轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷對米蛾幼蟲解毒酶系的影響

肖海兵， 劉映紅， 劉 旭， 肖珍珍， 楊 璐， 龍 潔

（西南大學(xué)植物保護學(xué)院昆蟲學(xué)及害蟲控制工程重慶市重點實驗室，重慶 400716）

稻谷儲藏是水稻生產(chǎn)中的一個重要環(huán)節(jié)。由于受到倉儲條件和防蟲技術(shù)的限制，每年在北方地區(qū)因蟲害造成的儲糧損失為3%～5%，南方地區(qū)為6%～8%，損失糧食200億～300億kg［1]。轉(zhuǎn)Bt基因稻谷能有效降低儲糧損率，儲藏17個月后，Bt稻谷的蟲蝕率顯著降低，達0.70%～1.20%［2]。但是儲藏期的轉(zhuǎn)Bt基因稻谷‘KMD1’和‘KMD2’的Bt毒蛋白含量分別為1.34μg／g和1.42μg／g，且較為穩(wěn)定，不容易被降解［3－4]，長期接觸轉(zhuǎn)基因水稻的倉儲害蟲會通過解毒代謝增加對轉(zhuǎn)基因稻谷的適應(yīng)性。米蛾（Corcyra cephalonica Staint）屬鱗翅目，螟蛾科，蠟螟亞科，是重要的倉庫害蟲，主要為害大米、稻谷和多種倉儲物［5]。研究轉(zhuǎn)Bt基因稻谷對米蛾等鱗翅目靶標(biāo)儲糧害蟲的影響具有重要的現(xiàn)實意義和經(jīng)濟意義。

Bt殺蟲蛋白受靶標(biāo)害蟲中腸蛋白酶水解而被激活，經(jīng)激活的Bt毒蛋白與中腸刷狀緣膜囊泡（BBMV）受體結(jié)合，最終導(dǎo)致腸道內(nèi)壁的病變而引起死亡［6]。而昆蟲解毒酶主要是以各種酯酶為代表，對分解外源毒物、維持正常生理代謝起重要作用［7]。Bt毒蛋白顯著影響棉鈴蟲和玉米螟的解毒酶酶活，可能發(fā)生代謝抗性［8－9]。為了拓寬轉(zhuǎn)基因水稻的抗蟲譜和延緩害蟲抗性風(fēng)險，我國將豇豆胰白酶抑制劑（CpTI）基因修飾后（命名為sck基因）與Bt－cry1Ac基因構(gòu)成雙價抗蟲融合基因并成功地轉(zhuǎn)入‘明恢’系列雜交水稻中［10]，并對二化螟幼蟲具有高致死率［11]。轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷對儲糧害蟲生化特性的影響尚未見報道。通過研究解毒酶和酯酶同工酶的變化，可在生化水平上分析米蛾對轉(zhuǎn)Bt基因稻谷產(chǎn)生抗性的原因［12]，為揭示轉(zhuǎn)Bt基因稻谷對米蛾的生理生化作用機制和代謝抗性機理提供理論依據(jù)，更有利于實現(xiàn)轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因水稻的持續(xù)利用。

1 材料與方法

1.1 供試稻谷及Bt毒蛋白含量

試驗用水稻稻谷為福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所提供的儲藏6個月的轉(zhuǎn)sck／cry1Ac（sck基因為修飾的CpTI基因）雙價抗蟲基因水稻稻谷‘Ⅱ優(yōu)MS67’，實驗室用ELISA方法測定sck／cry1Ac中Cry1Ac毒蛋白含量為1.375μg／g。非轉(zhuǎn)基因親本‘Ⅱ優(yōu)明86’為對照品種。

谷粒前處理：稻谷經(jīng)水洗除空殼，烘干（45±2.5）℃，12h，置于－20℃冰箱中殺蟲處理2d，置于盛有飽和食鹽水的干燥器中一個月，調(diào)節(jié)稻谷含水量至20%左右，試驗前粉碎。

1.2 供試蟲源及藥劑

供試米蛾購自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，在（27±1）℃、75%～85%RH的實驗室條件下用玉米粉飼養(yǎng)數(shù)代，以日齡計算，將3齡幼蟲作為試蟲。

