蠶蛹油對(duì)3種不同類型肝損傷小鼠的保護(hù)作用

陳偉平，謝園沁，胡金鹿

蠶蛹油對(duì)3種不同類型肝損傷小鼠的保護(hù)作用

陳偉平1，謝園沁2，胡金鹿2

(1. 浙江大學(xué)城市學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310015；2. 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)部公共衛(wèi)生系營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所，浙江 杭州 310058)

目的:研究蠶蛹油對(duì)3種不同類型的肝損傷小鼠的保護(hù)作用。方法:雄性ICR小鼠150只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為3大組:實(shí)驗(yàn)a組(酒精性肝損傷組)、實(shí)驗(yàn)b組(免疫性肝損傷組)、實(shí)驗(yàn)c組(D-半乳糖胺肝損傷組)。每大組再隨機(jī)分為5個(gè)小組:空白對(duì)照組、月見(jiàn)草油陽(yáng)性對(duì)照組、肝損傷模型組及蠶蛹油低、高劑量組。灌胃7d后，除空白對(duì)照組外，各實(shí)驗(yàn)組分別進(jìn)行如下處理:實(shí)驗(yàn)a組給予50%乙醇12mL/kg，建立小鼠酒精性肝損傷模型；實(shí)驗(yàn)b組采用尾靜脈注射卡介苗(BCG)＋脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠免疫性肝損傷；實(shí)驗(yàn)c組以10% D-半乳糖胺600mg/kg給各組小鼠腹腔注射，誘導(dǎo)小鼠D-半乳糖胺肝損傷模型。24h后測(cè)定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性和肝組織中丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)的含量；觀察肝臟、脾臟指數(shù)的變化。結(jié)果:蠶蛹油組肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、ALT和AST的活性及肝組織中MDA、還原型GSH水平與模型組各水平相比均具有顯著性差異(P＜0.05)，且肝臟、脾臟指數(shù)水平與ALT、AST活性及MDA、GSH含量相關(guān)性顯著(P＜0.05)。結(jié)論:蠶蛹油對(duì)酒精所致小鼠急性化學(xué)性肝損傷、卡介苗和脂多糖誘導(dǎo)的免疫性肝損傷、D-半乳糖胺所造成的小鼠肝損傷均具有明顯的保護(hù)作用，且對(duì)酒精性肝損傷及BCG和LPS誘導(dǎo)的免疫性肝損傷保護(hù)效果優(yōu)于月見(jiàn)草油，其機(jī)制可能與其降酶、降低脂質(zhì)過(guò)氧化水平、阻止肝細(xì)胞壞死作用有關(guān)。

蠶蛹油；多不飽和脂肪酸；肝損傷；脂質(zhì)過(guò)氧化

肝臟是人體最重要的解毒臟器，肝損傷引發(fā)的肝臟疾病已成為常見(jiàn)病、多發(fā)病，更為嚴(yán)重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率高，極大地威脅著人類的健康。很多因素可引起肝損傷，如病毒、生物、藥物、理化、酒精等。日常生活中化學(xué)性有毒物質(zhì)會(huì)通過(guò)胃腸道、血液循環(huán)進(jìn)入肝臟進(jìn)行轉(zhuǎn)化。因此肝臟容易受到這些毒性物質(zhì)的損傷，造成化學(xué)性肝損傷，增加肝臟負(fù)擔(dān)。化學(xué)性肝損傷主要指來(lái)自生活環(huán)境、食品、藥物等有害化學(xué)物質(zhì)。長(zhǎng)期大量飲酒可以造成酒精性肝損傷，最終可發(fā)展成慢性活動(dòng)性肝炎甚至肝硬化。而且，我國(guó)是肝炎高發(fā)區(qū)，特別是病毒性肝炎，已嚴(yán)重危害到我國(guó)人民的身心健康。病毒性肝炎在發(fā)病過(guò)程中，肝損傷主要通過(guò)一系列免疫應(yīng)答造成。以乙肝為例，乙型肝炎病毒感染肝細(xì)胞并在其中復(fù)制，一般認(rèn)為并不直接引起肝細(xì)胞病變，肝損傷主要是通過(guò)機(jī)體一系列以細(xì)胞免疫為主的免疫應(yīng)答造成的，致敏T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)是主要機(jī)制，不僅能對(duì)病毒加以殺滅，還能對(duì)表面帶有病毒抗原的受感染的肝細(xì)胞進(jìn)行攻擊，產(chǎn)生免疫性肝臟損傷。因現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肝損傷的研究比較深入，已從多方面探討了肝損傷的發(fā)生機(jī)制，目前對(duì)肝損傷的治療方法很多，且均有一定的療效，但也存在著明顯的不足。西醫(yī)對(duì)肝損傷的藥物治療療效并不十分肯定，同時(shí)又具有較大的毒副作用，極不利于臨床推廣[1]。根據(jù)資料顯示，激素治療的死亡率較高，特別是那些有并發(fā)癥的患者比如糖尿病為應(yīng)用糖皮質(zhì)激素的禁忌癥[2]。另外，大部分中藥作用機(jī)制研究的深度和廣度不夠，針對(duì)肝損傷的作用機(jī)制并仍未十分清楚，且化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究薄弱，有效成分不明[3]。面對(duì)現(xiàn)狀，希望通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究找到對(duì)酒精性肝損傷有明確治療效果且毒副作用小的藥物。在國(guó)外已有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)減輕脂質(zhì)過(guò)氧化就能防治乙醇所致的肝損傷[4-5]。

