食管癌發生發展過程中COX－2蛋白表達的研究

李 彬

山東泰安市中醫醫院外科 泰安 271000

環氧合酶(COX)是PGS(前列腺素類)生物合成的限速酶。近年來發現COX－2在腫瘤發生、發展、分化、轉移和預后等方面可能有重要作用，本文就COX－2蛋白在食管癌中的表達及在食管癌發生、發展中的作用進行研究。

1 材料和方法

1.1 標本 取自山東省泰安市中醫醫院2008－06－2010－06食管癌患者的活檢組織和術后標本，正常食管黏膜鱗狀上皮6例，單純增生8例，輕、中、重度不典型增生分別6、4、4例，食管鱗狀細胞癌43例。

1.2 試劑 鼠抗人環氧化物酶2單克隆抗體工作液與SPStrepavidin/Peroxidase Kit均購自北京中山生物技術有限公司。

1.3 方法 辣根過氧化酶標記的SP法:(1)石蠟切片，常規脫蠟至水。(2)3%過氧化氫孵育5～10 min。(3)蒸餾水沖洗，PBS(pH 7.2)浸泡5 min。(4)置枸酸鹽緩沖液(pH 6)中，微波爐抗原修復5～10 min，冷卻至室溫。(5)滴加正常山羊血清工作液，室溫孵育10～15 min。(6)滴加一抗，37℃孵育1～2 h。(7)PBS沖洗，3 min×3次。(8)滴加二抗，37℃孵育10～15 min。(9)PBS沖洗，3 min×3次。(10)辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育10～15 min。(11)PBS沖洗，3 min×3次。(12)DAB顯色。(13)自來水充分水洗，蘇木素復雜，脫水，透明，封片。

2 結果

COX－2蛋白表達定位于細胞漿，＞10%病變細胞的細胞漿出現棕黃色的顆粒者判定為陽性(+)，25% ～50%判定為陽性(++)，＞50%判定為陽性(+++)。不同病變食管組織COX－2蛋白免疫組化染色結果及統計分析見表1。

正常組和單純增生組為對照組。對照組中未發現COX－2蛋白表達;50%(1/4)中度不典型增生有COX－2蛋白表達，食管鱗狀細胞癌組為74%(32/43)。COX－2蛋白表達與淋巴轉移、浸潤深度、腫物大小及臨床分期關系見表2。

經x2檢驗，COX－2蛋白表達，在食管癌臨床分期I～II期和III～IV期間，二者差異有統計學意義(P＜0.05)。COX－2蛋白表達，與淋巴轉移、浸潤深度、腫物大小無關。

表1 不同病變食管組織中COX－2蛋白免疫組化染色結果

表2 COX－2蛋白表達與淋巴轉移、浸潤深度、腫物大小及臨床分期關系 ［n(%)］

3 討論

環氧合酶(cyclooxgease，COX)又名前列腺素過氧化物合成酶，通過COX活性催化花生四稀酸(AA)轉化為前列腺素G2(PGG2)，通過過氧化酶活性催化PGG2轉化成PGH2。PGH2被單個的合成酶或還原酶作用才能轉化成具有活性的終產物如PGE2、PGF2等。COX－2 mRNA及蛋白質在組織中表達水平增高很可能是腫瘤發生的早期標志。許多實驗者在活體腫瘤標本中發現有COX－2的表達。Zimmerman等［1］檢測了食管癌中COX－2表達，發現91%(n=172)的食管鱗狀細胞瘤、78%的食管腺癌中COX－2免疫組化染色陽性。Uefuji等［2］檢測了23例胃腺癌標本，其中19例有COX－2蛋白表達，占83%。諸多結果提示，COX－2過度表達在消化系腫瘤中起重要作用。

免疫組化染色COX－2的蛋白質發現絕大多數腺癌和幾乎全部鱗癌均為陽性，并且腺癌的染色密度強于鱗癌。Tsujii等［6］用COX－2表達載體永久性轉移鼠腸上皮細胞(RIE)發現COX－2過表達，細胞對基質黏附性增加，E－鈣粘連素水平下降，有證據支持后者可能是侵襲抑制因素。增加的黏附性、下調的E－鈣粘連素與瘤細胞的局部浸潤有關。Murata等［7］發現在人的食管癌組織中，COX－2過表達與食管壁淋巴管浸潤、區域淋巴轉移程度明顯相關，與病理參數如解剖部位、原位腫瘤浸潤深度、遠處轉移、組織病理分級或食管壁靜脈浸潤無關。以上實驗均提示COX－2過表達在增加腫瘤發生的同時，也增加其轉移的潛能。因此，COX－2蛋白的表達與食管癌的發生發展關系密切，是食管癌發生發展中的一個重要指標，可作為食管癌可疑病例定期隨訪的指標之一。

［1］Zimmermann KC，Sarbia M，WeberAA，et al.COX － 2 espression in human esophageal carcinoma.Cancer pancreatic cancer［J］.Res，1999，59(1):198.

［2］Uefuji K，Ickikura T，Mochizuki H，et al.Expression of COX －2 protein in gastric adenocarcninma［J］.J Surg Oncol，1998，69(3);168.

［3］Tsujii M，DuBois RN，Alterations is cellulaiadhesion and apoptos is in epithelial cells overexpression COX － 2［J］.Cell，1995，83:493.

［4］Murata H，Kawano S，Tsuji S，et al.Cyclooxygenase －2over esprission enhanxes lymphatic lymphatic invasion and metastas is in human gastric carcinoma［J］.Am J Gastroenterology，1999，4(2):451.