維吾爾醫(yī)常用藥材羅勒子弱極性成分微波提取工藝研究

胡爾西丹·伊麻木 艾克熱木·艾合買提 熱娜·卡斯木 阿吉艾克拜爾·艾薩

1．中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所，新疆 烏魯木齊 830011;2．中國科學(xué)院研究生院，北京 100039;3．新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830054

羅勒 (Ocimum basilicum L)，也被稱為九層塔、金不換、圣約瑟夫草和甜羅勒，是一種矮小、幼嫩的唇形科(Lamiaceae)羅勒屬 (Ocimum)香草植物。羅勒子(FRUIT OF SWEET BASIL)為羅勒的干燥成熟果實(shí)。據(jù)《本草綱目》記載，羅勒子俗稱芒勒子、羅叻子，富含多種礦物元素、維生素、胡蘿卜素、氨基酸等 ，具有明目、護(hù)腎、消除便秘、健身之功能［1］。羅勒子具有生干性寒、燥濕止瀉、涼血止血、清熱爽心等功能，主治濕熱性或血液質(zhì)性疾病，如濕熱性痢疾、腹痛、腹瀉、便血、痔瘡出血及熱性心臟疾病等［2］。現(xiàn)代研究表明，羅勒子具有利尿、抗氧化、防腐、消炎、抗癌、抑菌、治療心血管疾病等作用［3－6］。目前，在相關(guān)報(bào)道中表示油類在種子中的含量高于植物的其他部位，羅勒屬植物為主要芳香油植物之一［9］，前期研究結(jié)果表明羅勒子的揮發(fā)油進(jìn)行了提取，并對(duì)其化學(xué)成分及其抗氧化活性和抗菌活性進(jìn)行了分析［10－11］，且目前未發(fā)現(xiàn)對(duì)羅勒子的種子中的弱極性成分的研究鮮有報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)采用微波協(xié)助對(duì)羅勒子中的弱極性成分最佳提取工藝研究，并用氣相色譜－質(zhì)譜法 (GC－MS)對(duì)羅勒子揮發(fā)油進(jìn)行分析，確定其主要成分含量，以期為進(jìn)一步研究羅勒子揮發(fā)油的藥理活性，以及充分利用羅勒植物這一植物資源在維吾爾藥物研究中提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象 羅勒子，購于新疆和田，經(jīng)中科院生態(tài)與地理研究所沈冠冕研究員鑒定為菊科羅勒屬植物羅勒(Ocimum basilicum L.)的干燥成熟果實(shí)，標(biāo)本存放于中科院新疆生態(tài)與地理研究所標(biāo)本館。

1.1.2 主要儀器 GCMS－QP2010氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀，購自日本島津公司;BP211D型電子天平，購自德國Sartorius有限公司;RE－5298A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，購自上海亞榮生化儀器廠;SHB－ⅢS循環(huán)水式多用真空泵，購自鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;XH－100A型微波提取儀，購自上海市翔皓儀器廠。

1.1.3 主要試劑 正己烷，氯仿 (西安化學(xué)試劑廠)，無水硫酸鈉 (天津市紅巖化學(xué)試劑廠)。

1.2 方法

1.2.1 材料準(zhǔn)備 將羅勒子用蒸餾水洗凈，放置在陰涼處晾干，粉碎，過20目篩后稱取300.0g，分別稱取10g，分為12組待用。

1.2.2 溶劑篩選 擬選用正己烷，氯仿，石油醚，乙酸乙酯四種溶劑進(jìn)行溶劑篩選。所得圖如圖。

結(jié)論:最好提取溶劑是正己烷。

1.2.3 確定料液比及溫度 前期經(jīng)過實(shí)驗(yàn)得到該實(shí)驗(yàn)最佳的料液比為固體:液體=1:10，最佳溫度為40℃

1.2.4 單因素試驗(yàn) 取事先稱量好的羅勒子10g放入三口瓶中加入100ml正己烷放入微波提取儀中進(jìn)行反應(yīng)。時(shí)間調(diào)整為 2，4，6，8分鐘;功率設(shè)為 200w，400w，600w，800w，提取結(jié)果如表1－及圖2。

表1 提取時(shí)間和微波功率篩選 (g)