碘化硫代乙酰膽堿、5，5－二硫基－雙－（2－硝基苯甲酸）（DTNB）、毒扁豆堿、1，2－二氯－4－硝基苯（CDNB）、還原型谷胱甘肽（GSH）、N，N’－甲叉雙丙烯酰胺（Bis）、丙 烯 酰 胺 （Acr）、三 羥 甲 基 氨 基 甲 烷（Tris）、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA鈉鹽）、四甲基乙二胺（TEMED）、α－乙酸萘酯、β－乙酸萘酯，購自重慶百萃生物科技有限公司；其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。酸性磷酸酯酶（ACP）、堿性磷酸酯酶（AKP）試劑盒，購自南京建成生物工程研究所。

1.3 酶活力測定

酶液的制備：將米蛾3齡幼蟲饑餓1h，置于稻谷粉‘Ⅱ優(yōu) MS67’及對照上飼喂，在取食12、24、36、48、60h和72h后，將5頭幼蟲放入預(yù)冷過的玻璃勻漿器中，加入1.5mL pH7.0的0.1mol／L磷酸緩沖液，冰浴勻漿。勻漿液在4℃、10 000g條件下離心10min。取上清液作為酶源。每處理重復(fù)5次。在Tecan酶標(biāo)儀下分析酶活力。

α－乙酸萘酯酶活力測定：參照 Van Asperen［13]方法并加以改進。反應(yīng)混合液中含有10μL酶液（用前稀釋1倍）、90μL 0.04mol／L pH7.0的磷酸緩沖液、50μL 4×10－4mol／L的α－乙酸萘酯液，在37℃水浴中保溫30min，加入50μL顯色劑（1%固藍B鹽與SDS溶液按2∶5混合），室溫下放置10min，600nm波長光比色，測其A值。每處理重復(fù)測定3次，以下均同。以α－萘酚作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

α－乙酸萘酯羧酸酯酶活力測定：參照Van Asperen［13]方法并加以改進。反應(yīng)混合液中含有75μL酶液、100μL 3×10－4底物溶液（含0.03mol／Lα－乙酸萘酯液和1×10－4mol／L毒扁豆堿液），混勻，在37℃水浴中保溫30min，加入25μL顯色劑（1%固藍B鹽與SDS溶液按2∶5混合），室溫下放置10min，600nm處比色，測其A值。

乙酰膽堿酯酶活力測定：參照Ellman［14]方法并加以改進。反應(yīng)混合液中含有50μL酶液，50μL 0.1mol／L pH7.0的磷酸緩沖液，100μL 1.5mmol／L碘化硫代乙酰膽堿，在37℃水浴中保溫10min，加入100μL 0.3mmol／L DTNB液，在37℃、412nm條件下比色，測其A值在20min內(nèi)的變化，1min讀1次數(shù)。

谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶活性測定：參照 Ranch ＆Nauen［15]的方法，反應(yīng)混合液含50μL 0.6mmol／L CDNB、50μL 6mmol／L GSH，反應(yīng)體系先于37℃水浴中保溫20min，再加入酶液50μL，在37℃，340nm條件下比色，測其A值在5min內(nèi)的變化，30s讀數(shù)1次。

酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶活性測定：具體步驟按照試劑盒說明書進行。測定原理：酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶分解磷酸苯二鈉，產(chǎn)生游離酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4－氨基安替吡啉作用經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色醌衍生物，根據(jù)紅色深淺可以測定酶活力的高低。

1.4 酯酶同工酶電泳

酶液的制備：將米蛾3齡幼蟲饑餓1h，置于‘Ⅱ優(yōu)MS67’稻谷粉及對照上飼喂，在取食72h后，將5頭幼蟲放入預(yù)冷過的玻璃勻漿器中，加入勻漿緩沖液，冰浴勻漿。勻漿液在4℃，20 000g條件下離心30min，取上清液作為酶源。

