P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和 CK19在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床病理意義

趙麗華，林 競，石 柏，林秋蘭，槐英麗，王克杰

(北京民航總醫院病理科，北京 100025)

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的一種類型，約占全部甲狀腺惡性腫瘤的80%，PTC病理診斷依據特征性的細胞核形態，包括毛玻璃樣核、核溝、核內包涵體等。但實際工作中，一些良性病變，如結節性甲狀腺腫、濾泡性腺瘤、橋本氏甲狀腺炎等常可伴有乳頭狀增生或毛玻璃樣核等改變。這使PTC的診斷有時變得很困難。本研究檢測P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和 CK-19蛋白在 PTC 和良性病變中的表達，為臨床鑒別PTC與良性病變提供有價值的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

選取民航總醫院病理科2003～2008年保存的PTC蠟塊43例，其中男性9例，女性34例;年齡24～73歲，中位數49歲。PTC診斷標準參照最新版世界衛生組織腫瘤學分類［1］。患者術前皆未接受化療或放療，以結節性甲狀腺腫37例、甲狀腺腺瘤33例和橋本氏甲狀腺炎17例作為對照組。全部病例HE染色經2名有副高級以上職稱的病理醫師復檢。

1.2 方法

免疫組織化學法:所有標本均經10%中性甲醛固定，常規組織處理，石蠟包埋，4 μm切片，常規HE染色。免疫組織化學采用SP法，PBS代替一抗做空白對照，免疫組化方法按試劑說明書操作，DAB顯色，蘇木精復染。P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19鼠抗人單克隆抗體工作液(福州邁新生物公司)。

1.3 結果

P53，ki-67表達于胞核，galectin-3主要胞質著色，HBME-1主要表達于胞膜，部分有胞核著色，34βE12主要胞質和細胞膜，CK19表達于胞質和包膜，以上部位出現黃色顆粒分布并明顯高于背景著色為陽性，每張切片均選取5個高倍鏡視野(×400)，分別計數每一視野中陽性細胞占總細胞數的百分數。5個視野陽性細胞百分數之平均數為該例陽性細胞百分數的結果。參考Beesley［2］分級方法。

1.4 統計學分析

檢測的 P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19表達按以下公式進行計算:敏感性=真陽性/(真陽性+假陰性)，特異性=真陰性/(真陰性+假陽性)，診斷正確率=(真陽性+真陰性)/(所有陽性+所有陰性)，陽性預測值=真陽性/(真陽性+假陽性)，陰性預測值=真陰性/(真陰性+假陰性)。所有統計數據應用SPSS12.0軟件包處理，以χ2進行分析。

2 結果

2.1 各種指標在甲狀腺病變中的表達情況

P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 和CK-19在PTC陽性表達率顯著高于結節性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和橋本氏甲狀腺炎的陽性表達率(P＜0.01)(表 1)，P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19蛋白在PTC的表達(圖1～6)。

表1 P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19種指標在甲狀腺乳頭狀癌及其他良性病變中的陽性表達Table 1 The expression of p53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 and CK-19 in the papillary thyroid carcinoma and benign lesions(%)

2.2 各種指標在PTC診斷的參考價值

P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 和 CK-19在PTC診斷的敏感性、特異性、診斷正確率、陽性預測值和陰性預測值方面有參考價值(表2)。

表2 P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12和CK-19的敏感性、特異度、診斷正確率、陽性預測值、陰性預測值Table 2 The sensitivity，specificity，diagnostic accuracy，positive prediction and negative prediction of P53，ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12 and CK-19(%)

3 討論

PTC是最常見的甲狀腺惡性腫瘤。世界衛生組織腫瘤學分類將PTC界定為具有明確的濾泡細胞分化，典型的乳頭及濾泡結構，特征性胞核改變的甲狀腺惡性上皮腫瘤［3］。但是在臨床病理診斷中，常遇到不典型病例，因此我們嘗試利用免疫組織化學方法輔助診斷PTC。

