子宮頸鱗癌中 PTEN、C-myc、P27的表達及其臨床意義

郭艷萍，楊廣英，王建君，孫 麗，李 軍

(鄭州人民醫院 病理科 河南鄭州 450002)

腫瘤的發生發展是一個多步驟的過程，是多種癌基因的激活和抑癌基因的失活或缺失、細胞凋亡基因表達的紊亂導致的。子宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，其發生發展、侵襲轉移是多因素共同作用的復雜的病理過程。PTEN 又稱為(MMAC1/TEP1)基因［1］，是至今為止發現的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，在調控細胞生長及細胞調亡過程中發揮重要作用，并與腫瘤細胞的侵襲、轉移能力密切相關。C-myc基因是發現較早的原癌基因之一。其編碼蛋白具有轉錄因子活性，有促進細胞增殖、調節細胞周期、抑制細胞分化、參與細胞凋亡的作用。P27為一種抑癌基因，其表達產物P27蛋白參與調控細胞周期和細胞凋亡，為細胞周期負性調控因子［2］。本研究采用免疫組化SP法檢測PTEN蛋白、C-myc蛋白和P27蛋白在正常宮頸黏膜上皮、宮頸上皮內瘤變(CINⅡ-Ⅲ)及宮頸鱗癌中的表達，進而探討其與宮頸鱗癌發生發展、侵襲轉移的關系，以及三者的相關性，為宮頸癌診斷和治療提供更為有效的判斷指標。

1 材料與方法

1.1 材料 收集鄭州人民醫院2007年至2010年經活檢或手術病理檢查的存檔蠟塊標本，其中正常宮頸黏膜上皮標本40例、CINⅡ-Ⅲ標本40例和宮頸鱗癌標本40例，年齡(41.0±0.5)歲，有淋巴結轉移標本18例、無淋巴結轉移標本22例，組織學分級高分化17例、低分化23例;浸潤深度＜1/2肌層28例，＞1/2肌層12例。全部標本由有經驗的病理醫師確診，采集前未治療。

1.2 試劑和方法 實驗用兔抗人PTEN多克隆抗體、P27單克隆抗體均購自北京中山生物公司。生物素-鏈霉菌抗生物素SP免疫組化試劑盒、鼠抗人C-myc單克隆抗體及DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術有限公司。免疫組化(SP法)組織蠟塊做4μm連續切片，烤片后脫蠟和水化，3%H2O2孵育10 min，滅活內源性過氧化物酶，高壓抗原修復20 min。SP三步法進行染色，DAB顯色，蘇木素復染，脫水，透明，中性樹膠封固。

1.3 結果判斷 PTEN蛋白染色陽性在細胞膜或胞質內出現黃色顆粒，C-myc蛋白陽性表達主要定位于細胞核，以胞核或胞質出現明顯的黃色或棕黃色顆粒視為陽性著色;P27以細胞核內出現棕黃色染色為陽性細胞。每張切片檢測10～20個視野(倍數×400)，每個視野計數100個腫瘤細胞，共計1 000個細胞，計算出每張切片的陽性百分數。

1.4 統計學方法 所有數據采用SPSS 13.0統計學軟件進行處理，陽性率之間的比較采用χ2檢驗(包括校正)，兩變量之間的相關性檢驗采用Spearman等級相關分析，以P＜0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1 PTEN、C-myc和P27在不同宮頸病變組織中的表達 PTEN和P27正常宮頸黏膜上皮、宮頸上皮內瘤變(CINⅡ-Ⅲ)及宮頸鱗癌中的表達逐漸降低，及C-myc表達的逐漸增高，差異具有統計學意義(P＜0.05);PTEN、C-myc和P27在有、無淋巴結轉移的宮頸鱗癌患者癌組織中的陽性表達率，比較差別有顯著性意義(P＜0.05);在浸潤深度＜1/2肌層、＞1/2肌層中宮頸鱗癌組織中PTEN、C-myc和P27陽性表達率間的差別也具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 PTEN、C-myc和P27在不同病變宮頸組織中的表達