電泳采用DYY－12型電腦三恒多用電泳儀。將制備好的分離膠和濃縮膠膠板放入4℃冰箱中預(yù)冷30min，用微量注射器量取酶液各25μL，分別注入加樣孔中，每種酶液異膠處理3個重復(fù)。采用恒流方式，在濃度為3.5%濃縮膠中，電流12mA，進入濃度為7.5%的分離膠后增加至24mA。電泳時間約4h，整個電泳過程中將電泳槽置于4℃恒溫冰箱以保持酶的活性。

剝膠、染色、脫色及成像：電泳結(jié)束后在預(yù)冷的蒸餾水中剝膠，將膠移至固藍染色液中，置于黑暗、37℃水浴條件下染色45～60min。然后轉(zhuǎn)入脫色液中脫色，直至膠的背景為無色，約為2h。用SX－300型凝膠成像系統(tǒng)進行酶譜分析［16]。

1.5 可溶性蛋白含量測定

采用考馬斯亮藍G－250法測定［17]，以牛血清蛋白（BSA）為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。

1.6 試驗數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用SPSS軟件對試驗數(shù)據(jù)進行分析，差異顯著性比較采用獨立樣本成組數(shù)據(jù)的平均數(shù)比較t測驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷對米蛾幼蟲體內(nèi)α－乙酸萘酯酶和α－乙酸萘酯羧酸酯酶活力的影響

米蛾在取食轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷后，其體內(nèi)α－乙酸萘酯酶的活力變化較為明顯，隨著取食時間的延長，α－乙酸萘酯酶的活力逐漸被抑制，24h后各處理均顯著低于對照（p＜0.05），在24h和48h時達到極顯著（p＜0.01），48h后，α－乙酸萘酯酶的活力均在對照的一半以下，到72h與對照的活力比值僅為0.37。α－乙酸萘酯羧酸酯酶的活力變化與α－乙酸萘酯酶呈相反趨勢，隨著取食時間的延長，在24h后各處理均顯著高于對照（p＜0.05），在24、36、48h和72h時與對照差異都達到極顯著水平（p＜0.01），在60h時活力達到對照的1.93倍。

表1 取食轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷不同時間后米蛾幼蟲體內(nèi)α－乙酸萘酯酶及α－乙酸萘酯羧酸酯酶活力的變化1）

2.2 轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷對米蛾幼蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶和谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶活力的影響

從表2可以看出，米蛾在取食sck／cry1Ac轉(zhuǎn)基因稻谷后，隨著取食時間的延長，乙酰膽堿酯酶活力有升高的趨勢，24h后各處理均顯著高于對照（p＜0.05），36h和48h時差異達到極顯著（p＜0.01），在36h時活力達到對照的1.56倍。在米蛾取食期間，谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶的活性與對照相比變化不大，在24h時，顯著低于對照（p＜0.05），之后其活 性保持穩(wěn)定，與對照無顯著差異。

表2 取食轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷不同時間后米蛾幼蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶及谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶活力的變化1）

2.3 轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷對米蛾幼蟲體內(nèi)酸、堿性磷酸酯酶活力的影響

表3顯示，米蛾在取食轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷后，酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶的活性都呈下降趨勢，酸性磷酸酯酶活力在12h和72h時顯著低于對照（p＜0.05），在72h時差異達極顯著水平（p＜0.01），72h時與對照的活力比值為0.75。堿性磷酸酯酶活力在24h后均顯著低于對照（p＜0.05），在48h和72h時差異達極顯著水平（p＜0.01），48h時與對照的活力比值最低，為0.40。

表3 取食轉(zhuǎn)sck／cry1Ac基因稻谷不同時間后米蛾幼蟲體內(nèi)磷酸酯酶活力的變化1）

2.4 酯酶同工酶電泳比較

取食轉(zhuǎn)Bt基因稻谷和對照稻谷72h后米蛾幼蟲酯酶同工酶電泳圖譜見圖1。由圖1可以看出，兩處理均有4條明顯的譜帶，這4條帶顯色深淺不一，其中染色最深的酶帶在兩處理中都為Est3酶帶，與對照相比，差異最大的為Est4酶帶，其染色效果較對照淺很多，其余3條帶（Est1、Est2、Est3）的染色效果也較對照淺。表明米蛾幼蟲取食轉(zhuǎn)Bt基因稻谷后，酯酶Est1、Est2、Est3、Est4的活性均有所下降，其中Est4酯酶活性下降最明顯。另外，與對照相比，酶帶的遷移距離未發(fā)生改變，說明米蛾幼蟲經(jīng)轉(zhuǎn)Bt基因稻谷飼喂誘導(dǎo)后，體內(nèi)酯酶同工酶的分子量沒有顯著變化。圖2中的染色密度掃描結(jié)果也進一步證實了圖1的結(jié)果。

