EZH2和PTEN蛋白表達與卵巢漿液性囊腺癌的相關性研究

宋大平，方仔羽

（1.湖北省武漢市蔡甸區中醫院婦產科 430100；2.廣西醫科大學附屬第四醫院婦產科，廣西柳州545005）

惡性腫瘤中普遍存在表觀遺傳學的改變，EZH2是表觀遺傳學中重要的因子［1］。有研究表明EZH2在卵巢癌組織中高表達，與卵巢漿液性囊腺癌的進展與轉移密切相關，但具體機制不清［2］。PTEN基因是一種抑癌基因，對細胞生長和凋亡有重要調控作用。有研究表明EZH2和PTEN基因在膀胱癌和前列腺癌中存在負相關，且與癌癥的不同病理分級和臨床分期有關［3－4］。本研究擬通過采用免疫組化SABC法檢測卵巢漿液性囊腺癌標本中EZH2和PTEN蛋白的表達水平，探討其在卵巢漿液性囊腺癌早期診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2006年8月至2011年7月武漢市江夏區第一人民醫院和廣西醫科大學附屬第四醫院婦產科行卵巢漿液性囊腺癌手術切除且臨床資料完整的標本73例（觀察組），所有病例術前均未接受放療或化療，術后均經病理確診，年齡20～70歲，平均（47.2±5.2）歲。按國際婦產科聯盟（FICO）2000年標準進行臨床分期，Ⅰ～Ⅳ期分別13、16、34、10例；病理分化程度：低分化35例，中分化21例，高分化17例；其中44例伴有腹水，16例伴有淋巴結轉移，32例伴有癌瘤播散；全子宮和雙附件切除16例，行腫瘤細胞減滅術57例。選擇同期在兩院行手術治療的卵巢漿液性囊腺瘤標本39例作為對照（對照組），年齡23～68歲，平均（48.5±6.1）歲。

1.2方法

1.2.1檢測方法 免疫組化檢測方法（SABC法）按常規方法染色，先經固定、脫水、包埋、切片、脫蠟、脫水、滅活、修復等步驟后，分別滴加1∶200兔抗人EZH2多克隆抗體（美國Cell Signaling公司）和1∶100鼠抗人PTEN多克隆抗體（北京中山生物技術有限公司），在4℃冰箱中存放24h，再分別滴加生物素二抗，最后經DAB顯色、脫水、透明、封片。用PBS代替抗體作陰性對照，用已知的陽性標本作陽性對照。

1.2.2判定結果 每張切片由兩位病理學專家分別讀片，存在爭議的經兩位專家討論后決定。EZH2主要以細胞核和細胞質均無著色或只有細胞質著色者判為陰性；細胞核內出現棕褐色、棕黃色或黃色顆粒者判為陽性。PTEN蛋白則以細胞質內出現棕褐色、棕黃色或黃色顆粒者判為陽性。每張切片隨機選取5個高倍視野（×400），計數1 000個細胞，計算著色細胞所占百分比，若小于25%為陰性（－）；25%～50%為弱陽性（＋）；＞50%～75%為陽性（＋＋）；＞75%為強陽性（＋＋＋）。

1.3統計學處理 采用SAS9.2軟件進行統計分析。2組間EZH2或PTEN蛋白表達陽性率比較用χ2檢驗，EZH2或PTEN蛋白表達與卵巢漿液性囊腺癌患者臨床病理特征的關系用Spearman等級相關分析，EZH2和PTEN蛋白陽性表達率相關性用直線相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1兩組患者EZH2和PTEN蛋白的表達情況 EZH2在卵巢漿液性囊腺癌組織中表達陽性率為71.2%，高于卵巢漿液性囊腺瘤組織的陽性率12.8%（P＜0.01）；而PTEN蛋白在卵巢漿液性囊腺癌組織中表達陽性率為46.2%，低于卵巢漿液性囊腺瘤組織的陽性率76.9%（P＝0.0013），見表1。

2.2EZH2和PTEN蛋白表達與卵巢漿液性囊腺癌患者臨床病理特征的關系 EZH2的總表達陽性率在高、中、低分化患者中分別為58.8%、71.4%、77.1%，隨著病理分級的增加而升高（rs＝0.246，P＝0.036）；在臨床分期Ⅰ～Ⅳ期患者中分別為53.8%、68.8%、73.5%、90.0%，隨著臨床分期的增加而升高（rs＝0.251，P＝0.032）。PTEN蛋白的總表達陽性率在高、中、低分化患者中分別為64.7%、57.1%、28.6%，隨著病理分級的增加而降低（rs＝－0.330，P＝0.035）；在臨床分期Ⅰ～Ⅳ期患者中分別為61.5%、56.2%、41.2%、20.0%，隨著臨床分期的增加而降低（rs＝－0.247，P＝0.004）。具體見表2。EZH2和PTEN蛋白在不同臨床分期和病理分級患者中的陽性表達率存在負相關（r＝－0.903，P＝0.005）。