結(jié)論:最好提取條件為400w，6分鐘。

1.2.5 樣品甲酯化 取樣品0.2g于玻璃試管中，加正己烷2ml溶解，加入0.2mol/L NAOH甲醇溶液，40°C水浴反應(yīng)30分鐘。取出冷卻至室溫加入飽和NaCl溶液靜置10分鐘，取上清液。

2 羅勒子弱極性成分分析

2.1 對(duì)羅勒子弱極性成分進(jìn)行GC/MS分析 GC－MS條件如下:

儀器型號(hào):Agilent7890A－5975C GC－MS。

色譜柱:HP－5MS毛細(xì)管柱 (30m×0.25mm×0.25μm)。

進(jìn)樣量:1μl。

升溫程序:起始溫度為60℃;以10℃/min的速率程序升溫至180℃，保持2min;以2℃/min升溫至260℃，保持10 min;以10℃/min的速率程序升溫至280℃，保持2min。

電離方式:EI。

電離能量:70eV。離子源發(fā)生器溫度:230℃。質(zhì)量掃描范圍:30～350amu。

2.2 GC－MS結(jié)果 經(jīng)分析所得總離子流圖如圖3及表2所示。經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫檢索，鑒定出四種脂肪酸。主要為:棕櫚酸 (6.850%);亞油酸 (18.677%);亞麻酸(69.734%);硬酯酸C18(4.738%)。

表2 GC－MS分析結(jié)果

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)前期對(duì)于提取所用試劑以及物料比進(jìn)行了預(yù)實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)過程中得到結(jié)論如下:通過使用氯仿，正己烷，石油醚，乙酸乙酯等四個(gè)溶劑后發(fā)現(xiàn)對(duì)于羅勒子中不飽和脂肪酸的提取最有效的是正己烷。

3.2 通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)物料比對(duì)于提取率影響不大，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中考慮到提取溶液的后因素，處理確定使用固液比以1:10的比例進(jìn)行。

3.3 由圖1以及圖2可知對(duì)于微波提取羅勒子中的弱極性成分最主要因素是功率，在功率超過400w以后在600w以及800w提取率成直線趨勢(shì)。其次對(duì)于提取率的影響條件為時(shí)間，在相同的功率條件下，通過單因素實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在6分鐘以后提取率成下降趨勢(shì)。綜上所述得到最佳提取條件是在40℃，400w功率提取6分鐘。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，微波提取在對(duì)于植物內(nèi)的有效成分的提取有著時(shí)間短，用料少，提取率高，提取方法簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)提取，大大縮短時(shí)間時(shí)間，節(jié)省實(shí)驗(yàn)精力。

3.4 從以上研究結(jié)果可知:新疆羅勒子 (Ocimum basilicum L)弱極性成分提取率為25.8%，其中不飽和脂肪酸含量達(dá)到88.41%。通過GC－MS檢測(cè)總共測(cè)出4個(gè)組分，根據(jù)Nist147譜庫及Wiley7譜庫進(jìn)行檢索共鑒定出4個(gè)化合物，鑒定出的化合物含量占總?cè)鯓O性成分的97.54%。鑒定出的4個(gè)化合物當(dāng)中主要成分為，亞麻油酸含量為69.734%，亞油酸含量為18.677%，棕櫚酸含量為6.85%，硬酯酸含量為4.738%。其中生物體可將亞麻油酸轉(zhuǎn)換成多元不飽和脂肪酸，這些脂肪酸有助減少包括血糖、腦血管堵塞、關(guān)節(jié)、消化系統(tǒng)、部份頑疾與腦力衰退等問題。而且亞麻油酸還可以抑制發(fā)炎細(xì)胞，防止管道堵塞，降低膽固醇和甘油三酸脂水平。［23］通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了微波提取對(duì)于種子中的不飽和脂肪酸的提取有著非常顯著的效果，對(duì)于以后維吾爾特有藥材中此類物質(zhì)的提取工藝提供了切實(shí)可用的方法。

4 致謝

感謝中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所植物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供的實(shí)驗(yàn)設(shè)備及條件。感謝理化技術(shù)研究所的領(lǐng)導(dǎo)及指導(dǎo)老師以及各位重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室老師的幫助與指導(dǎo)。

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