3 討論

昆蟲降解植物體內(nèi)帶毒性異源化合物是適應(yīng)環(huán)境的一種重要途徑［18]。這種適應(yīng)性前期表現(xiàn)在昆蟲體內(nèi)酶活性的變化。羧酸酯酶、磷酸酯酶、乙酰膽堿酯酶和谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶是昆蟲體內(nèi)主要解毒酶和保護酶［19－20]，對以上這些酶活性的研究有助于探討昆蟲代謝毒蛋白機理。徐艷聆等報道取食轉(zhuǎn)Bt基因玉米后的玉米螟幼蟲體內(nèi)α－乙酸萘酯酶有降低趨勢，乙酰膽堿酯酶有升高趨勢［9]，酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶都顯著降低［21]，本研究結(jié)果與其結(jié)論一致。但本研究顯示谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶的活性除飼喂24h外，處理與對照相比無顯著差異。

羧酸酯酶能水解脂族羧酸酯、芳族酯、芳族胺以及硫酯等酯類化合物［22]。蘭亦全等報道羧酸酯酶活性提高是甜菜夜蛾對氰戊菊酯和順式氯氰菊酯產(chǎn)生抗性的重要原因之一［23]。本研究結(jié)果中，米蛾幼蟲體內(nèi)α－乙酸萘酯酶活性顯著下降，SCK／Cry1Ac毒蛋白抑制α－乙酸萘酯酶活性，從而干擾了其正常的生理代謝。這可能是轉(zhuǎn)Bt基因稻谷殺蟲的重要機制之一。然而米蛾幼蟲體內(nèi)α－乙酸萘酯羧酸酯酶活性顯著升高，從而發(fā)揮出羧酸酯酶的解毒功能。

乙酰膽堿酯酶是昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)中最重要的酶系之一，同時又是有機磷和氨基甲酸酯類殺蟲劑的作用靶標(biāo)［24]，直接調(diào)節(jié)昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)的功能。取食Bt棉甜菜夜蛾4齡幼蟲體內(nèi)的乙酰膽堿酯酶活力比取食常規(guī)棉低［25]。但徐艷聆等報道取食轉(zhuǎn)Bt基因玉米后的玉米螟幼蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶有升高趨勢，在72h活力達到對照的2.5倍［9]。棉鈴蟲幼蟲在取食Bt毒蛋白后體內(nèi)羧酸酯酶和乙酰膽堿酯酶的活力有所升高［26]。本研究結(jié)果中，米蛾幼蟲取食Bt毒蛋白后，體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的活性有顯著升高。其活性升高可能補償于被SCK／Cry1Ac毒蛋白抑制的乙酰膽堿酯酶功能，進而維持正常神經(jīng)傳導(dǎo)。表明乙酰膽堿酯酶可能在SCK／Cry1Ac毒蛋白的代謝中起到相當(dāng)重要的作用。

谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶是生物體內(nèi)普遍存在，清除異源性有毒化合物最為有效的解毒酶［27]。徐艷聆等報道GSTs活性顯著下降［9]，但也有報道GSTs對擬除蟲菊酯類化合物并不直接代謝，而是間接起作用［28]。本研究結(jié)果中，GSTs活性在整個取食過程中與對照相比變化不大，除24h外均未形成顯著差異。說明本研究的谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶可能沒有直接參與SCK／Cry1Ac毒蛋白代謝。