我國(guó)作為養(yǎng)蠶大國(guó)，蠶蛹資源豐富，蠶蛹(silkworm pupa)作為藥膳同源傳統(tǒng)中藥材，具有很高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，《本草綱目》等古代醫(yī)藥經(jīng)典著作中，均記載蠶蛹具有生津止渴、消食理氣、壯陽(yáng)、滋補(bǔ)強(qiáng)壯等作用[6]。蠶蛹油是從蠶蛹中提煉出來(lái)的含有多種高級(jí)脂肪酸甘油脂的混合物，外觀呈黃至紅色的透明的油狀液體。其富含α-亞麻酸、油酸、亞油酸等多種人體必需的不飽和脂肪酸，具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。多年來(lái)，臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明n-3多不飽和脂肪酸(n-3 PUFAs)的攝入具有降低心血管疾病死亡率[7]、降低血甘油三酯水平、升高高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL-C)水平、減少血小板聚集[8]、改善血管內(nèi)皮功能、降低血壓[9]、改善胰島素抵抗等功效。已有實(shí)驗(yàn)表明，蠶蛹油能顯著地降低肝臟組織總膽固醇、甘油三酯的含量，增加高密度脂蛋白膽固醇含量，降低肝臟致動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)和脂質(zhì)過(guò)氧產(chǎn)物丙二醛含量，顯著地提高脂蛋白脂酶和肝脂酶的活性[10]；并且對(duì)脂肪肝及肝臟病理也有保護(hù)作用，它能夠有效的預(yù)防和治療非酒精性脂肪肝形成[11]，但關(guān)于蠶蛹油對(duì)肝損傷的保護(hù)作用鮮有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)以3種不同因素誘導(dǎo)的肝損傷為模型，探討蠶蛹油對(duì)肝損傷小鼠的保護(hù)作用，并初步探討其作用機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

雄性ICR小鼠150只，體質(zhì)量18～22g，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK(浙) 2008-0033。

1.2 試劑與儀器

普通飼料 浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；干蠶蛹 嘉善旭成有機(jī)飼料廠；蠶蛹油 本實(shí)驗(yàn)室研制；月見(jiàn)草油軟膠囊 香港安順堂生物制藥集團(tuán)；無(wú)水乙醇 杭州常青化工公司；冰醋酸 江蘇強(qiáng)順化學(xué)試劑有限公司；尿素 浙江寧波市化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鈉 杭州蕭山化學(xué)試劑廠；卡介苗(60mg/支) 中國(guó)北京生物制品研究所；脂多糖(10mg/支) 美國(guó)Sigma公司；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒、考馬斯亮藍(lán)總蛋白定量測(cè)試盒 南京建成生物工程研究所。

FW135粉碎機(jī) 天津市泰斯特儀器公司；MEI-03 L微波萃取儀 無(wú)錫普萊瑪儀器設(shè)備有限公司；JHBE-50型閃蒸提取儀、JMF-320多級(jí)閃蒸器 河南金鼐科技發(fā)展有限公司；RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；AllegraTM64 Rcentrifuge 高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Beckman公司；KQ-700DB型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 國(guó)華電器有限公司；XW-80A旋渦混合器 上海醫(yī)大儀器廠；高通量組織勻漿器 德國(guó)Qiagen公司；Sunrise-BASIC酶標(biāo)儀 奧地利Tecan公司。

