冬蟲夏草微粉膠囊的制備及其腺苷的體外溶出度的測(cè)定

嚴(yán) 冬 梁舉春

（1.西藏自治區(qū)〈成都〉科技孵化園 四川 成都 610000；2.西藏天知生物科技開發(fā)有限公司 西藏 拉薩 850000）

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復(fù)合體.冬蟲夏草具有補(bǔ)腎益肺，止血化痰的功效.臨床用于腎虛精虧，陽痿遺精，腰膝酸痛，久咳虛喘，勞嗽咯血.在整個(gè)冬蟲夏草貿(mào)易市場(chǎng)，以及人們對(duì)冬蟲夏草的服用，仍以原生冬蟲夏草為主，大多采用泡酒，煲湯或者直接服用.但這種服用方式，不能科學(xué)地有效吸收和利用，尤其在目前，1g冬蟲夏草價(jià)值最貴可達(dá)800元以上.為最大化利用該傳統(tǒng)名貴中藥材，本文采用目前較先進(jìn)的真空冷凍及超微粉碎技術(shù)制備冬蟲夏草微粉膠囊，并以腺苷為指標(biāo)，測(cè)定了冬蟲夏草微粉膠囊的體外溶出度.

1 儀器設(shè)備與材料

實(shí)驗(yàn)所用儀器包括：ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀 （天津大學(xué)儀器廠），HP1100高效液相色譜儀（安捷倫公司）；Mettler-AB204電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）.

實(shí)驗(yàn)所用設(shè)備包括：LGJ-1真空冷凍干燥機(jī)，SYFM-108超微粉碎機(jī).

實(shí)驗(yàn)所用藥材包括：腺苷對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供（批號(hào)：110879-200202，供含量測(cè)定用），冬蟲夏草微粉膠囊（0.3g/粒）(批號(hào)為：100101).所用藥材經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室吳啟南教授鑒定合格可用.

實(shí)驗(yàn)所用試劑包括：磷酸和甲醇為色譜純、三蒸水（自制），其他試劑均為分析純.

2 方法

2.1 冬蟲夏草微粉膠囊的制備

冬蟲夏草經(jīng)揀洗后用真空冷凍干燥機(jī)進(jìn)行干燥，再用超微粉碎進(jìn)行粉碎，粉碎后的微粉過300目篩，裝入膠囊，即得.

2.2 腺苷的體外溶出度測(cè)定

1）冬蟲夏草微粉膠囊中的腺苷的含量測(cè)定

參照 《中國藥典》2010年版一部冬蟲夏草含量測(cè)定項(xiàng)下的方法[1]進(jìn)行測(cè)定.

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取腺苷約1.4mg，置10mL量瓶中，用90%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取溶液1mL，置5mL量瓶中，加90%甲醇至刻度，搖勻，即得28μg/mL.

供試品溶液的制備：精密稱定冬蟲夏草微粉0.5g共3份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入90%甲醇10mL，密塞，搖勻，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用90%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得.

方法學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，以腺苷為對(duì)照品進(jìn)行線性關(guān)系考察，結(jié)果腺苷在0.112μg～0.392μg范圍內(nèi)線性良好，回歸方程：y=0.019x-0.003,R2=0.9999.準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果表明，腺苷的加樣回收率平均為104.01%，RSD為1.70%(n=9).取上述供試品液每隔1h測(cè)定，結(jié)果表明供試品液在8h內(nèi)穩(wěn)定.取供試品液平行測(cè)定6次，結(jié)果RSD為1.77%，重復(fù)性良好.

2）溶出度測(cè)定

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)及對(duì)照品溶液的制備見冬蟲夏草微粉膠囊中的腺苷的含量測(cè)定項(xiàng)下.

供試品溶液的制備：取冬蟲夏草微粉膠囊，照溶出度測(cè)定法[2]（中國藥典2010年版二部附錄X C第二法 槳法），以450mL鹽酸緩沖液為溶出介質(zhì)，溫度為37℃±0.5℃，轉(zhuǎn)速為100r/min依法操作，于10min，20min，30min，40min，50min，60min，70min，80min 分 別 取 樣 10mL，同時(shí)補(bǔ)充同體積溶出介質(zhì).樣品液經(jīng)微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得.

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL與供試品溶液10～20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得.

3 結(jié)果

冬蟲夏草微粉膠囊溶出度測(cè)定結(jié)果見表1.

表1 冬蟲夏草微粉膠囊溶出度（%）測(cè)定結(jié)果

根據(jù)表1制出冬蟲夏草微粉膠囊溶出度曲線圖，見圖1，2.

圖1 冬蟲夏草微粉膠囊溶出度曲線

圖2 冬蟲夏草微粉膠囊平均溶出度曲線

由以上數(shù)據(jù)和曲線可知，冬蟲夏草微粉膠囊在前10分鐘，溶出非常少，到達(dá)20分鐘時(shí)，大量溶出，溶出度高達(dá)97%，隨著時(shí)間推移，藥粉繼續(xù)溶出，在40分鐘的時(shí)候到達(dá)溶出最高點(diǎn)，且溶出度基本達(dá)到100%.

4 討論

4.1 真空冷凍干燥，是通過將物料中的水分快速的降到-40℃并凝結(jié)成冰，再迅速升溫，使冰升華，從而達(dá)到干燥的作用.物料通過真空冷凍干燥，能夠確保物料的成分，含量不被破壞，能最大限度的保持物料的生物原樣性.超微粉碎，通過520根各重1kg的不銹鋼棒的高速振蕩、摩擦將物料研磨成可以達(dá)300目的粉末.物料通過超微粉碎，其細(xì)胞破壁率達(dá)95%以上，最細(xì)粒度可達(dá)0.1μm，使物料的有效成分能被人體充分吸收，提高生物利用度，更好的發(fā)揮物料的功效.為最大化利用日益稀少的珍貴的冬蟲夏草資源，我們采用了這兩種先進(jìn)技術(shù)制備冬蟲夏草微粉膠囊.

4.2 據(jù)報(bào)道，冬蟲夏草具有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，以及抗腫瘤作用、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌作用、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、抗菌等功能，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有鎮(zhèn)靜和抗驚厥作用，對(duì)腎臟也有調(diào)節(jié)作用，尚有促進(jìn)造血、抗病毒和護(hù)肝等作用.野生冬蟲夏草含粗蛋白29.1%～33%,粗脂肪8.62%,總糖13.94%～24.20%，粗纖維 18.5%,水分 10.8%,灰分 8.64%[3].冬蟲夏草中還含有氨基酸、脂肪酸、核苷類物質(zhì)、甾醇、甘露醇、多糖等，這些成分是冬蟲夏草發(fā)揮生理活性或藥效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，其中核苷類物質(zhì)中的腺苷是冬蟲夏草最重要的活性物質(zhì)之一[5].故本文以腺苷為指標(biāo)成分測(cè)定冬蟲夏草微粉膠囊的體外溶出度.

[1]國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:附錄Ⅵ D.

[2]國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典(二部)[S].2010.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:附錄X C.

[3]王尊生,顧宇翔,周麗,等.冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)菌絲體固體發(fā)酵粉化學(xué)成分的分析[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2005,17(3):331-336.