沙眼衣原體感染患者的衣原體抗體和熱休克蛋白60抗體的測定

趙曉嵐 何聚蓮 林日華 李嘉彥

（1廣東省廣州市皮膚病防治所，廣州510030；2廣東省廣州市人口和計劃生育技術服務指導所，廣州510410）

沙眼衣原體感染患者的衣原體抗體和熱休克蛋白60抗體的測定

趙曉嵐1何聚蓮2林日華1李嘉彥1

（1廣東省廣州市皮膚病防治所，廣州510030；2廣東省廣州市人口和計劃生育技術服務指導所，廣州510410）

目的探討衣原體IgG抗體（CT-IgG）和衣原體熱休克蛋白60的IgG抗體（C-HSP 60 IgG）與生殖道沙眼衣原體感染（GCI）的關系，探求更為準確的GCI初篩指標及其組合。方法采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測40例GCI患者和40例健康體檢者的CT-IgG和C-HSP 60 IgG的表達，并對實驗結果進行單個指標和聯合指標的分析。結果GCI患者組的40例患者的CT-IgG陽性為30例（75%），C-HSP 60 IgG陽性為23例（57.50%），與對照組的40例健康體檢者比較，對照組的CT-IgG陽性為2例（5%），C-HSP 60 IgG陽性為5例（12.5%），2組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。CT-IgG+C-HSP 60 IgG聯合組合的臨床診斷價值最高，該組合的敏感度達82.5%。結論CT-IgG和C-HSP 60 IgG可用于GCI患者的臨床檢測，聯合檢測可提高CT檢測的敏感度。

沙眼衣原體（CT）；生殖道沙眼衣原體感染（GCI）；衣原體IgG抗體（CT-IgG）；衣原體熱休克蛋白60（C-HSP 60）

生殖道沙眼衣原體感染（genital chlamydial infections，GCI）是我國常見的性傳播疾病，由沙眼衣原體（CT）感染所致，其發病率高，流行廣泛，對人體的健康造成危害，已成為較為嚴重的公共衛生問題[1]。我們采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測GCI患者衣原體抗體（CT-IgG）、衣原體熱休克蛋白抗體（C-HSP 60 IgG）的表達，了解CT-IgG和C-HSP 60 IgG在GCI中的作用及其關聯性。

1 資料與方法

1.1 一般資料GCI患者組為2011年1月至2011年12月在我科就診的GCI患者40例，用細胞培養法檢測CT為陽性，結合臨床癥狀和實驗室檢測均符合GCI的診斷標準；年齡19～50歲，平均年齡為29.32歲。對照組為我科就診40例健康體檢者，與對照組年齡，性別差異無統計學意義。

1.2 試劑及儀器CT-IgG試劑盒由德國wirion-serion公司提供，批號SMZ.BQ。C-HSP 60 IgG試劑由美國RB公司提供，批號15091005。實驗儀器為美國ELX-800繪圖酶標儀、THERMO Wellwash 4MK2洗板機。

1.3 方法分別抽取40例GCI患者和40例健康體檢者外周血3ml，離心后提取上清液-20℃冷藏備用。標本均采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測，嚴格按操作說明進行。

1.4 檢測結果分析方法

1.4.1 平行聯合檢測判定原則為幾種檢測方法中任一陽性即判斷為陽性。

1.4.2 診斷檢測評價指標敏感度（Se）=a/(a+c)× 100%，特異度（Sp）=d/(b+d)×100%，約登指數(youden's index)=a/(a+c)+d/(b+d)-1即靈敏度和特異度之和減1，陽性預測值（+PV）=a/(a+b)×100%，陰性預測值（-PV）=d/(c+d)×100%。其中a為各檢測方法檢測GCI患病組的陽性例數，b為各檢測方法檢測對照組的陽性例數，c為各檢測方法檢測GCI患病組的陰性例數，d為各檢測方法檢測對照組的陰性例數。