1.3 方法

1.3.1 蠶蛹油的制備

采用微波萃取法結(jié)合尿素包合法提取得到黃色透明油狀液體，經(jīng)國(guó)家輕工業(yè)食品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)杭州站分析檢測(cè)，蠶蛹油中不飽和脂肪酸達(dá)93.5%，其中多不飽和脂肪酸65.3%，包括n-3系的α-亞麻酸54.6%、n-6系的亞油酸10.7%；單不飽和脂肪酸達(dá)28.2%，其中包括油酸27.2%、棕櫚油酸1.0%。

1.3.2 動(dòng)物處理及分組

雄性ICR小鼠150只，動(dòng)物房適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為3大組:實(shí)驗(yàn)a組(酒精性肝損傷組)、實(shí)驗(yàn)b組(免疫性肝損傷組)、實(shí)驗(yàn)c組(D-半乳糖胺肝損傷組)。每大組再隨機(jī)分為5個(gè)小組:空白對(duì)照組、月見(jiàn)草油陽(yáng)性對(duì)照組、肝損傷模型組、蠶蛹油低劑量組、蠶蛹油高劑量組。這15組劑量分別為:1)空白對(duì)照a、b、c組；2)肝損傷模型a、b、c組，均以蒸餾水6mL/kg·d灌胃；3)陽(yáng)性對(duì)照(月見(jiàn)草油)a、b、c組，均以月見(jiàn)草油6mL/(kg·d)灌胃；4)蠶蛹油低劑量a、b、c組，均以蠶蛹油4.5mL/(kg·d)灌胃；5)蠶蛹油高劑量a、b、c組，均以蠶蛹油7.5mL/(kg·d)灌胃。動(dòng)物房溫度為(22±2)℃，相對(duì)濕度為65%，各組均喂食普通飼料，自由飲食飲水。灌胃7d后，實(shí)驗(yàn)a組(肝損傷模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、蠶蛹油低劑量組、蠶蛹油高劑量組)用50%乙醇一次性灌胃12mL/kg建立小鼠酒精性肝損傷模型；實(shí)驗(yàn)b組(肝損傷模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、蠶蛹油低劑量組、蠶蛹油高劑量組)每只小鼠尾靜脈注射卡介苗(Bacillus calmette-guerin，BCG)0.5mg/0.2mL，致敏12d后，尾靜脈注射脂多糖(lipopolysaccharide，LPS) 7.5μg/0.2mL以誘導(dǎo)免疫性肝損傷模型，禁食12h，不禁水；實(shí)驗(yàn)c組(肝損傷模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、蠶蛹油低劑量組、蠶蛹油高劑量組)每只小鼠均經(jīng)腹腔注射10% D-半乳糖胺溶液600mg/kg，以誘導(dǎo)D-半乳糖胺肝損傷模型。

1.3.3 指標(biāo)檢測(cè)

24h后，摘取小鼠眼球取血約0.5mL，置于1.5mL離心管中，3000r/min離心10min，吸取上層血清，測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶。頸椎脫臼法處死小鼠，分別取肝臟和脾臟，用4℃生理鹽水漂洗，濾紙吸干血水，稱質(zhì)量，計(jì)算肝臟、脾臟指數(shù)。觀察肝臟和脾臟的變化。取相同部位的肝組織0.2g，放入離心管中，加預(yù)冷生理鹽水1.8mL，將肝組織剪碎，加入鋼珠，開(kāi)啟組織研磨儀10min，制成10%肝勻漿，檢測(cè)肝組織中谷胱甘肽和丙二醛含量。血清和肝臟中AST、ALT活性及GSH、MDA含量的測(cè)定均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)分析軟件:組間各指標(biāo)水平間的差異采用單因素方差分析，若具有顯著性差異(P＜0.05)，則采用LSD分析后檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α＝0.05。肝臟、脾臟指數(shù)與血清和肝臟中各指標(biāo)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α＝0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 蠶蛹油對(duì)肝損傷小鼠肝臟、脾臟指數(shù)的影響