磷酸酯酶包括酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶，酸性磷酸酯酶稱為溶酶體的標(biāo)記酶，堿性磷酸酯酶是一個刷狀緣膜標(biāo)志酶［19]。磷酸酯酶對外源毒素的解毒代謝和抗性的形成也起著重要作用［21]。本研究結(jié)果表明，米蛾幼蟲在取食轉(zhuǎn)SCK／Cry1Ac毒蛋白基因稻谷后，隨著取食時間的延長，酸性磷酸酯酶和堿性磷酸酯酶的活性都受到不同程度的抑制作用，表明這兩種磷酸酯酶直接參與Bt毒蛋白的代謝作用。另外，據(jù)報道昆蟲取食轉(zhuǎn)Bt基因玉米后，隨時間延長，體內(nèi)微環(huán)境變化，酶活力降低，造成幼蟲拒食后饑餓［23]，從而使昆蟲體重下降，加速昆蟲的死亡。在本研究中，也發(fā)現(xiàn)可能由昆蟲抗性機制的行為機理引起的類似現(xiàn)象［29]。因此，也進一步證明磷酸酯酶活力的變化對昆蟲的拒食作用和體重的下降方面有著重要影響。

同工酶是具有相同或相似催化功能而分子結(jié)構(gòu)不同的一類酶，其特點是用同一染色方法顯示出相同酶帶在遺傳和生化上的差異［30]。從酯酶同工酶電泳結(jié)果進一步驗證了以上酶活性測定結(jié)果。結(jié)果表明經(jīng)過轉(zhuǎn)基因稻谷處理的米蛾幼蟲，酯酶的活性在總體上受到抑制，可能是由于經(jīng)sck／cry1Ac基因誘導(dǎo)，酯酶蛋白表達量減少從而造成酶活性的降低，這需要進一步進行分子生物學(xué)研究證明。另外，米蛾對轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲稻谷的抗性遺傳學(xué)還需進一步研究。

總之，米蛾幼蟲取食轉(zhuǎn)SCK／Cry1Ac毒蛋白基因稻谷后的一定時間范圍內(nèi)，α－乙酸萘酯酶活性下降變化呈極顯著，而α－乙酸萘酯羧酸酯酶活性升高變化呈極顯著，乙酰膽堿酯酶活性也顯著升高。但酸性磷酸酯酶、堿性磷酸酯酶和酯酶同工酶活性顯著降低。由此表明這些解毒酶和酯酶同工酶直接參與Bt毒蛋白的代謝作用。

［1]嚴(yán)曉平，宋永成，沈兆鵬，等.中國儲糧昆蟲2005年最新名錄［J].糧食儲藏，2006，35（2）：3－9.

［2]蔡萬倫，石尚柏，楊長舉，等.轉(zhuǎn)Bt基因水稻稻谷對幾種主要儲糧害蟲的影響［J].生物技術(shù)通報，2006（S1）：268－271.

［3]謝小波，舒慶堯.用Envirologix Cry1Ab／Cry1Ac試劑盒快速測定轉(zhuǎn)基因水稻Bt殺蟲蛋白含量的研究［J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2001，34（5）：465－468.

［4]吳志平，陳子元，余虹，等.從轉(zhuǎn)基因水稻中提取Bt毒蛋白的方法與效率［J].浙江大學(xué)學(xué)報，2001，27（2）：218－220.

［5]李根君，姜峰立，郭建軍.米蛾的形態(tài)及習(xí)性觀察［J].昆蟲知識，1982（6）：18－20.

［6]Zhu Yucheng，Guo Zibiao，Chen Mingshun.Major putative pesticide receptors，detoxification enzymes，and transcriptional profile of the midgut of the tobacco budworm，Heliothis virescens（Lepidoptera：Noctuidae）［J].Journal of Invertebrate Pathology，2011，106：296－307.

［7]陳長琨.昆蟲生理生化實驗［M].北京：農(nóng)業(yè)出版社，1993：26－29，124－127.

［8]梁革梅，譚維嘉，郭予元.棉鈴蟲Bt抗感種群間數(shù)種解毒酶和中腸蛋白酶活性的比較［J].植物保護學(xué)報，2001，28（2）：133－138.

［9]徐艷聆，王振營，何康來，等.轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲玉米對亞洲玉米螟幼蟲幾種主要酶系活性的影響［J].昆蟲學(xué)報，2006，49（4）：562－567.

