復方水飛薊素－丹參素滴丸溶出度測定方法的研究

祝冬青

江蘇食品職業技術學院醫藥與健康管理系，江蘇 淮安 223003

水飛薊素是從菊科藥用植物水飛薊 (Silybum marianum(L．)Gaertn．)種子的種皮中提取出來的有效成分，主要由水飛薊賓、水飛薊寧等黃酮木脂素類化合物組成，具有抗氧化、抗肝纖維化、保護肝細胞膜、降血脂等藥理活性，臨床上常用于急慢性肝炎、肝纖維化、肝硬變和代謝中毒性肝損傷的治療［1，2］。丹參素是從唇形科植物丹參 (Salvia miltiorrhiza Bge．)的干燥根及根莖中提取的水溶性有效成分之一，具有抑制血小板聚集、抗動脈粥樣硬化、抗肝纖維化、降血脂等藥理作用［3～5］。近年來，有臨床研究報道［6～8］，采用水飛薊素制劑配合丹參制劑，在治療脂肪肝、肝纖維化、慢性肝炎、酒精性肝病等方面具有很好的協同作用，療效提高，提示了水飛薊素－丹參素復方制劑的可能性。但是，由于水飛薊素難溶于水，在普通制劑中溶出速度慢，吸收量低，影響生物利用度和療效［9，10］。為了提高其溶出，筆者采用固體分散技術，研制了復方水飛薊素－丹參素滴丸。為了解滴丸的釋藥特點及規律，建立質控標準，進行了復方水飛薊素－丹參素滴丸溶出度的研究，為生產上的質量控制奠定基礎。

1 儀器、藥品與溶劑

DWJ－2000S多功能滴丸試驗機 (煙臺百藥泰中藥科技發展有限公司)，RC－3型智能溶出度測試儀 (天津市新天光分析儀器技術有限公司)，UV765紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)，FA2004電子天平 (上海精密儀器儀表有限公司)。

水飛薊素 (江蘇天士力帝益藥業有限公司，含水飛薊賓80%，批號200808001)，丹參素提取物 (西安鴻生生物技術有限公司，含丹參素20%，批號20090502)，水飛薊賓、丹參素鈉標準品 (中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110856－200604、110855－200809)，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶出度測定方法

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取60℃減壓干燥至恒重的水飛薊賓標準品12.52mg和丹參素鈉標準品10.75mg，分別置于100ml容量瓶中。水飛薊賓標準品加70 ml甲醇，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇定容，搖勻，作為水飛薊賓標準儲備液 (0.1252 mg·ml－1)。丹參素鈉標準品加適量水，振搖使溶解，加水定容，搖勻，作為丹參素鈉標準儲備液 (0.1075 mg·ml－1)。

2.1.2 供試品溶液的制備 取復方水飛薊素－丹參素滴丸20粒，研細，取適量 (約相當于水飛薊賓10 mg)，精密稱定，置100 ml量瓶中，加溶出介質約70m l，超聲處理15 min，放冷，加溶出介質至刻度，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.1.3 最大吸收波長的確定及干擾試驗 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各3.0ml，分別置于25 ml容量瓶中，各加溶出介質至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液測定;另取不含水飛薊素和丹參素空白滴丸，按“2.1.2”項下方法制得空白溶液。以溶出介質為參比，在紫外可見分光光度計中于200～500 nm范圍內掃描。結果，以水為溶出介質時，水飛薊賓對照品溶液在330 nm處有最大吸收，丹參素鈉對照品溶液在280 nm處有最大吸收，供試品溶液在280 nm和330 nm處均有較強吸收。以0.1 mol·l－1鹽酸溶液、pH 4.5緩沖鹽溶液和人工胃液為溶出介質時，水飛薊賓對照品溶液、丹參素鈉對照品溶液分別在288 nm和280 nm處有最大吸收，供試品溶液在280 nm和288nm處均有較強吸收。空白溶液均無吸收。參考中藥水飛薊的含量測定方法［11］，選擇288 nm和280 nm為分別為水飛薊素、丹參素的檢測波長。

2.1.4 標準曲線的制備 分別精密吸取水飛薊賓標準儲備液和丹參素鈉標準儲備液各1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml，分別置于25 m l容量瓶中，加0.1 mol·l－1鹽酸溶液至刻度，搖勻，制成對照品系列濃度溶液。以溶出介質為空白對照，水飛薊賓、丹參素鈉的對照品溶液分別在288 nm、280 nm波長處測定吸光度。以吸光度A對濃度C進行線性回歸，得水飛薊賓的回歸方程為A1=0.0311 C1+0.0016(r=0.9999)，線性范圍為5.01 ～30.05 μg·ml－1;丹參素鈉的回歸方程為A2=0.0365 C2+0.0021(r=0.9999)，線性范圍為4.30～25.80μg·ml－1。結果表明，在檢測范圍內，水飛薊賓、丹參素鈉的檢測濃度與吸光度均呈現良好線性關系。

2.1.5 精密度試驗 分別精密吸取水飛薊賓、丹參素鈉標準儲備液3.0 ml，照2.1.4項下標準曲線的操作，測定吸收度，重復6次。結果，RSD分別為0.65%(水飛薊賓)、0.43%(丹參素鈉)，表明本試驗所采用的定量方法精密度可靠。

