血清SCCA水平及盆腔淋巴結HPV 16/18感染狀況與宮頸鱗癌患者預后的關系

曾四元，梁美蓉，李隆玉，劉 暉，鐘美玲，魏晚霞

(1.江西省婦幼保健院腫瘤科;2.南昌大學醫學院，江西南昌 330006)

早期宮頸鱗癌預后良好，但出現淋巴結轉移后預后明顯降低，且一旦出現復發，預后極差。如何早期預測宮頸癌淋巴結轉移并進行預后判斷是多年來臨床共同關注的問題。鱗狀細胞癌抗原 (squamous cell carcinoma antigen，SCCA)及人乳頭瘤病毒 (human papillomavirus，HPV)16/18型是目前宮頸癌輔助診斷中應用較多的生物學指標。先期研究發現，血清SCCA水平及盆腔淋巴結HPV 16/18感染與宮頸癌淋巴結轉移相關［1］。雖然血清SCCA及盆腔淋巴結HPV 16/18在評估早期宮頸癌淋巴結轉移及預后判斷中有一定的價值［2－4］。但缺乏綜合分析血清SCCA和盆腔淋巴結HPV 16/18與宮頸癌患者生存狀況的報道。本研究通過對先期研究對象進行跟蹤隨訪，探討術前血清SCCA水平、盆腔淋巴結HPV 16/18感染狀況與宮頸鱗癌患者預后的關系，以期為宮頸鱗癌預后判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2007年12月至2008年10月在江西省婦幼保健院腫瘤科初次接受手術治療的宮頸鱗癌病例，篩選出符合以下條件者共35例:1)術前未經放、化療;2)術后病理確診為宮頸鱗狀細胞癌;3)在本院接受廣泛全子宮切除加盆腔淋巴結清掃術:4)FIGO分期為ⅠB～ⅡA期;5)均系同一組醫師按FIGO 2004年《婦科惡性腫瘤診斷與治療指南》進行手術。6)征得患者授權人同意后納入本研究。患者平均年齡45.2歲 (29～60歲)。采取術前血清3 mL及淋巴結石蠟組織備用。組織病理有癌轉移陽性淋巴結7例，共16枚;陰性淋巴結共80枚。

1.2 試劑

QIAamp石蠟組織DNA提取純化試劑盒(QIAGEN公司)，HPV 16/18 PCR試劑盒(廣州達安)，SCCA ELISA試劑盒(武漢中美科技)。

1.3 實驗方法

1.3.1 石蠟包埋組織中DNA的提取純化:刮取石蠟包埋淋巴結組織3～4片(層厚5 μm)置于1.5 mL微量離心管中，加入新鮮二甲苯1 mL脫蠟，震蕩混勻，12 000 r/min離心2 min，去上層溶液?；緹o石蠟殘留后加入無水乙醇1 mL清洗，渦旋混勻，12 000 r/min離心2 min，去上清，干燥組織。按QIAamp石蠟組織DNA提取純化試劑盒的說明書提取純化DNA。純化的DNA即用或－20℃保存備用。

1.3.2 淋巴結 HPV 16/18測定:純化的DNA按HPV 16/18 PCR試劑盒定性定量，使用實時熒光定量PCR擴增儀。根據標準曲線讀出數據，下限為5.0 ×101拷貝/mL。

1.3.3 雙抗體夾心酶標免疫分析法(ELISA)測定血清SCCA水平:按 SCCA ELISA試劑盒說明書測定血清SCCA水平，酶標儀讀出A值，計算 SCCA滴度 (＞1.5 g/L為陽性)。

1.4 隨訪方法

所有宮頸癌病例入院后即建立隨訪卡，具有完整的臨床、病理及隨訪資料。出院日期定為隨訪開始，隨訪截止日期為2011-08-20，生存時間按月計算。術后第1年內隨訪每3個月1次;第2年內隨訪每3～6個月1次;第3年后隨訪每半年1次。

1.5 統計學分析

采用SPSS11.5軟件進行統計學分析。計量資料比較采用近似t檢驗，生存率的計算采用壽命表法，生存率的比較采用log-rank檢驗，單因素分析采用COX比例風險模型。

2 結果

2.1 術前血清SCCA水平和盆腔淋巴結HPV 16/18 DNA感染狀況及二者的關系

35例宮頸鱗癌患者術前血清 SCCA水平為(2.02 ±1.87)μg/L，SCCA ＞1.5 μg/L 13 例，陽性率 37.1%，其中2例淋巴結轉移患者 SCCA＞4.0 μg/L。盆腔淋巴結HPV 16/18陽性7例，感染率為20.0%，DNA定量為(4.39±8.61)×107拷貝/mL。術前血清SCCA水平與盆腔淋巴結HPV 16/18陽性感染相關(P＜0.05)。

2.2 術前血清SCCA水平及盆腔淋巴結HPV 16/18感染與宮頸鱗癌患者3年生存率之間的關系

35例宮頸鱗癌患者中位隨訪時間為36個月(12～41月)，死亡4例，無失訪病例，3年總體生存率為85.0%。其中血清SCCA陰性者和陽性者的3年生存率分別為100%和69.2%;術后1、2和3年內生存者血清 SCCA值分別為(2.02±1.87)、(1.99±1.93)和(1.95±1.94)μg/L。盆腔淋巴結HPV 16/18陰性者和陽性者的3年生存率分別為96.4%和57.1%;采用Kaplan-Meier法進行生存分析，經log-rank檢驗后顯示:血清SCCA及盆腔淋巴結HPV 16/18陰性患者的3年生存率明顯優于陽性患者(P＜0.05)。