1.5 統計學方法采用χ2檢驗。統計軟件應用SPSS 11.0軟件包進行分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1GCI患者的CT-IgG和HSP60-IgG的陽性表達對GCI患者組和對照組的CT-IgG和C-HSP 60 IgG進行分析，經χ2檢驗。以P＜0.05為差異有顯著性意義。在患病組中，40例GCI患者中CT-IgG陽性為30例（75%）；在對照組中，40例健康體檢者中，CT-IgG陽性為2例（5%），差異有顯著性意義（P＜0.05）。在患病組中，40例GCI患者中C-HSP 60 IgG陽性為23例（57.50%）；在對照組中，40例健康體檢者中C-HSP 60 IgG陽性為5例（12.5%），差異有顯著性意義（P＜0.05）。結果見表1。

表1GCI患者的CT-IgG和HSP 60-IgG的陽性表達[n(%)]

2.2CT-IgG和C-HSP 60 IgG在GCI患者中的檢測效能綜合評價分別計算CT-IgG、C-HSP 60 IgG的單項、兩項平行試驗的敏感度、特異度、約登指數、陽性預測值和陰性預測值。為提高試驗方法的敏感度，采取兩項聯合起來做平行試驗，即任一陽性即判斷為陽性。從表中可以看出，CT-IgG+C-HSP 60 IgG聯合組合的臨床診斷價值最高。該組合的敏感度達82.5%。結果見表2。

表2 兩種衣原體指標及聯合的組合（平行試驗）檢測GCI患者的評價（%）

3 討論

GCI近幾年有逐年上升的趨勢，國外報道為2%～47%，國內報道CT感染率為1%～34%[2]。GCI在臨床上多呈隱匿發展，可無癥狀或出現輕微癥狀而不為病人所重視。在女性，CT最常侵犯宮頸上皮，其次是輸卵管上皮，所以易引發宮頸炎，尿道炎，可并發輸卵管炎，進而導致異位妊娠、不孕等后果。在男性，可引起尿道炎和附睪炎。男女兩性均可發生衣原體直腸炎，由于生殖道感染引發的反應性關節炎（Reiter病）。CT也可導致母嬰傳播，感染的母親所生嬰兒可無癥狀，亦可發生衣原體性眼炎和衣原體性肺炎[3]。據估計，無癥狀感染者可能比有癥狀者更多，無癥狀感染可持續一年至數年[4-5]。沙眼衣原體無癥狀是沙眼衣原體迅速傳播和形成慢性感染并進一步發生不可逆的纖維化而導致嚴重后果的主要原因。CT的致病機制是抑制宿主細胞代謝，溶解破壞細胞，并導致溶酶體酶的釋放，而代謝產物的細胞毒作用，可引起變態反應和自身免疫反應。CT膜上的脂多糖（LPS）具有抗原性，在致病機制中具有重要意義。研究表明，40例CT感染的患者有30例CT-IgG陽性（75%），與正常對照組，2例CT-IgG陽性（5%），有明顯統計學差異（P＜0.05），可見GCI患者感染與CT-IgG有一定的關聯性。對照組中有2例CT-IgG陽性，考慮可能是臨床取樣或檢測的誤差導致假陽性。血清CT-IgG的檢測，可提高臨床GCI的檢測陽性率，及早進行有效的治療，減少相關的并發癥及傳染性。

有文獻報道，CT感染所致女性宮頸炎，盆腔炎及男性的尿道炎等與其熱休克蛋白的產生及其免疫學效應密切相關[6]。根據分子量的不同，熱休克蛋白主要劃分為HSP 70、HSP 60、HSP 90和smHSP 4個家族，其中HSP 70和HSP 60具有高度的物種保守性[7]。HSP 60存在于所有的原核及真核生物的某些細胞器中如線粒體和葉綠體、細菌或寄生物等病原體傳染過程中產生的病原體衍生熱休克蛋白是一種優勢抗原，C-HSP 60是衣原體屬特異蛋白，CT的傳染過程中會經過一次熱休克反應，能引起熱休克蛋白含量增加[8-9]。研究表明，CT感染的患者C-HSP 60-IgG明顯升高，陽性率為57.5%，而正常對照組C-HSP 60-IgG的陽性率為12.5%，2組有明顯的統計學差異（P＜0.05）。C-HSP 60與人HSP 60氨基酸順序的同源性為48%。研究發現，感染組患者中部分CT-IgG陽性者無C-HSP 60 IgG抗體產生，且對照組中也有5例出現C-HSP 60 IgG抗體陽性，這可能與C-HSP 60及人同源物所產生的自身免疫反應具有個體差異有關，以及可能與遺傳因素有關。若炎癥無有效的治療方法，病情可持續發展成生殖道的纖維化，導致生殖道的梗阻、堵塞，繼而導致不孕不育，對患者造成很大的生理及心理的困擾。

