高效液相色譜法測定抗癆凈顆粒中枸櫞酸含量

李立冬，魯金鳳，金立弟

抗癆凈由烏梅、麥芽、白及、地骨皮、黃精等組成，具有消癭散結(jié)的功效，對骨癆、肺癆有良好療效，對骨結(jié)核療效更佳。其主要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不包括含量測定，本研究中利用高效液相色譜法建立抗癆凈中枸櫞酸含量的測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀;樣品(市售品);枸櫞酸對照品(中國藥品生物制品檢定所;樣品(市售品，批號為20090801，20090802，20090803);乙腈為色譜純，純化水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Apollo C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相:乙腈－0.5%磷酸二氫銨溶液(3∶97，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0);檢測波長:210 nm;進(jìn)樣量:10μL。

2.2 溶液制備

精密稱取枸櫞酸對照品適量，加水溶解并制成含枸櫞酸1.98 g/L的對照品貯備液。取抗癆凈顆粒樣品10 g，研細(xì)，精密稱定，精密加水50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量并用水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，離心取上清液即得供試品溶液。取不含烏梅的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:分別精密吸取陰性對照品溶液、對照品溶液和供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)，在該色譜條件下，陰性對照品對測定無干擾。

線性關(guān)系考察:稱取對照品適量，加水定量稀釋成濃度為1 mL中含枸櫞酸 9，45，90，135，180 g的對照品溶液，各取 10 μL 進(jìn)樣測定，以枸櫞酸峰面積(A)對進(jìn)樣質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸處理，得回歸方程 A=148.90C －4.658，r=0.999 9(n=5)。表明枸櫞酸質(zhì)量濃度在9～180g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.82%(n=6)，表明儀器密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，室溫放置 0，2，4，6，8，10 h時，再按2.1項(xiàng)下色譜條件測定峰面積積分值。結(jié)果 RSD=0.95%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

重現(xiàn)性試驗(yàn):精密稱取同一批號樣品6份，按擬訂方法制備供試品溶液，依法測定含量。結(jié)果供試品中枸櫞酸平均含量為9 g/袋，RSD=0.79%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品約10.06 g(含量為9.23 g/g的供試品)，平行取樣6份。另精密加入枸櫞酸對照品溶液適量，分別精密吸取該對照品溶液適量，加入6份供試品中，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 枸櫞酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別量取對照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計算得批號分別為20090801，20090802，20090803 的 3 批樣品中枸櫞酸含量分別為 9.13，9.25，9.04 g/袋。

3 討論

在抗癆凈顆粒枸櫞酸含量測定中考察了多種流動相，結(jié)果本方法采用的流動相峰形較好，保留時間較適中。本方法靈敏、可靠、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可作為抗癆凈顆粒的含量分析方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:73.