由表1可知，含實(shí)驗(yàn)組a組(酒精性肝損傷組)、b組(免疫性肝損傷組)、c組(D-半乳糖胺肝損傷組)與模型組比較，肝臟、脾臟指數(shù)均有顯著性差異(P＜0.05)；除蠶蛹油高劑量組外，與空白對(duì)照組比較，各實(shí)驗(yàn)組肝臟、脾臟指數(shù)也均有顯著性差異(P＜0.05)；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，蠶蛹油高劑量組a、b組肝臟指數(shù)顯著降低(P＜0.0 5)；c組蠶蛹油低劑量組肝臟指數(shù)降低水平與陽(yáng)性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，蠶蛹油高劑量組肝臟、脾臟指數(shù)降低水平與陽(yáng)性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。提示蠶蛹油能改善肝脾的脂質(zhì)代謝，抑制脂質(zhì)在肝脾內(nèi)的沉積。

2.2 蠶蛹油對(duì)肝損傷小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

由表2可知，含實(shí)驗(yàn)組a、b、c組與模型組比較，ALT、AST活性均有顯著性差異(P＜0.05)；與空白對(duì)照組比較，各實(shí)驗(yàn)組ALT、AST活性變化也均有顯著性差異(P＜0.05)。蠶蛹油低劑量組和蠶蛹油高劑量組a組ALT、AST水平改變與陽(yáng)性對(duì)照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)；蠶蛹油高劑量組b組ALT、AST水平改變與陽(yáng)性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。c組蠶蛹油低劑量組和蠶蛹油高劑量組AST水平改變與陽(yáng)性對(duì)照組比較也有顯著性差異(P＜0.05)。肝臟受損時(shí)，會(huì)引起ALT、AST升高，提示蠶蛹油具有較好的保護(hù)肝臟受損、降低血清轉(zhuǎn)氨酶的能力。

表1 各組小鼠肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)的比較情況(x－±s，n=10)Table 1 Liver index and spleen index of mice of different groups (x－±s，n=10)

表2 各組小鼠血清中AST、ALT活性的比較情況(x－±s，n=10)Table 2 Measured serum AST and ALT activities of mice of different groups (x－±s，n=10)

表3 各組小鼠肝臟中GSH、MDA含量的比較(x－±s，n=10)Table 3 Determined GSH and MDA content in liver of mice (x－±s，n=10)

表4 肝臟、脾臟指數(shù)與血清中AST、ALT活性和肝臟中GSH、MDA含量的單變量相關(guān)分析Table 4 One-factor correlation of liver or spleen indexes with serum AST and ALT activities and liver GSH and MDA contents

2.3 蠶蛹油對(duì)肝損傷小鼠肝臟中GSH、MDA含量的影響

由表3可知，各實(shí)驗(yàn)組a、b、c組與模型組比較，GSH、MDA含量均有顯著性差異(P＜0.05)；與空白對(duì)照組比較，各實(shí)驗(yàn)組GSH、MDA含量改變也均有顯著性差異(P＜0.05)；蠶蛹油高劑量組b組GSH、MDA含量改變與陽(yáng)性對(duì)照組比較也均有顯著性差異(P＜0.05)。蠶蛹油低劑量組、蠶蛹油高劑量組c組MDA含量改變與陽(yáng)性對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。提示蠶蛹油具有較好的改善肝組織過(guò)氧化的能力。

2.4 肝損傷小鼠中肝臟、脾臟指數(shù)與血清及肝臟相應(yīng)指標(biāo)的關(guān)系

由表4可知，a、b、c實(shí)驗(yàn)組的肝臟、脾臟指數(shù)均分別與AST活性、ALT活性、MDA含量呈正相關(guān)，與GSH含量呈負(fù)相關(guān)，且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析相關(guān)性差異顯著(P＜0.05)。

