥治療組角膜評(píng)分均小于對(duì)照組，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表 1）。

表1 2組細(xì)菌性角膜炎兔不同時(shí)間角膜病變程度評(píng)分比較（±s）

表1 2組細(xì)菌性角膜炎兔不同時(shí)間角膜病變程度評(píng)分比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，①P＜0.05（兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)）

不同時(shí)間點(diǎn)角膜病變程度評(píng)分造模后24 h治療第3天 治療第9天 治療第14天中藥治療組 40 3.1±0.72 2.9±0.63 1.86±0.79① 0.78±0.98①對(duì)照組 40 3.2±0.76 2.95±0.60 2.13±0.79 1.5±1.38組別 眼數(shù)/只

2.2 2組療效比較

中藥治療組：治愈32只眼，好轉(zhuǎn)6只眼，無(wú)效2只眼，總有效率95%；對(duì)照組：治愈28只眼，好轉(zhuǎn)4只眼，無(wú)效8只眼，總有效率80%，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.114，P=0.044）。

3 討論

細(xì)菌性角膜炎是一種常見的嚴(yán)重威脅視力的角膜疾病，發(fā)病急、進(jìn)展快、來(lái)勢(shì)猛、變化多端，如不能進(jìn)行及時(shí)有效的治療，可發(fā)生角膜潰瘍穿孔，甚至眼內(nèi)感染，最終眼球萎縮〔13〕。雖然廣譜抗菌藥物對(duì)細(xì)菌性角膜炎有較好的療效，但由于耐藥菌株逐年增多，臨床上細(xì)菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)相對(duì)滯后，往往延誤治療，使感染得不到有效控制，導(dǎo)致病情進(jìn)一步發(fā)展〔14〕。常見的致病菌中，葡萄球菌屬引起的細(xì)菌性角膜潰瘍較多，其中以表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌最為多見〔15〕。金黃色葡萄球菌在葡萄球菌屬中致病力最強(qiáng)，屬凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌，產(chǎn)生金黃色色素，能分解甘露醇，主要通過(guò)外毒素致病〔16-17〕；致病力取決于其產(chǎn)生毒素和酶的能力，也與入侵細(xì)菌的毒力和數(shù)量有關(guān)，可產(chǎn)生血漿凝固酶、溶血毒素、殺白細(xì)胞素等。金黃色葡萄球菌可見于正常結(jié)膜囊，在正常免疫情況下暫時(shí)存在，當(dāng)角膜上皮有損傷或因其他疾病等原因使機(jī)體抵抗力降低時(shí)，可侵入角膜使局部感染。臨床癥狀一般為眼痛、畏光、異物感、結(jié)膜充血，分泌物增多等。角膜潰瘍多呈孤立的圓形或橢圓形，灰白或奶白色外觀，一般潰瘍比較淺表，與周圍正常組織的邊界比較清楚，水腫與浸潤(rùn)程度較輕，可以引起輕中度的前房反應(yīng)。

新制柴連湯出自清代黃耐庵編著的《眼科纂要》，為祛風(fēng)清熱之良方，方中加入金銀花、蒲公英、白芷、連翹，則瀉火解毒效果更佳。《原機(jī)啟微》認(rèn)為“翳猶瘡也”，治療當(dāng)以清熱解毒退翳醫(yī)瘡為法。本實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)角膜注射細(xì)菌的造模方法，應(yīng)屬于凝脂翳病因中所講的黑睛表層損傷，風(fēng)熱邪毒乘隙襲入；又因其發(fā)病時(shí)間短，病位較淺，依據(jù)中醫(yī)辨證論治，應(yīng)為風(fēng)熱表證，治宜驅(qū)風(fēng)清熱解毒，故選用新制柴連湯加減方。

方中柴胡、防風(fēng)、荊芥、蔓荊子祛風(fēng)散邪止痛，黃連、黃芩、梔子、龍膽、蒲公英清肝瀉火退赤，苦寒清熱解毒，瀉三焦之火而解毒療瘡；赤芍配木通清熱活血、退赤止痛，與瘡家圣藥連翹合用，清熱解瘡毒效力更佳，且梔子具有降溫消炎止痛，止血等作用〔18〕；白芷、防風(fēng)祛風(fēng)散邪，退翳明目，取“火郁發(fā)之”之意，且白芷有較好的止痛、止淚作用，尚有療瘡之效〔19〕；甘草清熱解毒，調(diào)和諸藥。綜合全方，共奏瀉火解毒、疏風(fēng)散熱利濕之功。現(xiàn)代藥理研究表明，金銀花、蒲公英、黃連、黃芩、梔子、連翹、赤芍等具有抗病原體作用，對(duì)多種致病菌有抑制或殺滅作用，其中金銀花、黃連、黃芩、連翹等還具有抗毒素作用，白芷、防風(fēng)、甘草亦具有抗菌作用〔20〕，金銀花、黃連、黃芩、連翹、甘草等具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用。

本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，新制柴連湯加減煎劑配合抗生素滴眼液治療細(xì)菌性角膜炎，能有效緩解癥狀，并能有效促使炎癥反應(yīng)減輕，相對(duì)單純抗生素治療，可以縮短潰瘍愈合時(shí)間，縮短病程，提高療效，其治療效果明顯優(yōu)于對(duì)照組。需要說(shuō)明的是：①該方用于由火熱邪毒導(dǎo)致的風(fēng)熱表證型的角結(jié)膜炎應(yīng)該更為合適；②本實(shí)驗(yàn)研究?jī)H研究了針對(duì)金黃色葡萄球菌性角膜炎的效果，對(duì)于其它致病菌導(dǎo)致的角膜炎尚缺乏實(shí)驗(yàn)依據(jù)；③方劑中的有效成分及殺菌抑菌的機(jī)理還不清楚。實(shí)驗(yàn)中的不足，還有待于進(jìn)一步地研究來(lái)完善。

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