陰道分泌物瑞氏法與懸浮法檢查結果比較＊

凌曉午，曾強武，安邦權△，周湘紅，許 筑，孫 輝，譚 燕，李鳳宇

（1.貴州省人民醫院檢驗科，貴陽550002；2.貴陽中醫學院第一附屬醫院檢驗科，貴陽550002；3.貴陽醫學院檢驗系，貴陽550004；4.遵義醫學院檢驗系，貴州遵義863003）

陰道病為女性多發病［1］，分特異性和非特異性陰道炎，多由真菌、加德納菌、滴蟲引起。在臨床上，3者所導致的炎癥癥狀及白帶性狀無太大差別，但在治療方面卻差異明顯，所以為能更好地治療患者，對其病因的準確檢測非常重要。國內多用簡便、快速的懸浮（濕片）法檢查滴蟲、真菌等，但漏診率高、檢出率低，且不利于建立質控［2］。采用瑞氏染色法雖耗時稍長，但便于建立質控以提高準確性。本文采用懸浮法、瑞氏染色法對396份陰道分泌物標本同時進行鏡檢，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 2009年8月6日至10月25日在貴州省人民醫院婦科門診就診的患者，共396例，年齡6～81歲，取陰道或宮頸分泌物。

1.2儀器與試劑 日產OLYMPUS普通光學顯微鏡。生理鹽水和2.5mol/L KOH 溶液（KOH 140g溶于1 000mL蒸餾水中）自制。瑞氏染液為重慶醫學檢驗試劑研究所生產。

1.3方法 將采集的陰道分泌物制成一張厚薄均勻的大小為（1.0～2.0）cm×（2.0～4.0）cm的涂片，自然干燥后進行瑞氏染色，剩余標本用于懸浮法檢查。瑞氏染色嚴格按試劑使用說明操作，懸浮法嚴格按《全國臨床檢驗操作規程》［3］進行操作。

1.3.1瑞氏染色法 （1）清潔度檢查：參照《全國臨床檢驗標準操作規程》標準［3］并結合實際工作進行判斷（表1）。其中“－”即陰性表示50個高倍視野（細胞內腎形雙球菌即淋球菌以油鏡為準）以上未發現陰道桿菌、其他桿菌、球桿菌、球菌、上皮細胞或有關病原體（如滴蟲、真菌、線索細胞）等有形成分，白細胞（主要為中性粒細胞）偶見或0～5個/HP；“＋”即少量表示約1/3以下視野發現其有形成分，中性粒細胞5～15個/HP；“＋＋”即中量表示約1/2視野發現其有形成分，中性粒細胞15～30個/HP；“＋＋＋”即多量表示約2/3以上視野發現有形成分，中性粒細胞多于30個/HP；“＋＋＋＋”即大量表示幾乎滿視野發現其有形成分、中性粒細胞等。介于兩者如少量至中等量之間則報告“＋～＋＋”，包括清潔度類推可報Ⅰ～Ⅱ、Ⅱ～Ⅲ、Ⅲ～Ⅳ等。（2）病原體檢查：取瑞氏染色標本片，先低倍鏡粗掃，見梨形、圓形、橢圓形或不規則形疑為滴蟲者，再高倍鏡細查，必要時換油鏡仔細辨認，具有整個胞體似粒細胞等大或為其2倍、胞漿均勻淡藍、核小橢圓紫色、有的可見鞭毛等特征為滴蟲［2－3］。同時在高倍鏡和油鏡下查找真菌和可疑淋球菌。（3）線索細胞檢查：線索細胞為鱗狀上皮細胞覆蓋大量的藍色小短桿菌或球桿菌，上皮細胞表面粗糙、混濁、透明度減低，出現斑點核、大量細小顆粒，核模糊不清，細胞邊緣常呈鋸齒狀，甚至細胞趨向溶解或已溶解，背景以球桿菌為主，乳酸桿菌很少或缺如。

表1 清潔度判斷標準

1.3.2懸浮法 （1）清潔度檢查：與瑞氏法相同。（2）病原體檢查：取陰道分泌物涂于玻片上生理鹽水中，低倍鏡下觀察，可見波狀或螺旋狀運動的蟲體將周圍白細胞或上皮細胞推動，在高倍鏡下可見蟲體呈頂寬尾尖倒置梨形，大小約為白細胞的1～2倍者為滴蟲。取陰道分泌物涂于玻片上10%KOH溶液中，顯微鏡下查見菌球、芽孢及假菌絲者為真菌。（3）線索細胞檢查：與瑞氏法相同。