PCR等檢測，費用較高，病人負擔大，且敏感性較高，容易出現假陽性。CT-IgG的檢測，費用低廉，簡單快捷，值得臨床推廣使用。研究表明，聯合CT-IgG和C-HSP 60 IgG的檢測，提高了CT的陽性檢測率，敏感度為82.5%，優于單純檢測CT-IgG或C-HSP 60 IgG，聯合檢測將有助于及早診治GCI，減少并發癥的發生。而且可以輔助從大面積人群中篩查出GCI患者，避免病人進行不必要的檢查，減輕患者的痛苦和經濟負擔，同時也是一種簡便、準確的方法，將對GCI的早期診斷和病情監測具有重要的臨床意義，且衛生、經濟、效益最佳，具有較強的推廣價值。

[1]王千秋.重視生殖道沙眼衣原體感染的防治[J].中華皮膚科雜志,2007, 40(5):257-259.

[2]Foulds G.The phanoacokinetics of arithromycin human serum and tissuse[J]. Antimicrob Chemothber,1990,(25):73-82.

[3]王千秋.生殖道沙眼衣原體感染[M]//葉順章,邵長庚.性病診療與預防.北京:人民衛生出版社,2002:1-778.

[4]Cecil JA,Howell MR,Tawes JJ,et al.Features of Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infection in male army recruits[J].J Infect Dis,2001,184(9):1216-1219.

[5]Stamm WE.Chlamydia trachomatis infections of the adult[M]//Holemes KK, Mardh P-A,Sparling PF,et al.Sexually transmitted diseases.3rd ed.New York:McGraw-Hill,1999:407-422.

[6]Kinnumen A,SurcelHMD.Chlamydiatrachomatis heat shockprotein-60 inducedinterferon-gammaandinterleukin-10pro-ductionininferile women[J].Clin Exp Immunol,2003,131(2):299-303.

[7]龔興國,于紅.熱休克蛋白60的研究進展[J].中國病理生理雜志,2004,11 (20):2151-2154.

[8]Young RA.Stress proteins and immunology[J].Ann Rev Immunol,1990, 8(3):401-420.

[9]Kaufmann SHE,Schoel B.Heat shock proteins as antigens in immunity against infection and self.In:Morimoto,RI,Tissieres A,Georgopoulos C, eds.The biology of heat shock proteins and molecular chaperones[M].New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1994:495-531.

Detection of Chlamydia IgG and Chlamydial Heat Shock Protein 60 in Patients with Genital Chlamydial Infections

Zhao Xiaolan1He Julian2Lin Rihua1Li Jiayan1
(1.Guangzhou Institute of Dermatology,Guangzhou 510030,China;2.Guangzhou Institute for Population and Family Planning,Guangzhou 510410,China)

ObjectiveTo study the effects of the Chlamydia IgG(CT-IgG)and Chlamydia heat shock protein 60 IgG(C-HSP 60 IgG)in patients with genital chlamydial infections(GCI).MethodsCT-IgG and C-HSP 60 IgG were detected from 40 cases who have been diagnosed as genital chlamydial infections(GCI),and 40 cases as normal(control group)by ELISA.The results were analyzed by single test and parallel combination of two tests.ResultsThe frequency of CT-IgG dectection was significiantly higher in GCI group than in control group(75%vs 5%,P＜0.05).The frequency of C-HSP 60 dectection was significiantly higher in GCI group than in control group(57.5%vs 12.5%,P＜0.05). The sensitivity of parallel combined test of CT-IgG with C-HSP 60 IgG were 82.5%.ConclusionCT-IgG and C-HSP 60 IgG could be applied in clinical test of GCI,The sensitivity of the combination of CT-IgG+C-HSP 60 IgG were 82.5%,and it was the more precise test for GCI.

Chlamydia trachomatis(CT);Genital chlamydial infections(GCI);Chlamydia IgG(CT-IgG);Chlamydial heat shock protein 60(C-HSP 60)

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.08.108

1672-2779（2012）-08-0155-02

：蘇玲

2012-03-04）