2.2 PTEN、C-myc和 P27之間的相關性結果PTEN和P27的表達具有相關性(P＜0.01)，二者與C-myc無相關性。

表2 PTEN和P27的相關性

3 討論

3.1 宮頸癌組織中PTEN蛋白表達及意義 PTEN是迄今為止發現的第1個具有雙特異性磷酸激酶活性的抑癌基因。PTEN基因定位于染色體 10q23.3。PTEN具有脂質磷酸酶活性，使磷脂酰肌醇(3，4，5)-三磷酸(PIP3)去磷酸化，負性調節PI3K途徑，使細胞凋亡和(或)抑制細胞周期進程，并誘導其停止G。期，從而抑制細胞生長繁殖［3］。PTEN還具有蛋白磷酸酶活性，可抑制有絲分裂原激活蛋白激酶(MAPK)途徑。MAPK具有酪氨酸蛋白激酶活性，PTEN通過拮抗促生長的蛋白酪氨酸激酶而抑制腫瘤的生長和增殖［4］。PTEN還能使聚集粘連激酶(FAK)去磷酸，抑制其活性，負性調節細胞的粘連、轉移和浸潤［5］。由此可見PTEN主要通過其雙重底物特異性磷酸酶活性，經由PI3K信號系統和MAPK信號級聯途徑發揮腫瘤抑制作用，對細胞生長、凋亡、增殖及黏附產生影響。現已發現在多種原性惡性腫瘤和腫瘤細胞系中均有PTEN的基因改變［6］。近年研究發現，在子宮內膜癌、黑色素瘤、頭頸部鱗狀細胞癌、前列腺癌、肺癌及胃癌等多種腫瘤中存在PTEN基因的缺失或(和)突變。但是其與宮頸癌的關系研究較少，且結論不甚一致。張晨麗［7］等研究發現PTEN在子宮頸鱗癌中陽性表達率為34.5%，在正常子宮頸組織中陽性表達率為88.2%，兩者差異有顯著性(P＜0.01)。PTEN在淋巴結未轉移組中陽性表達率明顯高于淋巴轉移組(P＜0.01)。PTEN表達與臨床分期呈負相關，而與患者年齡、病理分級無相關性(P均＞0.05)。舒寬勇［8］等研究發現宮頸癌組PTEN蛋白表達率明顯高于慢性宮頸炎組，與有關宮頸癌PTEN基因突變編碼蛋白表達下調的報道不相符，本研究發現PTEN蛋白在宮頸癌組織中陽性表達(32.10%)明顯低于宮頸上皮內瘤變(CIN Ⅱ-Ⅲ)(50.00%)、正 常 宮 頸 黏 膜 上 皮(87.50%)，且與宮頸癌組織的分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移呈明顯相關性，分化程度越低、浸潤越深、有淋巴結轉移時PTEN蛋白表達明顯降低，表明PTEN蛋白表達水平下調或缺失在一定程度上促進了細胞的惡性轉化和腫瘤的形成。

3.2 宮頸癌組織中P27蛋白表達及意義 P27是周期依賴性蛋白激酶抑制劑家族(cyciin dependentkinase inhibitors，CDKIs)的成員之一，其表達產物P27蛋白在人體多種惡性腫瘤細胞增殖和分化的調控中起著非常重要的作用，它的過度表達可使細胞周期停止在G1中期［9］。Palmqvist等［10］采用免疫組織化學方法研究了89例結直腸癌組織中的P27表達，發現P27蛋白低水平表達很普遍。本研究發現P27蛋白在宮頸癌組織中明顯低表達，僅為12.50%，且在低分化和有淋巴結轉移及浸潤深層的腫瘤細胞中表達缺失更加明顯，隨著腫瘤分化程度降低，P27表達也降低，提示P27基因在宮頸癌進展中逐漸失去細胞周期負調控能力，使癌細胞具有更高的惡性程度，這提示P27與腫瘤的預后及生物學行為有關。在無淋巴結轉移組P27蛋白陽性率(50.00%)明顯高于有淋巴結轉移組(27.27%)，表明P27蛋白在宮頸癌的進展及轉移過程中逐漸喪失了作為細胞周期負調控因子的抑癌作用，使得癌細胞具有更高的惡性程度和侵襲力。另外P27蛋白缺乏還可導致細胞間粘附力下降，使腫瘤容易轉移。