［10]趙紅盈，張永軍，吳孔明，等.轉(zhuǎn)cry1Ac／CpTI雙價抗蟲水稻Cry1Ac殺蟲蛋白的表達特性及其對二化螟的毒殺效果［J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，2004，12（1）：76－79.

［11]張永軍，趙紅盈，吳孔明，等.轉(zhuǎn)sck單價基因和cry1Ac／sck雙價基因水稻對二化螟的致死效應(yīng)及中腸組織病理變化觀察［J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報，2007，13（2）：220－223.

［12]譚聲江，陳曉峰，李典謨.昆蟲對Bt毒素的抗性機理研究進展［J].昆蟲知識，2001，38（1）：12－17.

［13]Van Asperen K.A study of house fly esterase by means of a sensitive colorimetric method［J].J Insect Physiol，1962，8：401－416.

［14]Ellman G L，Courtney K D，Andres Jr V.A new and rapid colorimetric determination of a acetylcholinesterase activity［J].Biochem Pharmacol，1961，7：88－94.

［15]Rauch N，Nauen R.Characterization and molecular cloning of aglutatione S－transferase from the whitefly Bemisia tabaci（Hemiptera：Aleyrodidae）［J].Insect Biochemistry and Molecular Biology，2004，34：321－329.

［16]屈伸，劉志國.分子生物學(xué)實驗技術(shù)［M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：5－20.

［17]Bradford M M.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein unitizing the principle of protein dye binding［J].Anal Biochem，1976，72：248－254.

［18]Johnson K S.Comparative detoxification of plant（Magnolia virginiana）allelochemicals by generalist and specialist Satur－niid silkmoths［J].J Chem Ecol，1999，25：253－269.

［19]Senthil Nathan S，ManYoung Choi，Chae Hoon Paik，et al.Food consumption，utilization，and detoxification enzyme activity of the rice leaffolder larvae after treatment with Dysoxylum triterpenes［J].Pesticide Biochemistry and Physiology，2007，88：260－267.

［20]Valles S M，Koehler P G，Brenner R J.Comparative insecticide susceptibility and detoxification enzyme activities among pestiferous Blattodea［J].Comparative Biochemistry and Physiology，1999，124（3）：227－232.

［21]徐艷聆，王振營，何康來，等.轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲玉米對亞洲玉米螟幼蟲磷酸酯酶活性的影響［J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（3）：630－631.

［22]王殿軒，原鍇，高希武.赤擬谷盜的磷化氫敏感和抗性品系體內(nèi)羧酸酯酶的活性比較［J].昆蟲知識，2010，47（2）：275－280.

［23]蘭亦全，趙士熙.甜菜夜蛾對氰戊菊酯和順式氯氰菊酯的抗性機理［J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，2010，21（1）：203－208.

［24]黃誠華，方琦，葉恭銀，等.二化螟幼蟲抗藥性相關(guān)酶系的組織及亞細胞分布特征［J].廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，40（2）：153－158.

［25]郭建英，吳剛，萬方浩.甜菜夜蛾體內(nèi)代謝耐受性對轉(zhuǎn)Bt基因棉響應(yīng)的時間動態(tài)［J].中國科學(xué)，2009，39（10）：940－947.

［26]張少燕，李典謨，謝寶瑜.Bt毒蛋白對棉鈴蟲的生長發(fā)育和相關(guān)酶活性的影響［J].昆蟲知識，2004，41（6）：536－540.

［27]Sivori J L，Casabe N，Zerba E N，Wood E J.Induction of glutathione S－transferase activity in Triatoma infestans［J].Memorias do Instituto Oswaldo Cruz，1997，92（6）：797－802.

［28]Vontas J G，Small G J，Nikou D C，et al.Purification，molecular cloning and heterologous expression of a glutathione S－transferase involved in insecticide resistance from the rice brown planthopper，Nilaparvata lugens［J].J Biochem，2002，362：329－337.

［29]曹偉，劉標(biāo)，鄭央萍，等.靶標(biāo)昆蟲對轉(zhuǎn)Bt基因作物產(chǎn)生抗性的機理及研究進展［J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（4）：2025－2028.

［30]梁靚，段立清，尹鳳民，等.7種小蠹蟲酯酶同工酶的比較研究［J].植物保護，2007，33（6）：70－74.