表1 兩組患者EZH2和PTEN蛋白的表達比較［n（%）］

表2 EZH2和PTEN蛋白表達與卵巢漿液性囊腺癌患者臨床病理特征的關系

3 討 論

卵巢惡性腫瘤早期癥狀常不明顯，發現時多為晚期，是病死率最高的婦科惡性腫瘤，其中最常見的是卵巢漿液性囊腺癌［5－7］。EZH2是表觀遺傳學中的重要成員，具有多潛能性［8－9］，PTEN蛋白是近年來發現的一種具有磷酸酶活性抑癌基因，大量研究表明，EZH2在肺癌、乳腺癌、宮頸癌等多種惡性腫瘤中明顯高表達［10－12］，在腦癌、前列腺癌、子宮內膜腺癌等組織中PTEN蛋白呈現低表達［13－15］。本研究同樣發現EZH2在卵巢漿液性囊腺癌組織中存在高表達，表達陽性率約是卵巢漿液性囊腺瘤組織5.6倍，PTEN蛋白在卵巢漿液性囊腺癌組織中存在低表達，說明EZH2和PTEN蛋白可能在卵巢漿液性囊腺癌發生過程中起一定作用。

李海波等［16］的研究發現EZH2和PTEN蛋白在腎癌中的表達存在負相關，且EZH2的表達隨腎癌的臨床分期升高而增加，PTEN蛋白的表達隨腎癌的臨床分期及病理分級的升高而降低，與本研究結果基本一致。本研究發現，EZH2的表達隨卵巢漿液性囊腺癌患者的臨床分期和病理分級的升高而升高，PTEN蛋白的表達隨卵巢漿液性囊腺癌患者的臨床分期和病理分級的升高而降低，說明EZH2和PTEN蛋白的表達可能與卵巢漿液性囊腺癌發展有關，有望作為卵巢漿液性囊腺癌早期診斷和判斷預后的指標。二者存在負相關（r＝－0.903，P＝0.005），說明它們在卵巢漿液性囊腺癌的發生、發展過程中可能存在協同作用，具體作用機制還有待于進一步研究。

總之，EZH2和PTEN蛋白作為卵巢漿液性囊腺癌相關因子，對EZH2和PTEN蛋白的檢測有助于早期發現卵巢漿液性囊腺癌并判定病情進展，同時也為卵巢漿液性囊腺癌的基因治療提供了新思路。

［1］Bird A.Perception of epigenetics［J］.Nature，2007，447（7143）：396－398.

［2］Guo JF，Cai J，Yu LL，et al.EZH2regulates expression of p57and contributes to progression of ovarian cancer in vitro and in vivo［J］.Cancer Sci，2011，102（1）：530－539.

［3］宋力，崔小健，蘇大軍，等.EZH2和PTEN基因在前列腺癌組織中表達及其相關性［J］.第四軍醫大學學報，2006，27（11）：994－996.

［4］劉飛，彭鄂軍，李有元，等.EZH2和PTEN在膀胱癌的表達及預后分析［J］.中國腫瘤臨床，2010，27（21）：1220－1223.

［5］遲雪東，周寶森，李聯昆，等.影響卵巢癌發生的相關因素研究［J］.重慶醫學，2009，38（10）：1198－1199，1201.

［6］Visintin I，Feng Z，Longton G，et al.Diagnostic markers for early detection of ovarian cancer［J］.Clin Cancer Res，2008，14（4）：1065－1072.

［7］Permuth－Wey J，Sellers TA.Epidemiology of ovarian cancer［J］.Methods Mol Biol，2009，472（2）：413－437.

［8］Tang X，Milyavsky M，Shats I，et al.Activated p53suppresses the histone methyl transferase EZH2gene［J］.Oncogene，2004，23（34）：5759－5769.

［9］Kondo Y.Epigenetic cross－talk between DNA methylation and histone modification in human cancers［J］.Yonsei，2009，50（4）：455－463.

［10］呂怡靜，任敏，王博，等.EZH2和CTGF在肺腺癌中的表達和意義［J］.山東大學學報：醫學版，2011，49（5）：94－97.

［11］Shi B，Liang J，Yang X，et al.Integration of estrogen and Wnt signaling circuits by the polycomb group protein EZH2in breast cancer cells［J］.Mol Cell Biol，2007，27（14）：5105－5119.

［12］方靜，薛艷，周黨俠，等.EZH2基因在宮頸癌中的表達及其意義［J］.西安交通大學學報：醫學版，2011，32（6）：758－760.

［13］薛偉明，王占祥，馬永會，等.EGFL7和PTEN在人腦膠質瘤中的表達［J］.中華神經外科疾病研究雜志，2011，10（6）：489－493.

［14］肖芹，顧學文，蔣記心，等.FHIT和PTEN在前列腺腺癌中的表達及其意義［J］.中華男科學雜志，2011，17（2）：136－139.

［15］沈美娜，李世金，張愛臣，等.PTEN蛋白在子宮內膜腺癌中的表達及其臨床意義［J］.中國實驗診斷學，2012，16（2）：262－264.

［16］李海波，王禾，武國軍，等.EZH2和PTEN蛋白聯合檢測與腎透明細胞癌的相關性研究［J］.山西醫科大學學報，2009，40（3）：199－201.