頂空氣相色譜法測定氫溴酸加蘭他敏中三氯甲烷殘留量

范桂強，宋更申

(1.河北省衡水市食品藥品檢驗所，河北 衡水 053000; 2.河北省藥品檢驗所，河北 石家莊 050011)

氫溴酸加蘭他敏(galanthamine hydrobromide)臨床上主要用于治療阿爾茨海默病[1]。在氫溴酸加蘭他敏合成過程中，使用了乙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯、丙酮、異丙醇、甲醇、甲苯、三氯甲烷等有機溶劑，在氫火焰離子化(FID)檢測器上，前7種有機溶劑均可得到良好的靈敏度，而三氯甲烷靈敏度低，無法準確定量，因為其結構上含有氯原子，故選用電子捕獲檢測器(ECD檢測器)可顯著提高靈敏度。三氯甲烷屬第二類殘留溶劑，限度均為0.006%，屬于在藥品中應限制殘留量的溶劑[2－3]，控制其殘留量對于保證藥品質量和用藥安全有重要意義。筆者根據ICH的指導原則和2005年版《中國藥典(二部)》的相關規定，并參考文獻[4－5]，采用ECD檢測器，以水為溶解介質，測定氫溴酸加蘭他敏中三氯甲烷的殘留量。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890型氣相色譜儀(美國安捷倫公司);Agilent 7694E型頂空進樣器，BP211D型電子天平(德國賽多利斯公司)。三氯甲烷為色譜純(美國Fisher公司)，水為超純水;氫溴酸加蘭他敏(國內 A公司，批號分別為 081021，081022，081023，含量分別為99.6%，99.5%，99.9%)。

2 方法和結果

2.1 色譜條件

色譜柱:DB －624毛細管柱(60 m×530 μm ×3 μm);柱溫:85℃;分流進樣方式，分流比為10∶1，進樣口溫度為200℃;采用ECD檢測器，檢測器溫度為250℃;載氣為氮氣，流速為3.0 mL/min。頂空進樣，平衡溫度90℃，平衡時間為30 min，頂空瓶加壓時間為0.2 min，進樣時間為1 min，定量環體積1 mL，定量環溫度100℃，傳輸線溫度110℃。

2.2 溶液制備

精密稱取三氯甲烷12 mg，置200 mL容量瓶中，用50%的N，N－二甲基甲酰胺水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液貯備液。精密量取對照品溶液貯備液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。稱取樣品約0.5g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，精密加水5 mL使溶解，搖勻，密封，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:照2.2項下的方法制備對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，記錄色譜圖，見圖1。結果三氯甲烷的理論板數為38210，水不干擾三氯甲烷的測定。

圖1 氣相色譜圖

線性關系考察:分別精密量取2.2項下對照品貯備液1 mL，共 6 份，分別置 10，25，50，100，200，500 mL 容量瓶中，分別用水稀釋至刻度。分別精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，按2.1項下色譜條件測定，以峰面積(A)為縱坐標、質量濃度(C)為橫坐標進行線性回歸，得線性歸方程 A=1899.25 C+99.23，r=0.9999(n=6)。結果表明，三氯甲烷質量濃度線性范圍為0.12 ～ 6.0 μg/mL。

精密度試驗:取2.2項下同一對照品溶液，共6份，按2.1項下色譜條件連續測定6次，結果峰面積的 RSD為1.3%(n=6)。

重復性試驗:取本品(批號為081021)約0.5 g，精密稱定，共6份，分別置20 mL頂空瓶中，精密加水5 mL使溶解，搖勻，密封，按2.1項下色譜條件測定。結果樣品中三氯甲烷的平均含量為 0.013%，RSD 為 0.8%(n=6)。

加樣回收試驗:稱取已知三氯甲烷含量的樣品(批號為081021)約 0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，共9份，分別加入對照品貯備液 0.400 mL，0.500 mL，0.600 mL，各 3 份，再分別用水稀釋至5.0 mL，搖勻，按2.1項下色譜條件測定，以外標法計算含量。結果見表1。

表1 三氯甲烷加樣回收試驗結果(n=9)

檢測限與定量限試驗:采用逐步稀釋法測得，以 S/N=3時計算三氯甲烷的檢測限，以 S/N=10時計算三氯甲烷的定量限，結果檢測限為61 pg/mL，定量限為200 pg/mL。

2.4 樣品中三氯甲烷的含量測定

取三氯甲烷和3批樣品，按2.2項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，按2.1項下的色譜條件測定，按外標法以峰面積計算三氯甲烷的殘留量。結果3批樣品中三氯甲烷的殘留量分別為0.013%，0.012%，0.014% ，均不符合規定。

3 討論

氫溴酸加蘭他敏在水中易溶，且在選定的色譜條件下，水對三氯甲烷無干擾，因此選擇水作為溶劑。

采用頂空進樣法，可以通過控制溫度使待測溶劑有效氣化，避免了直接進樣時樣品和水對進樣口及色譜柱的污染，同時也減小了主成分對分離測定的干擾。試驗考察了不同的頂空溫度和頂空平衡時間對樣品測定的影響，結果表明，樣品在70，80，90℃的頂空溫度下均穩定，為了提高檢測靈敏度，本試驗選擇90℃作為頂空溫度;樣品在30，40 min的頂空平衡時間內得到的峰面積基本一致，本試驗選擇30 min作為頂空平衡時間。

3批樣品中三氯甲烷的殘留量均超過了0.006%的限度要求，應對樣品進行充分的重結晶和干燥以盡可能的除去三氯甲烷或降低三氯甲烷的殘留量，保證藥品的質量安全，可控。

[1]馬振英，趙文麗.氫溴酸加蘭他敏獲得美國批準[J].國外醫學·藥學分冊，2001，28(6):378.

[2]周海鈞.藥品注冊的國際技術要求質量部分[M].北京:人民衛生出版社，2001:343.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:54－57.

[4]宋更申，郭 毅，付 焱，等.毛細管氣相色譜法測定鹽酸美金剛原料中三氯甲烷的殘留量[J].中國藥房，2010，21(37):3536－3537.

[5]宋更申，曹鳳習，閆 凱，等.頂空毛細管氣相色譜法測定鹽酸地芬尼多原料中有機溶劑的殘留量[J].中國藥房，2010，21(41):3914－3915.