冬蟲夏草微粉膠囊的制備及其腺苷的體外溶出度的測定

嚴 冬 梁舉春

（1.西藏自治區(qū)〈成都〉科技孵化園 四川 成都 610000；2.西藏天知生物科技開發(fā)有限公司 西藏 拉薩 850000）

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座和幼蟲尸體的干燥復合體.冬蟲夏草具有補腎益肺，止血化痰的功效.臨床用于腎虛精虧，陽痿遺精，腰膝酸痛，久咳虛喘，勞嗽咯血.在整個冬蟲夏草貿(mào)易市場，以及人們對冬蟲夏草的服用，仍以原生冬蟲夏草為主，大多采用泡酒，煲湯或者直接服用.但這種服用方式，不能科學地有效吸收和利用，尤其在目前，1g冬蟲夏草價值最貴可達800元以上.為最大化利用該傳統(tǒng)名貴中藥材，本文采用目前較先進的真空冷凍及超微粉碎技術(shù)制備冬蟲夏草微粉膠囊，并以腺苷為指標，測定了冬蟲夏草微粉膠囊的體外溶出度.

1 儀器設(shè)備與材料

實驗所用儀器包括：ZRS-8G智能溶出試驗儀 （天津大學儀器廠），HP1100高效液相色譜儀（安捷倫公司）；Mettler-AB204電子天平（上海精密科學儀器有限公司）.

實驗所用設(shè)備包括：LGJ-1真空冷凍干燥機，SYFM-108超微粉碎機.

實驗所用藥材包括：腺苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供（批號：110879-200202，供含量測定用），冬蟲夏草微粉膠囊（0.3g/粒）(批號為：100101).所用藥材經(jīng)成都中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室吳啟南教授鑒定合格可用.

實驗所用試劑包括：磷酸和甲醇為色譜純、三蒸水（自制），其他試劑均為分析純.

2 方法

2.1 冬蟲夏草微粉膠囊的制備

冬蟲夏草經(jīng)揀洗后用真空冷凍干燥機進行干燥，再用超微粉碎進行粉碎，粉碎后的微粉過300目篩，裝入膠囊，即得.

2.2 腺苷的體外溶出度測定

1）冬蟲夏草微粉膠囊中的腺苷的含量測定

參照 《中國藥典》2010年版一部冬蟲夏草含量測定項下的方法[1]進行測定.

對照品溶液的制備：精密稱取腺苷約1.4mg，置10mL量瓶中，用90%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取溶液1mL，置5mL量瓶中，加90%甲醇至刻度，搖勻，即得28μg/mL.

供試品溶液的制備：精密稱定冬蟲夏草微粉0.5g共3份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入90%甲醇10mL，密塞，搖勻，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用90%甲醇補足減失的重量，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得.

方法學試驗結(jié)果表明，以腺苷為對照品進行線性關(guān)系考察，結(jié)果腺苷在0.112μg～0.392μg范圍內(nèi)線性良好，回歸方程：y=0.019x-0.003,R2=0.9999.準確度試驗結(jié)果表明，腺苷的加樣回收率平均為104.01%，RSD為1.70%(n=9).取上述供試品液每隔1h測定，結(jié)果表明供試品液在8h內(nèi)穩(wěn)定.取供試品液平行測定6次，結(jié)果RSD為1.77%，重復性良好.

2）溶出度測定

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗及對照品溶液的制備見冬蟲夏草微粉膠囊中的腺苷的含量測定項下.

供試品溶液的制備：取冬蟲夏草微粉膠囊，照溶出度測定法[2]（中國藥典2010年版二部附錄X C第二法 槳法），以450mL鹽酸緩沖液為溶出介質(zhì)，溫度為37℃±0.5℃，轉(zhuǎn)速為100r/min依法操作，于10min，20min，30min，40min，50min，60min，70min，80min 分 別 取 樣 10mL，同時補充同體積溶出介質(zhì).樣品液經(jīng)微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得.

測定法：分別精密吸取對照品溶液10μL與供試品溶液10～20μL，注入液相色譜儀，測定，即得.

3 結(jié)果

冬蟲夏草微粉膠囊溶出度測定結(jié)果見表1.

表1 冬蟲夏草微粉膠囊溶出度（%）測定結(jié)果

根據(jù)表1制出冬蟲夏草微粉膠囊溶出度曲線圖，見圖1，2.

圖1 冬蟲夏草微粉膠囊溶出度曲線

圖2 冬蟲夏草微粉膠囊平均溶出度曲線

由以上數(shù)據(jù)和曲線可知，冬蟲夏草微粉膠囊在前10分鐘，溶出非常少，到達20分鐘時，大量溶出，溶出度高達97%，隨著時間推移，藥粉繼續(xù)溶出，在40分鐘的時候到達溶出最高點，且溶出度基本達到100%.

4 討論

4.1 真空冷凍干燥，是通過將物料中的水分快速的降到-40℃并凝結(jié)成冰，再迅速升溫，使冰升華，從而達到干燥的作用.物料通過真空冷凍干燥，能夠確保物料的成分，含量不被破壞，能最大限度的保持物料的生物原樣性.超微粉碎，通過520根各重1kg的不銹鋼棒的高速振蕩、摩擦將物料研磨成可以達300目的粉末.物料通過超微粉碎，其細胞破壁率達95%以上，最細粒度可達0.1μm，使物料的有效成分能被人體充分吸收，提高生物利用度，更好的發(fā)揮物料的功效.為最大化利用日益稀少的珍貴的冬蟲夏草資源，我們采用了這兩種先進技術(shù)制備冬蟲夏草微粉膠囊.

4.2 據(jù)報道，冬蟲夏草具有很強的免疫調(diào)節(jié)作用，以及抗腫瘤作用、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌作用、調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)、抗菌等功能，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有鎮(zhèn)靜和抗驚厥作用，對腎臟也有調(diào)節(jié)作用，尚有促進造血、抗病毒和護肝等作用.野生冬蟲夏草含粗蛋白29.1%～33%,粗脂肪8.62%,總糖13.94%～24.20%，粗纖維 18.5%,水分 10.8%,灰分 8.64%[3].冬蟲夏草中還含有氨基酸、脂肪酸、核苷類物質(zhì)、甾醇、甘露醇、多糖等，這些成分是冬蟲夏草發(fā)揮生理活性或藥效的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，其中核苷類物質(zhì)中的腺苷是冬蟲夏草最重要的活性物質(zhì)之一[5].故本文以腺苷為指標成分測定冬蟲夏草微粉膠囊的體外溶出度.

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)[S].2010.北京:化學工業(yè)出版社,2010:附錄Ⅵ D.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(二部)[S].2010.北京:化學工業(yè)出版社,2010:附錄X C.

[3]王尊生,顧宇翔,周麗,等.冬蟲夏草(Cordyceps sinensis)菌絲體固體發(fā)酵粉化學成分的分析[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2005,17(3):331-336.