3 討 論

肝損傷是指在一系列理化因素的作用下，肝細(xì)胞發(fā)生不同程度的腫脹、變性、壞死和凋亡，是各種肝病發(fā)生發(fā)展的最基本的病理狀態(tài)[12]。肝臟是人體最重要的解毒臟器，日常生活中化學(xué)性有毒物質(zhì)會(huì)通過(guò)胃腸道、血液循環(huán)進(jìn)入肝臟進(jìn)行轉(zhuǎn)化[13]。因此肝臟容易受到這些毒性物質(zhì)的損傷，造成化學(xué)性肝損傷，增加肝臟負(fù)擔(dān)。化學(xué)性肝損傷主要指來(lái)自生活環(huán)境、食品、藥物等有害化學(xué)物質(zhì)。在肝細(xì)胞病變過(guò)程中，自由基、酶及脂質(zhì)過(guò)氧化等均發(fā)揮重要作用[14]。ALT和AST是動(dòng)物血清中兩種重要的轉(zhuǎn)氨酶。正常時(shí)，ALT和AST在血清中的含量為零或很少，但當(dāng)肝臟受到各種因素的損害時(shí)，肝細(xì)胞不能維持其結(jié)構(gòu)的完整性，ALT和AST就會(huì)滲透進(jìn)入血液，所以，ALT和AST活性的改變是肝臟受到損害的一種應(yīng)答反應(yīng)[15]，當(dāng)檢測(cè)到血清中的ALT和AST活性升高時(shí)即可表明其肝臟的正常功能受到破壞。所以血清中這兩種酶活性的增高及增加的幅度在一定程度上反映了肝細(xì)胞損害的程度。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化降解的主要產(chǎn)物，MDA能使膜蛋白、酶發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，使膜通透性增加，導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、功能和代謝發(fā)生改變，對(duì)機(jī)體造成損害，其含量反映了組織脂質(zhì)過(guò)氧化損傷程度。MDA的高低間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[16-17]。GSH廣泛存在于人體的各種組織中，GSH水平降低意味著機(jī)體抗氧化能力下降，并引發(fā)機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量的自由基。在肝臟化學(xué)性損傷時(shí)，氧化應(yīng)激消耗GSH引起肝臟GSH含量下降，機(jī)體抗氧化能力下降并引發(fā)機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)[18]。因而，檢測(cè)血清中ALT、AST活性及肝組織中GSH、MDA含量是評(píng)價(jià)肝損傷的重要指標(biāo)。

我國(guó)蠶蛹資源豐富、價(jià)格低廉，蠶蛹油含有多種高級(jí)脂肪酸甘油脂的混合物。富含脂肪酸，特別是油酸、亞油酸和亞麻酸等多種人體必需的不飽和脂肪酸。研究表明，蠶蛹油具有促進(jìn)脂肪代謝、肝細(xì)胞再生，降血脂、降膽固醇、降血糖、提高機(jī)體免疫機(jī)能、保護(hù)肝臟等多種功能[19]。所以，以蠶蛹為原料制備蠶蛹油，并進(jìn)一步研究蠶蛹油的保肝機(jī)制，開(kāi)發(fā)治療肝病的新藥及功能食品，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。本實(shí)驗(yàn)主要研究了蠶蛹油對(duì)3種不同肝損傷模型的保護(hù)作用，意在初步探索蠶蛹油調(diào)節(jié)肝損傷的作用機(jī)理。

3.1 蠶蛹油對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠的影響

肝臟是體內(nèi)酒精代謝的主要器官，過(guò)量酒精的攝入會(huì)使肝臟受到不同程度的損傷。因此開(kāi)發(fā)對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的藥物非常重要[20]。急性酒精性肝損傷的機(jī)制是大量乙醇一次性進(jìn)入機(jī)體后，在乙醇脫氫酶的催化下大量脫氫氧化為乙醛和乙酸鹽，使三羧酸循環(huán)障礙和脂肪酸氧化減弱而影響脂肪代謝。乙醇可導(dǎo)致α-2磷酸甘油增多而促進(jìn)甘油三酯合成，致使脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)沉積，同時(shí)激活氧分子，產(chǎn)生大量氧自由基致肝細(xì)胞膜的脂質(zhì)過(guò)氧化及體內(nèi)還原型G S H的耗竭[21]。Shepard等[22]發(fā)現(xiàn)乙醇誘導(dǎo)損傷后，肌動(dòng)蛋白、微管蛋白和角蛋白的分布發(fā)生變化，以及其表達(dá)水平或轉(zhuǎn)譯修飾的改變，導(dǎo)致肝功能的明顯病變。

