益氣生骨顆粒劑的質量標準研究

謝 艷 朱太詠 秦 娜

（河南省正骨研究院，河南省洛陽市啟明南路82號，471002）

中藥研究

益氣生骨顆粒劑的質量標準研究

謝 艷 朱太詠 秦 娜

（河南省正骨研究院，河南省洛陽市啟明南路82號，471002）

益氣生骨顆粒劑；薄層色譜鑒別

益氣生骨顆粒劑是我院的一項新藥開發制劑。本方由黃芪、黨參、木香、紅花、赤芍等中藥組成，具有益氣生骨，去瘀生新，通脈止痛的作用，用于嚴重跌打損傷、創傷性骨折。為了有效地控制其產品質量，本課題采用薄層色譜法對方中黃芪、木香、紅花及赤芍進行了定性鑒別，對黃芪甲苷的含量進行了測定，現報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 日本島津CS-9301型薄層掃描儀。

1.2 對照品及對照藥材 黃芪甲苷、芍藥苷均購自中國藥品生物制品檢定所，木香、紅花對照藥材由我院藥劑科提供。

1.3 試劑與樣品 化學試劑均為分析純，益氣生骨顆

粒劑及各味藥的陰性對照樣品均由我院制劑科提供。

2 定性鑒別

2.1 木香的鑒別 取9g顆粒劑，用30mL水溶解，用乙醚萃取兩次（30mL，20mL），取乙醚層，加入4% NaOH溶液40mL洗滌，乙醚液加入無水硫酸鈉2g，振搖，濾過，殘渣用乙醚10mL分兩次洗滌，濾液與洗滌液合并，揮干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取木香藥材1g，加水提取1h，同法制成對照藥材溶液。取木香陰性藥液，同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述木香藥材對照溶液1μL，供試品和陰性對照溶液各6μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%香草醛硫酸液顯色，電吹風吹至顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無此斑點。

2.2 紅花的鑒別 取顆粒9g，用水飽和的正丁醇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇5mL溶解，加入已處理好的中性氧化鋁柱上（100 -200目，2g，內徑1.5cm），以甲醇10mL洗脫，收集洗脫液，揮干，殘渣加1mL甲醇溶解為供試品溶液。另取紅花對照藥材1g，加水煎煮1h，上清液同法制成對照藥材溶液。取紅花陰性制劑同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述三種溶液各6μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲苯-甲醇（75∶25∶5）為展開劑，單向展開兩次，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無此斑點。

2.3 赤芍的鑒別 稱取9g顆粒，加氯仿20mL，超聲處理20min，棄去濾液，藥渣加70%乙醇30mL，超聲處理20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取3次（30mL，30mL，30mL），合并正丁醇液，蒸至少量。上中性氧化鋁柱（100-200目，內徑10～15mm，4g）用乙醇-乙酸乙酯（1∶1）30mL預洗，繼以甲醇40mL洗脫，收集洗脫液，蒸干。殘渣加甲醇1mL使溶解為供試品。取芍藥苷標準品制成1mg/mL的標準品溶液。另取赤芍陰性制劑同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述標準品溶液2μL，供試品和陰性對照溶液各8μL分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，電吹風吹至斑點顯色，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無此斑點。

3 黃芪甲苷的含量測定

3.1 對照品溶液的制備 取黃芪甲苷對照品精密稱定2.25mg，置2mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得1.125mg/mL的標準品溶液。

3.2 供試品溶液的制備 取本品12g，研細。置具塞錐形瓶中，精密加入水60mL溶解，稱重，超聲提取30min，放冷，稱重，加水補足減失重量，離心，將上清液轉出。精密吸取濾液45mL，用乙醚提取3次，每次20mL，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用1%NaOH洗滌2次，每次30mL，再用飽和正丁醇的水洗至中性，正丁醇液水浴蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至2mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

3.3 陰性對照液的制備 取陰性對照顆粒，同法做成陰性制備液。

3.4 色譜條件 層析板為硅膠G板。展開劑：氯仿-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展距10cm。顯色劑為10%硫酸乙醇溶液。

3.5 掃描參數 采用單波長反射鋸齒形掃描法，測定波長λs=520nm。光束狹縫：0.4×0.4mm，線性參數SX=3。

3.6 線性關系的考察 精密吸取濃度為每1mL含1.125mg的黃芪甲苷對照品溶液1，2，3，4，5，6μL，分別點于同一薄層板上，展開，顯色，按上述色譜條件測定，以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，得回歸方程Y=648.26X+108.1，r=0.995（n=6），表明黃芪甲苷在1.125～6.75μg濃度范圍內具有良好的線性關系。

3.7 精密度試驗 儀器精密度實驗：對薄層板上同一斑點連續掃描8次，平均峰面積積分值為2781.1，RSD =1.9%。同板精密度實驗：取同一濃度的黃芪甲苷標準品溶液6份各4μL，分別點于同一薄層板上，展開，取出，晾干，顯色后依法操作，薄層掃描測定吸光度峰面積積分值，平均峰面積積分值為3337.9，RSD= 2.06%。異板精密度實驗：取同一黃芪甲苷標準品溶液，上樣3μL，分別點于5塊薄層板上，依法測定，平均峰面積積分值為2035.7，RSD=1.98%。

3.8 穩定性試驗 取供試品溶液點樣，依法操作，對同一斑點每隔20min掃描1次，記錄峰面積積分值，結果表明在2h內基本穩定，RSD=1.65%。

3.9 重現性試驗 取同一批號的樣品5份，按上述測定條件重復測定5次，平均含量為0.66mg/袋，RSD= 2.6%。

3.10 回收率試驗 采用加樣回收法，精密稱取已知含量的益氣生骨顆粒，樣品6份，分別精密添加黃芪甲苷對照品溶液（1.125mg/mL）100μL，按上述方法測定，計算回收率，結果平均回收率為99.38%，RSD= 2.3%。結果見表1。

3.11 樣品測定 精密吸取供試品溶液6μL，對照品溶液2μL和4μL，分別交叉點于同一硅膠薄層板上，依法展開和測定。共測定樣品5批，結果見表2。

表1 回收率實驗結果（n=6）

表2 含量測定結果 （n=5）

4 討論

其中木香的鑒別中NaOH提取時要充分分離，才可以取乙醚層。黃芪甲苷含量測定時，在樣品的制備過程中，以前有報道用水飽和的正丁醇提取后，用氨水提取，與黃芪甲苷緊鄰的上方有一紅色干擾。需上中性氧化鋁柱才能除去，此方法可以省去這一步。

［1］倪艷，劉霞，李先榮，等.男康片的薄層色譜鑒別研究.時珍國醫國藥，2002，13（7）：409.

［2］陳家進，劉俊怡，蘇娟，等.復方益芪顆粒質量標準研究.中成藥，2005，27（2）：167.

（2010-09-13收稿）

河南省科技公關項目（991170632）