P53基因是重要的抑癌基因，編碼于17號染色體，其表達產物可通過多種方式參與細胞周期的調控［4］。由于基因編碼序列的改變，可導致野生型P53蛋白功能的喪失，突變型P53蛋白在細胞內蓄積，進而可導致細胞的惡性轉化。突變性P53基因的半衰期長，在活躍生長的細胞中蛋白增高，穩定性強，用免疫組化的方法可以檢測到。P53陽性表達提示腫瘤多為惡性、分化程度低，而P53陰性提示腫瘤多為良性、分化程度高。本研究中P53在PTC中的陽性率顯著高于各良性病變組。與文獻報道一致，因此其可以作為鑒別診斷的分子標志物。

ki-67是一類與細胞周期相關的增生細胞核抗原，只存在于周期性細胞的細胞核內，可準確地反映細胞增殖活性。人類編碼ki-67的基因定位于第10號染色體長臂(10q25)上。國內外文獻［5］報道多種惡性腫瘤中均存在Ki67過度表達。ki-67在腫瘤的診斷價值和預后價值已經得到了廣泛的認可。本研究表明，ki-67在PTC中陽性表達顯著高于甲狀腺腺瘤、結節性甲狀腺腫和甲狀腺炎，提示檢測ki-67的表達可為甲狀腺腫瘤的良惡性鑒別提供參考。

Galectin-3是一種分子質量為26 000的β-半乳糖苷結合蛋白，屬于植物血凝素家族，它廣泛分布于從線蟲到人類的各級動物，其編碼基因位于染色體1P13［6］。Galectin-3在甲狀腺腺瘤中不表達或低水平表達，在大多數乳頭狀癌中高水平表達，其免疫組化染色可以輔助常規的病理檢查進行乳頭狀癌與腺瘤的鑒別診斷［7］。從上述國內外研究結果，可以得出galectin-3對甲狀腺癌尤其是乳頭狀癌的診斷具有重要的參考價值。本研究結果顯示，galectin-3在PTC中蛋白表達陽性率顯著高于結節性甲狀腺腫、腺瘤及橋本氏甲狀腺炎，galectin-3可作為識別PTC的特異指標。

HBME-1是間皮細胞表面微絨毛的一種抗原成分，一種酸性氨基多聚糖蛋白，主要成分為透明質酸。這種抗體在大多數上皮型間皮瘤中呈強陽性細胞膜表達，是新近在用于甲狀腺病理診斷中的一種抗體，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌中呈高表達［8］。本研究發現，HBME-1在PTC中的陽性表達率為93.02%，在良性病變中大多數為陰性，僅少數陽性表達，良惡性組間有差異，可作為PTC診斷和鑒別診斷的依據，這一結論與以往的文獻報道相一致［9］。

34βE12高分子質量細胞角蛋白抗體(34βE12)是前列腺基底細胞的特異性抗體，在正常甲狀腺組織中一般不表達，但在PTC中呈強陽性表達。高分子量角蛋白34βE12表達陽性率在甲狀腺癌有轉移組最高，無轉移組次之，甲狀腺乳頭狀增生組最低［10］。本研究結果，34βE12在 PTC中的陽性表達率與結節性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和橋本氏甲狀腺炎的陽性表達率比較有顯著差異，可以作為良、惡性鑒別診斷的分子標志物。

CK19是一種分子質量為40 ku的細胞角蛋白，屬于中微絲蛋白家族，可用于標記單層上皮(如腺上皮)，而并非PTC特異性標志物。文獻報道，PTC可以強烈而彌漫地表達CK19，而在正常的甲狀腺組織，濾泡性腺瘤，結節性甲狀腺腫和乳頭狀增生中不表達或灶狀表達CK19。CK19表達對于PTC的診斷與鑒別有很高的應用價值［11］。本研究結果CK19的表達率在PTC與甲狀腺良性病變中表達有差異。在6種標記物中特異度最高，支持CK19是診斷與鑒別的良好標志物。

綜合上述6種指標特點，CK19、HBME-1敏感性高，且HBME-1特異性稍差，P53敏感性稍差，而特異性很高，其中 CK19準確度最高，其次是 P53。Barut等［12］的研究發現 CK19、Galectin-3 和 HBME-1聯合應用在甲狀腺乳頭狀癌鑒別診斷中的敏感性、特異性和準確度分別為89%、96.9%、93.9%。本研究為小樣本研究，實驗對象中未能包括所有類型的甲狀腺癌和甲狀腺良性病變。有待進一步研究探討它們在PTC與其他類型甲狀腺病變診斷與鑒別診斷中的作用。由于免疫組化方法存在假陽性與假陰性結果，PTC的診斷仍需以形態學為基礎。在沒有找到一種特異性標記PTC而不標記正常甲狀腺組織及其他甲狀腺病變的免疫標志物之前，聯合幾種免疫標志物檢測可以提高診斷效能。

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