3.3 C-myc基因是發現較早的原癌基因之一 其編碼蛋白具有轉錄因子活性，有促進細胞增殖、調節細胞周期、抑制細胞分化、參與細胞凋亡的作用。國外報道在女性乳腺癌中C-myc基因擴增率在15.7%～25.0%不等，過度表達的陽性率為22%～45%［11］。Rao［12］等認為C-myc在良性增生、非典型增生、乳腺癌中的基因擴增是逐漸遞增的。C-myc基因擴增在乳腺癌的發生、發展過程中具有重要的作用。有研究認為，在乳腺癌中標記腫瘤內部異質性的是C-myc和Cyclin D1的擴增，而不是CerBb-2的擴增［13］。這從側面證明，C-myc基因擴增在乳腺癌的發展中起著重要作用。趙云霞等研究顯示，C-myc的表達與乳腺癌分級、淋巴結轉移、病理類型相關。組織學分級高低、淋巴結有無轉移、臨床病理類型相關。本研究顯示，C-myc的表達與宮頸癌組織的分化程度、浸潤深度和有無淋巴結轉移呈明顯相關性，分化程度越低、浸潤越深、有淋巴結轉移時C-myc蛋白的表達越高，表明C-myc蛋白表達水平增高在一定程度上促進了細胞的惡性轉化和腫瘤的形成。

3.4 PTEN、C-myc和P27蛋白在宮頸癌組織中表達的相關性 作為PTEN的下游靶分子之一，P27起著PTEN和底物間的橋梁作用。Bruni等［10］研究甲狀腺癌發現P27的表達在癌組織中下降，PTEN的表達與之平行，二者之間存在著密切的關聯。An等［14］報道在子宮內膜癌病例中PTEN和P27蛋白表達存在相關性。本研究發現宮頸癌組織中PTEN和P27蛋白表達具有相關性(P＜0.05)，提示PTEN可能通過上調P27的表達來抑制細胞周期，達到抑制腫瘤發展的作用。C-myc與二者的關系有待研究。

［1］Pennisi E.New tumor suppressor found-twice［J］.Science，1997，275(5308):1876-1878.

［2］郭光紅，馬振濱，邊瑞民，等.P27在胃癌中的表達及意義［J］.濱州醫學院學報，2006，29(1):6-8.

［3］柯細松.PTEN抑癌機制的最新進展［J］.國外醫學·遺傳學分冊，2001，24(4):194-197.

［4］Hamada Sasaki T，Koni P A，et a1.The PTEN/P13K pathway Governs normal vascular development and tumor angiogenesis［J］.Genes Dev，2005，19(17):2054-2065.

［5］周琦，葉學正，唐郢，等.抑癌基因PIEN在宮頸癌中的表達及與預后的關系［J］.腫瘤學雜志，2007，13:121-122.

［6］AIU.Gatekeeper for endometrium:the PTEN tumor suppressor gene［J］.J Natl CancerInst，2000，92(11):861-863.

［7］張晨麗，張煦，史淑霞，等.子宮頸鱗狀細胞癌中Stat3和PTEN的表達及意義［J］.臨床與實驗病理學雜志，2008，24(4):419-421.

［8］舒寬勇，熊樹華，王晨，等.抑癌基因PTEN在宮頸癌變中的表達及意義［J］.中國腫瘤，2007，16(8):654-655.

［9］Goel A，Arnold C N，Niedzwieeki D，et a1.Frequent inacfivation of PT＇EN by promoter hypermethylation in miemsatellite instability-hish sporadic coloreetal cancers［J］.Cancer Res，2004，64(9):3014-3021.

［10］Bmni P，Boecia A，Baldassarre G，et al.PTEN expression is reduced in a subset of A sporadic thyroid carcinomas:evidence that PTEN growth suppressing activity in thyroid cancer ells is mediatedby P27 kipl［J］.Omogene，2000，19(28):3146-3155.

［11］NaiduR，Wahab N A，Yadav M，et al.Protein experession and molecular analyasis of Cmy-c gene in primary brest carcinomas as using immunohistochemistry and differential pomerase chain reaction［J］.Mol Med，2002，9(2):189-196.

［12］Rao J Y，Apple S K，Jin Y，et al.Comparative polymerase chain reaction analyasis of Cmy-c gene amplification archival breast fine needle aspiration materials［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.2000，9(2):175-179.

［13］Glockner S，Buurman H，Kleeberger W，et al.Marked intratumoral heterogeneity of C-myc and cyclin D1 but not of C-erbB-2 amplification in breast cancer［J］.Invest，2002，82(10):1419-1426.

［14］An H J，Lee Y H，Cho N H，et al.Alteration of PTEN expression in endometrial carcinoma is associated with down-regulation of cyclin dependent kinase inhibitor，P27［J］.Histopathdagy，2002，41(5):437-445.