研究表明[23]，乙醇的代謝物乙醛能顯著損害肝臟利用氧的能力，并加速細(xì)胞內(nèi)的清道夫分子還原型GSH耗竭，加劇自由基介導(dǎo)的毒性作用和脂質(zhì)過(guò)氧化作用。體內(nèi)依賴于GSH的抗氧化系統(tǒng)在抵抗乙醇所致肝損傷中起關(guān)鍵的防護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)a組采用50%乙醇成功建立了小鼠急性酒精性肝損傷模型，結(jié)果表明，預(yù)先灌胃蠶蛹油的小鼠，經(jīng)酒精造模后，與模型組相比肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)相對(duì)減少，血清中的AST與ALT活性和肝組織的MDA含量也有著明顯的下降，而肝組織中的GSH含量明顯升高，提示蠶蛹油可以有效阻止肝細(xì)胞壞死。MDA是脂氧化的最終產(chǎn)物，蠶蛹油組的肝臟 MAD含量相對(duì)模型組減少有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示蠶蛹油可對(duì)抗乙醇所致的肝臟脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減輕乙醇對(duì)肝細(xì)胞的損害。實(shí)驗(yàn)a組還發(fā)現(xiàn)，與陽(yáng)性對(duì)照組(月見(jiàn)草油組)相比，蠶蛹油對(duì)肝損傷小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶活性的調(diào)節(jié)效果更佳。

3.2 蠶蛹油對(duì)免疫性肝損傷小鼠的影響

病毒性肝炎，特別是乙型病毒性肝炎是我國(guó)的常見(jiàn)病和多發(fā)病，目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為乙型肝炎病毒感染引起的肝損傷主要與機(jī)體免疫應(yīng)答有關(guān)，而B(niǎo)CG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)小鼠免疫性肝損傷模型的病理機(jī)制與人類肝炎的免疫功能紊亂相似，是篩選和研究保肝藥物較為理想的模型之一[24]。其損傷機(jī)制為BCG首先激活致敏T淋巴細(xì)胞，尤其是致敏肝內(nèi)庫(kù)普弗細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，并大量聚集于肝臟，當(dāng)注射LPS后進(jìn)一步激活處于致敏狀態(tài)的巨噬細(xì)胞，釋放大量的細(xì)胞毒性介質(zhì)NO、THF-α、IL-12等，從而造成肝細(xì)胞損傷[25]。

實(shí)驗(yàn)b組研究結(jié)果表明，小鼠尾靜脈注射卡介苗和脂多糖后，引起模型組小鼠肝臟、脾臟指數(shù)顯著增加，血清ALT、AST活性顯著升高，肝組織中GSH含量顯著降低、MDA含量顯著增加，證明卡介苗＋脂多糖誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷模型復(fù)制成功。與模型組相比較，蠶蛹油高、低劑量組肝臟、脾臟指數(shù)顯著減小，血清ALT、AST活性顯著降低，肝組織中GSH含量顯著增加，MDA含量顯著減小。總體上看，蠶蛹油效果優(yōu)于月見(jiàn)草油。本實(shí)驗(yàn)中，蠶蛹油組肝損傷小鼠的AST、ALT活性明顯低于模型組，表明蠶蛹油可降低肝細(xì)胞受損的程度；蠶蛹油組GSH含量明顯高于模型組，MDA含量明顯低于模型組，均表明蠶蛹油可改善脂質(zhì)過(guò)氧化程度，間接改善肝細(xì)胞受損程度。

3.3 蠶蛹油對(duì)D-半乳糖胺肝損傷小鼠的影響

D-半乳糖胺是肝細(xì)胞磷酸尿嘧啶核苷的干擾劑，當(dāng)D-半乳糖胺進(jìn)入人體內(nèi)后與磷酸尿苷(u r i d i n e triphosphate，UDP)結(jié)合形成UDP-半乳糖胺致使UDP耗竭，從而使依賴其生物合成的核酸、糖蛋白、脂肪、糖等物質(zhì)合成受到抑制，限制了細(xì)胞器及酶的生成和補(bǔ)充，導(dǎo)致肝細(xì)胞受損。因此，D-半乳糖胺肝損傷模型可用于抗病毒性肝炎藥物的研究[26]。藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，D-半乳糖胺引起的化學(xué)性肝損傷模型，是目前國(guó)際上常用的肝炎模型之一，其中毒機(jī)制的研究也較為深入。D-半乳糖胺通過(guò)引起肝臟的代謝紊亂而導(dǎo)致肝損傷。