1.4統計學處理 采用統計學軟件SPSS11.0處理，通過χ2檢驗進行數據處理。其中，檢測項目陽性率為“該方法該項目陽性例數÷總例數（396）×100%”；清潔度只統計Ⅲ～Ⅳ度（異常）標本例數，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

396例婦科門診患者陰道分泌物懸浮法、瑞氏染色法同時進行鏡檢結果見表2，經χ2檢驗，瑞氏染色法清潔度（Ⅲ～Ⅳ）、真菌、線索細胞陽性率均明顯高于懸浮法（P＜0.05），兩法滴蟲檢測結果差異無統計學意義（P＞0.05）。兩法均未發現可疑腫瘤細胞。瑞氏染色法發現中性粒細胞內腎形相對雙球菌3例，經革蘭染色檢查為陰性雙球菌。

表2 瑞氏染色法與懸浮法檢測陽性率對比［n（%）］

3 討 論

真菌、滴蟲及細菌性陰道病是婦科常見病、多發病。國內統計不同人群細菌性陰道病的患病率為11.0%～46.0%，真菌、滴蟲感染率因時間、地點、人群、生活水平、檢測方法等不同而出入較大［4－8］。由于患者臨床表現和陰道分泌物性狀常無明顯區別，但在治療上及引起的后果均存在差異［9］，所以檢驗人員及時準確發出白帶常規報告對臨床診治患者尤其重要。

本研究發現雖然懸浮法簡便、快速、易掌握、對鮮活滴蟲檢查有優勢而被常用，但其檢出陰道分泌物清潔度（Ⅲ～Ⅳ）、滴蟲、真菌、線索細胞陽性率（60.10%，5.56%，25.51%，21.97%）低于瑞氏染色法（70.70%，5.81%，32.32%，29.04%），尤其清潔度、真菌、線索細胞的陽性檢出率差異有統計學意義（P＜0.05）。此外，本研究還發現懸浮法可因實驗室生理鹽水污染（真菌、滴蟲等）、標本中粗大球桿菌及患者婦科用藥后的藥物殘渣等的影響而出現其假陽性；還可能因生理鹽水對標本的稀釋作用、細胞或雜物的掩蓋導致在視野下未發現病原體，或冬春季無保溫措施下查滴蟲等而出現其假陰性。國外學者也認為生理鹽水涂片法因人為影響，檢驗結果離散度極大，準確性和重復性較差，不能客觀反映真實情況，嚴重制約了相關臨床疾病的診治［10］。進一步證明瑞氏染色法替代懸浮法可以提高陰道分泌物檢測準確性，有利于患者早日康復。

本研究分析396例陰道分泌物中，瑞氏染色法發現中性粒細胞內腎形相對雙球菌3例，經革蘭染色檢查為陰性雙球菌，可能是淋球菌，因（包括可疑腫瘤細胞）例數太少，懸浮法無法檢測而未行單獨統計。但對腎形相對雙球菌陽性標本，建議有條件的實驗室進一步做細菌培養與藥敏試驗以確診，瑞氏染色法對淋球菌檢查只有篩選作用［11－12］。

瑞氏染色法操作步驟少、用時短、費用低、查滴蟲時更易識別其形態，可觀察有無惡性細胞，發現可疑淋球菌時加做操作步驟和用時稍多的革蘭染色，兩法結果一致報告之更能保證其檢測質量。尤其針對懸浮法而言，瑞氏染色法有如下優點：一張涂片多項目檢查；冬春季節查滴蟲時不受保溫措施的限制；涂片送到實驗室即可染色鏡檢，做到隨到隨查方便了患者；標本染色后病原體基本被消滅，大大降低了環境污染［2］；染色標本可較長時間保存以便復查監督質量；另外還可挑選染色良好、病原體典型的標本作為教學片及送往各家醫院臨檢室進行交流，以提高對清潔度、滴蟲、真菌、線索細胞等整體檢驗水平。

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