桑葉消渴膠囊對Ⅱ型糖尿病大鼠的影響

李 超，潘建明，羅新根，張相年，吳新榮

(廣州軍區廣州總醫院藥劑科，廣東 廣州 510010)

桑葉為桑科植物桑(Morus alba L)的干燥葉，現代研究具有降血糖、降血壓等多種生物活性[1]。桑葉消渴膠囊是本單位新研究的尚未上市的新藥，主要成份為桑葉提取物，用于高血糖、高血脂癥。桑葉在我國擁有很大的資源優勢，古代醫方中就用于清熱、消炎、潤燥、明目、治療消渴病的記載。這些作用與人體許多慢性疾病密切相關，因此研究桑葉的藥理作用意義深遠。本文將對以桑葉提取物為主要原料的桑葉消渴膠囊給予Ⅱ型糖尿病大鼠，觀察受試物其對胰島素抵抗型動物的糖耐量，并通過長期給藥觀察動物血糖變化和對血脂影響。初步探討桑葉消渴膠囊的降糖作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用由南方醫科大學動物中心提供的體重200～250 g Wistar大鼠，雄性，90只。許可證號：SCXK粵2006-0015，編號0056299。

1.2 試驗藥物

1.2.1 受試物 桑葉消渴膠囊，批號：060912，廣州軍區廣州總醫院制劑中心提供。

1.2.2 陽性物 阿卡波糖(拜糖平)50 mg。由德國拜耳公司生產，批號：117951。鹽酸二甲雙胍腸溶片250 mg，由河北天成藥業有限公司，批號：09100902。造模劑，鏈尿佐菌素(STZ)每瓶50 g，批號：10122281，由Sigma公司提供。

1.2.3 淀粉 由黑龍江玉米淀粉廠提供，批號：20090918。

1.2.4 檸檬酸 廣州化學試劑廠提供，批號20070502。

1.3 高糖高酯飼料 豬油15%、蔗糖20%、膽固醇5%、蛋黃粉5%、膽酸鈉0.5%、基礎飼料54.5%由廣東省實驗動物監測所制備，許可證號：SCXK(粵)2008-0002粵監證字2008D007。

1.4 儀器 血糖儀與配套試紙：羅康全活力型血糖檢測儀，由德國羅氏公司生產(上海)。

2 方法

2.1 Ⅱ型糖尿病造模 取上述動物，按體重隨機抽取10只作為正常對照組，其余80只作模型組，正常對照組給予普通飼料，模型組給予高糖高酯飼料，常規飼養，每周記錄一次體重及24 h進食量，飼養5周，禁食24 h(不禁水)，模型組動物腹腔注射(ip)1%STZ(新鮮配制)劑量為28 mg/kg。ip后密切觀察動物，如狀態很差并開始死亡，馬上注射中效胰島素3 U/100 g。正常對照組動物ip同體積的檸檬酸緩沖液(調pH至4.5)0.28 ml/100 g。繼續按原法飼養。1周后全部動物禁食4 h，由尾靜脈取血用羅氏血糖儀檢測血糖值，并尾靜脈取血測定給藥前的血清甘油三酯。

2.2 糖耐量(GTT)、降糖實驗 取空腹血糖在＞16.0 mmol/L的Ⅱ型糖尿病動物40只，按血糖值隨機分為四組，即空白對照組、受試物低、高劑量組、陽性對照組，每組10只，正常對照組12只。低、高劑量組分別灌胃(ig)受試物粉末250 mg/kg、1 000 mg/kg，陽性對照組ig鹽酸二甲雙胍腸溶片200 mg/kg，空白對照組與正常對照組均ig相同體積生理鹽水，ig容量均為10 ml/kg，連續給藥29 d，每天給藥一次。期間，模型組動物繼續喂養高糖高酯飼料，每周記錄24 h進食量、體重。第26天進行GTT實驗，試驗當天陽性對照組改為拜糖平20 mg/kg，禁食過夜，測定空腹血糖(T0)給藥時同時ig給予30%淀粉3 g/kg，分別于30 min、60 min、120 min后尾靜脈取血用血糖儀測各組動物的血糖，并計算各組各時間點較給藥前血糖升高值，與空白對照組進行組間均值比較。降糖實驗于第29天先禁食4 h后給藥測空腹血糖，給藥后2 h尾靜脈取血用測定餐后血糖。計算各組給藥后較給藥前血糖下降值并按下面公式計算血糖下降百分率，并尾靜脈取血分離血清測定給藥后的血清甘油三酯，用SPSS系統軟件進行與空白對照組均值的比較。公式：血糖下降百分率(%)＝血糖下降值/給藥前空腹血糖值×100%。

2.3 統計學方法 所有數據處理采用SPSS17.0軟件進行統計分析。若各組方差齊采用單因素方差分析，用Dunnett-t檢驗法進行各劑量組與空白對照組之間的均數比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結 果

3.1 口服淀粉GTT血糖值 分別ig 250 mg/kg、1 000 mg/kg受試物對Ⅱ型糖尿病大鼠GTT各時間點血糖值的影響見表1。

表1 口服淀粉GTT血糖值(±s，n=10)

表1 口服淀粉GTT血糖值(±s，n=10)

空白對照組低劑量組高劑量組陽性對照組生理鹽水250 1000 20 16.86±4.11 17.00±5.97 19.40±5.19 20.01±4.89 20.32±4.82 19.50±6.34 23.04±4.47 24.70±5.29 31.60±2.09 26.26±4.51 27.84±5.88 22.93±4.68 30.28±2.63 27.49±5.20 26.66±2.45 23.66±4.23