實(shí)驗(yàn)c組研究表明，在肝損傷模型小鼠肝臟中MDA的含量顯著增高。而蠶蛹油能夠顯著降低肝損傷模型小鼠肝臟MDA含量及血清ALT、AST水平，提高肝臟GSH活性，尤其是蠶蛹油高劑量組效果更為顯著。這可能與其能夠增加肝細(xì)胞抗自由基攻擊的能力，穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，保護(hù)肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，從而起到保護(hù)肝臟的作用有關(guān)。

綜合蠶蛹油對(duì)3種不同肝損傷模型的調(diào)節(jié)作用，可以初步推斷:蠶蛹油調(diào)節(jié)肝損傷的作用機(jī)理與其降酶、抗脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、阻止肝細(xì)胞壞死作用有關(guān)。其作用機(jī)理可能為抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、提高 GSH含量、穩(wěn)定肝細(xì)胞膜系統(tǒng)、促進(jìn)肝組織修復(fù)等。鑒于蠶蛹油對(duì)不同類型的肝損傷都具有較好的保護(hù)作用，以蠶蛹油建立起一種使用無(wú)毒副作用及無(wú)依賴作用的天然動(dòng)植物為主要來(lái)源的治療方法，值得進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)和利用。

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Protective Effect of Chrysalis Oil against Three Different Types of Liver Injury in Mice

CHEN Wei-ping1，XIE Yuan-qin2，HU Jin-lu2
(1. College of Medicine and Life Science, Zhejiang University City College, Hangzhou 310015, China；2. Insititute of Food Hygiene and Nutrition, Zhejiang University School of Public Health, Hangzhou 310058, China)

Objective: To investigate the protective effect of chrysalis oil against three different types of liver injury in mice. Methods: A total of 150 male ICR mice were equally randomized into 3 groups by weight: group a (acute alcoholic hepatic injury group), group b (immunological liver injury group), and group c (D-galactosamine-induced liver injury group). Then the mice in each group were further randomly assigned into 5 subgroups: normal control, evening promise oil, liver injury control, low and high-dose chrysalis oil subgroups. After administration for 7 days, the mice in each group (except mice in the normal control subgroup) were treated as follows: the mice in group a were given 50% ethanol (12 mL/kg) to establish a mouse model of alcoholic liver injury; the mice in group b were intravenously injected with Bacille de Calmette Guerin (BCG) + lipidpolysaccharide (LPS) to induce a mouse model of immune liver injury; the mice in group c were intraperitoneally injected with D-GAL (600 mg/kg) to induce a mouse model of acute liver injury. Serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) activities and liver malondialdehyde (MDA) and glutathione (GSH) content were measured 24 hours later. Results: The liver and spleen indexes, serum ALT and AST activities, and MDA and GSH content in the liver of mice from the chrysalis oil groups were significantly different to those of the liver injury control group (P ＜ 0.05). The liver and spleen indexes were significantly correlated with ALT and AST activities in the blood and MDA and GSH levels in the liver (P ＜ 0.05). Conclusion: Chrysalis oil has a significant protective effect against ethanol induced acute liver injury, BCG and LPS induced liver injury and D-GAL induced liver injury in mice. Its protective effect against alcoholic liver injury and BCG+LPS induced liver injury is greater than that of evening primrose oil. The mechanism may be related to its property to reduce lipid peroxidation in the body and its ability to prevent liver cells from necrosis.

TS218

A

1002-6630(2012)15-0291-06

2011-07-18

浙江省杭州市科技局科技創(chuàng)新項(xiàng)目(2006831H05)

陳偉平(1956—)，男，副教授，碩士，主要從事?tīng)I(yíng)養(yǎng)與代謝性疾病研究。E-mail:chenwp@zucc.edu.cn

收稿日期:2012-03-28

基金項(xiàng)目:國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2011AA100805-2)；重慶市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(CSTC2011AC1010)；

中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目(XDJK2012B014)

作者簡(jiǎn)介:夏春燕(1989—)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称坊瘜W(xué)與營(yíng)養(yǎng)學(xué)。E-mail:371923346@qq.com

*通信作者:明建(1972—)，男，副教授，博士，研究方向?yàn)槭称坊瘜W(xué)與營(yíng)養(yǎng)學(xué)。E-mail:mingjian1972@163.com

Key words:chrysalis oil；polyunsaturated fatty acids；liver injury；lipid peroxidation