2.1.6 重復性試驗 精密吸取同一供試品溶液5份，每份3.0 ml，按2.1.4項下“分別置于25 m l容量瓶中”起依法操作。結果，RSD分別為0.72% (水飛薊素)、0.90%(丹參素)，表明該方法重現性良好。

2.1.7 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液5.0 m l，按2.1.4項下“分別置于25 ml容量瓶中”起依法操作，分別于0，15，30，60，90，120 min測定吸光度，結果，RSD分別為0.75%(水飛薊素)、2.67%(丹參素)，表明供試品溶液在120 min內基本穩定。

2.1.8 加樣回收率試驗 精密吸取同一供試品溶液6份，每份3.0 ml，分別置于25 m l容量瓶中，精密加入對照品溶液適量 (相當于供試品溶液所含水飛薊素、丹參素含量一半的80%、100%、120%)，按2.1.4項下“加0.1 mol·l－1鹽酸溶液至刻度”起依法操作，測定其含量，計算回收率和RSD值。結果，水飛薊素的回收率為99.95%，RSD為0.83%;丹參素的回收率為101.15%，RSD為1.38%。結果表明，溶出度測定方法回收率高，方法準確，可用于本品溶出度的測定。

2.2 溶出條件的選擇

2.2.1 溶出方法的選擇 采用《中國藥典》2010年版2部附錄XC第一法進行溶出度試驗12，采用紫外分光光度法檢測。由于本品規格小，要使吸收度達到0.3以上，溶液需有一定的濃度，因此每個容器中投入10粒。

2.2.2 溶出介質的選擇 根據2.1.3項試驗結果，排除水為溶出介質，分別以0.1 mol·l－1鹽酸溶液、pH4.5緩沖鹽溶液和人工胃液為溶出介質，以100 r·min－1轉速進行溶出試驗 (對同一批供試品)，溶出結果見表1。試驗結果表明:供試品中水飛薊素在0.1 mol·l－1鹽酸溶液和人工胃液中溶出效果相近，且溶出效果較好;在pH4.5緩沖鹽溶液中的溶出較慢。由于供試品中丹參素易溶于水，其在3種溶出介質中的溶出效果都很好，且在15 min時就已經溶出約100%。為節約試劑，簡化操作，故選用0.1 mol·l－1鹽酸溶液為本品溶出度測定的溶出介質，并且以水飛薊素的溶出效果作為復方水飛薊素－丹參素滴丸的溶出度控制因素。

表1 供試品在不同溶劑同一轉速 (100 r·min－1)下的溶出量

2.2.3 轉速和取樣時間的選擇 取本品10粒，以0.1mol·l－1鹽酸溶液為溶劑，分別以50，75，100，120 r·min－1進行溶出試驗，測定供試品中水飛薊素的溶出度，試驗結果見表2。

表2 供試品在同一溶劑不同轉速下的溶出量

結果表明:50，75 r·min－1時，供試品溶出較慢;100 r·min－1時溶出效果較好，120 r·min－1時溶出效果與100 r·min－1時相同，故確定轉速為100 r·min－1。40 min時溶出量已超過95%，因此取樣時間定為40 min。

2.2.4 溶出曲線的均一性 從同一批供試品取6份樣，每份10粒，按上述確定的條件進行溶出度試驗，6份溶出結果見表3。試驗結果表明，供試品溶出度均一性良好。

表3 溶出曲線的均一性

2.3 供試品溶出度測定 取試制的供試品3批，每批6份，每份10粒，按上述確定的溶出度測定方法依法操作，計算每份供試品的溶出度。結果表明，3批樣品在40 min時，累積溶出度在95%左右 (見表4)。考慮到大生產情況，暫定本品40min時溶出度為不低于標示量的80%為宜。

表4 3批供試品溶出度測定結果 (%，n=3)

3 討論

許多中藥有效成分難溶于水，在固體制劑中存在一定的溶出吸收障礙。固體分散技術可通過增大藥物的表面積使藥物溶解加快，從而提高溶出速率和累積溶出度，促進藥物的溶出和吸收［13］。近年來，固體分散體技術在中藥劑型改革中的應用發展很快，取得了較好的經濟和社會效益。

藥物的體外溶出度是評價其內在質量的重要指標。采用固體分散技術制備的滴丸，可以采用溶出度指標進行質量控制。研究表明，研制的復方水飛薊素－丹參素滴丸，采用紫外分光光度法測定水飛薊素、丹參素含量，按《中國藥典》2010年版2部附錄XC第一法進行溶出度試驗，以 0．1 mol·l－1鹽酸溶液為溶劑，轉速 100 r·min－1，溶出時間40 min，溶出量限度為標示量的80%。通過干擾試驗、標準曲線、精密度、重復性、穩定性、加樣回收率的考察，結果表明，該方法簡便易行，準確度高，穩定可靠，可以用于復方水飛薊素－丹參素滴丸溶出度的測定。

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［11］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典 (一部)［S］．2010年版．北京:中國醫藥科技出版社，2010:76．

［12］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典 (二部)［S］．2010年版．北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄85．

［13］張惠平，向大雄，羅杰英，等．固體分散技術在藥劑學中的研究進展［J］．中國藥學雜志，2007，42(11):80 7－811．