3.2 口服淀粉GTT血糖升高值 分別ig給予250 mg/kg、1 000 mg/kg受試物各組各時間點血糖升高值與空白對照組血糖升高值比較見表2。

表2 口服淀粉GTT血糖升高值結果(±s，n=10)

表2 口服淀粉GTT血糖升高值結果(±s，n=10)

注：與空白對照組比較，▲P＜0.01；▲▲P＜0.05，▲▲▲P＜0.01。

空白對照組低劑量組高劑量組陽性對照組生理鹽水250 1000 20 3.46±3.58 2.50±3.49 3.64±3.56 4.69±5.29 14.74±2.88 9.26±4.60 8.44±4.12▲▲2.91±2.98▲▲▲13.41±2.34 10.49±5.53 7.26±4.04▲3.64±3.09▲▲▲

3.3 血糖影響結果 連續29 d分別ig給予250 mg/kg、1 000 mg/kg受試物對Ⅱ型糖尿病大鼠血糖值的影響見表3。

表3 血糖影響結果(±s，n=10)

表3 血糖影響結果(±s，n=10)

注：與正常對照組和空白對照組比較，▲P＜0.01；▲▲▲P＜0.01。

組別 血糖值(mmol/L)正常對照組空白對照組低劑量組高劑量組二甲雙胍組劑量(mg/kg)生理鹽水生理鹽水250 1000 200給藥前6.14±0.59 32.64±1.06 32.21±1.67 32.99±0.73 31.88±3.33給藥后5.94±0.41 27.50±4.53 24.08±2.13 22.60±3.66 14.88±3.68血糖下降值0.20±0.67 5.14±3.90 8.14±2.83 10.39±3.72▲17.00±1.94▲▲▲下降率(%)3.3 15.7 25.3 31.5 53.3

3.3 甘油三酯影響結果 連續29 d分別ig給予250 mg/kg、1 000 mg/kg給予受試物對Ⅱ型糖尿病大鼠甘油三酯的影響見表4。

表4 甘油三酯影響結果(±s，n=10)

表4 甘油三酯影響結果(±s，n=10)

注：與正常對照組和空白對照組比較，▲P＜0.01；▲▲P＜0.05，

組別 甘油三酯(mmol/L)正常對照組空白對照組低劑量組高劑量組二甲雙胍組劑量(mg/kg)生理鹽水生理鹽水250 1000 200給藥前2.47±0.67 1.43±0.77 1.81±0.48 1.85±0.58 1.57±0.32給藥后2.74±0.87 1.57±0.44 1.11±0.28 1.04±0.16 0.98±0.34下降值-0.27±0.06-0.15±0.08 0.69±0.16▲0.81±0.14▲▲0.58±0.11▲

4 結論

Ⅱ型糖尿病大鼠ig受試物分別250 mg/kg和1 000 mg/kg，低劑量組60 min后能顯著抑制血糖吸收，與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)；高劑量組60 min、120 min均能顯著抑制血糖吸收,與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.01，P＜0.05)；對Ⅱ型糖尿病大鼠連續29 d給予受試物250mg/kg、1 000 mg/kg BW，低劑量組的血糖略有下降，差異無統計學意義(P＞0.05)，高劑量組動物的血糖顯著下降(P＜0.05)。Ⅱ型糖尿病大鼠連續給藥ig桑葉提取物250 mg/kg、1 000 mg/kg 29 d，低、高劑量組均能顯著降低其甘油三酯，與空白組比較差異有統計學意義(P＜0.05，P＜0.01)。

5 討論

糖尿病的病情發展與血糖濃度的變化密切相關，在調節血糖濃度中，緩解小腸對多糖與葡萄糖的吸收是一個重要機制[2]。本文的糖耐量實驗結果顯示桑葉消渴膠囊能顯著緩解小腸對多糖吸收的作用。早在20世紀90年代日本學者對桑葉提取物做了大量的實驗研究，他們發現桑葉對二糖類分解酶(Sucrase)活性有抑制作用[3]，桑葉消渴膠囊降糖的主要作用于淀粉消化的最后階段，對二糖酶(麥芽糖和乳糖酶)有顯著的抑制作用[4]，還有一些國外學者發現桑葉消渴膠囊對四氧嘧啶高血糖動物也具有顯著降糖作用，認為主要作用機制是抑制了α-葡萄糖水解酶的催化作用[5]。有學者認為主要是桑葉中含有的DNJ(1-deoxynojirimycin)阻礙了α-糖苷酶的活性[2，6]。在我國也有報道糖尿病大鼠的ig給予桑葉消渴膠囊中的總黃酮，觀察動物給藥前后血糖的變化，并剝離小腸刷狀緣模，勻漿后加入桑葉總黃酮，測定對雙糖酶活性的抑制率，結果顯示，桑葉總黃酮使糖尿病大鼠血糖降低，對蔗糖酶、麥芽糖酶、乳糖酶活性均有抑制作用，其降血糖的作用機制可能減緩小腸對碳水化合物的消化和吸收，從而使外周血糖變化穩定[6]。本文通過糖耐量實驗顯示出桑葉消渴膠囊在一定劑量下對胰島素抵抗型的Ⅱ型糖尿病大鼠多糖的吸收有顯著的抑制作用，糖耐量實驗也能夠表明受試物能夠抑制胰腺蘭格爾罕氏島的病變進展，同時可以維持胰島素的分泌，抑制血糖的升高，延緩糖耐病的發作。綜上所述桑葉消渴膠囊可能是控制餐后血糖的有效手段。本實驗對Ⅱ型糖尿病大鼠連續29 d給予桑葉提取物高劑量組動物的血糖顯著下降，受試物組均能顯著降低其甘油三酯，因此長期給藥在控制餐后高血糖的同時，也能抑制血清脂質增加，為桑葉的新藥開發提供可靠的實驗數據。

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