2.3 影響宮頸鱗癌患者預后的單因素分析

35例資料完整的宮頸鱗癌病例淋巴結轉移、血清SCCA、淋巴結HPV 16/18與宮頸癌患者的預后相關(P＜0.05)(表1)。

3 討論

長期以來宮頸癌診斷主要依靠臨床癥狀、細胞學及組織病理學檢查，缺乏有效的血清腫瘤標志物。因此，出現組織學證實的淋巴結轉移及復發后，往往錯失最佳治療時機，預后通常不佳。尋找有效的血清腫瘤標志物早期預測宮頸癌淋巴結轉移并進行預后判斷已成為腫瘤研究的一個熱點。

SCCA是公認較為可靠的宮頸癌血清標志物。目前的研究發現，宮頸鱗癌患者血清SCCA水平不僅可反映病情嚴重程度、淋巴結轉移情況，而且可能判斷有無復發及評估患者預后［5－6］。先期研究發現，術前SCCA水平與淋巴結HPV 16/18陽性感染、淋巴結轉移、宮頸間質浸潤深度及脈管累及相關，尤其與淋巴結轉移密切相關［1］。進一步隨訪發現術后1、2和3年內生存者血清SCCA水平呈下降趨勢，4例死亡患者術前SCCA均為陽性，SCCA陰性患者中無一例死亡，血清SCCA陽性患者的3年生存率明顯低于陰性患者。單因素分析結果顯示:血清SCCA水平與宮頸鱗癌患者預后密切相關。因此認為術前SCCA水平不僅可反映淋巴結轉移情況，而且可評估宮頸癌患者預后，對針對性地制定個體化宮頸癌術后輔助治療有一定參考價值。

表1 影響宮頸鱗癌患者預后的單因素分析Table 1 Univariate analysis of factors influencing prognosis of patients with cervical squamous cell carcinoma

HPV 16/18是宮頸癌發生的主要致病因子，檢出率高達70% ～76%［7］。臨床中發現部分臨床分期較早、淋巴結組織學陰性的病例預后較差，提示可能有組織學未能發現的微轉移。已有研究證實，存在微轉移的腫瘤患者術后復發轉移風險增加、整體生存率下降、預后不良［8］。本研究先期結果表明，HPV 16/18陽性率在組織學陽性淋巴結中明顯高于陰性淋巴結者;1例陰性淋巴結患者HPV 16/18的檢出可能提示微轉移。本研究結果顯示，盆腔淋巴結HPV 16/18陽性患者的3年生存率明顯低于陰性患者，盆腔淋巴結HPV 16/18與宮頸鱗癌患者的預后密切相關。1例盆腔淋巴結HPV 16/18陽性、但組織學淋巴結陰性患者隨訪40個月無復發，提示盆腔淋巴結HPV 16/18感染與宮頸癌微轉移是否有關尚需擴大樣本的進一步研究。

結果提示，血清SCCA水平及盆腔淋巴結HPV 16/18感染狀況與宮頸鱗癌患者預后相關，可作為宮頸鱗癌預后判斷指標。盆腔淋巴結HPV 16/18感染與宮頸癌微轉移是否有關尚需擴大樣本的進一步研究。

［1］丁洪慧，曾四元，熊輝，等.宮頸癌患者淋巴HPV16/18感染及血清鱗狀細胞癌抗原檢測的臨床意義［J］.現代婦產科進展，2010，19:523 －526.

［2］高寶榮，趙桂玲，張虹.SCC-Ag對早期宮頸癌患者淋巴結轉移評估的價值［J］.中國腫瘤臨床，2010，37:630－633.

［3］Olsen JR，Dehdashti F，Siegel BA，et al.Prognostic utility of squamous cell carcinoma antigen in carcinoma of the cervix:association with pre-and posttreatment FDG-PET［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys，2011，81:772 －777.

［4］孫穎，劉國炳，余艷紅.盆腔淋巴結HPV-DNA檢出率與早期宮頸癌臨床轉移的關系［J］.中華腫瘤防治雜志，2011，18:1259 －1261.

［5］Gadducci A，Tana R，Cosio S，et al.The serum assay of tumour markers in the prognostic evaluation，treatment monitoring and follow-up of patients with cervical cancer:a review of the literature［J］.Crit Rev Oncol Hematol，2008，66:10－20.

［6］Noordhuis MG，Eijsink JJ，Roossink F，et al.Prognostic cell biological markers in cervical cancer patients primarily treated with(chemo)radiation:a systematic review［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys，2011，79:325 －34.

［7］Li N，Franceschi S，Howell-Jones R，et al.Human papillomavirus type distribution in 30，848 invasive cervical cancers worldwide:Variation by geographical region，histological type and year of publication［J］.Int J Cancer，2011，128:927－935.

［8］駱成玉，祝學光.腫瘤微轉移檢測研究的現狀和存在的問題［J］.基礎醫學與臨床，2004，24:578－581.