反相高效液相色譜法測定葆宮止血顆粒中靛玉紅含量

曹云飛，葉 飛

(1.江蘇省鎮(zhèn)江藥品檢驗所，江蘇 鎮(zhèn)江 212003; 2.江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，江蘇 鎮(zhèn)江 212009)

葆宮止血顆粒是秉承中醫(yī)理論并結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研制方法而制的一種中成藥[1]，適用于固經(jīng)止血、滋陰清熱。筆者采用反相高效液相色譜法測定葆宮止血顆粒中靛玉紅成分的含量，進一步提高了該藥標(biāo)準(zhǔn)，方法簡便、快速，重現(xiàn)性好，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

恒溫水浴鍋(江蘇金壇市中大儀器廠);BP211D型電子天平(德國賽多利斯股份公司);Agilent1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技公司)。靛玉紅(C16H10N2O2)對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號為0717－2003);葆宮止血顆粒(中盛海天制藥有限公司，批號分別為20091143，20100106，20100607);甲醇為色譜純;水為二次重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Symmetry C18柱(150 mm × 3.9 mm，5 μm);流動相:甲醇 －水(75∶25);進樣量:10 μL;流速:0.5 mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:289 nm。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取樣品內(nèi)容物1袋，研細，加水50 mL使溶解[2]，用稀硫酸調(diào)節(jié) pH為 1～2，在沸水浴中水解1 h，放冷，用40%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性，用乙醚振搖提取 2次(40 mL，30 mL)，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇10 mL溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻濾過，取續(xù)濾液2.0 mL，置10 mL量瓶中，流動相稀釋至刻度，得供試品溶液。精密稱取靛玉紅適量，加流動相稀釋成102.50 μg/mL的對照品貯備液，按處方比例稱取除青黛以外的其它幾味藥[3]，按制備工藝制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:取102.50 μg/mL的靛玉紅對照品溶液，分別取樣 1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 mL，置 10 mL 量瓶中，依法進樣，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程 Y=1086.3X －2.395，r2=0.9977(n=5)。結(jié)果表明，靛玉紅進樣量在10.25～92.25 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:取同一靛玉紅對照品溶液，重復(fù)進樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD為1.8%。

圖1 高效液相色圖譜

重復(fù)性試驗:取本品1批共5份，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果含量的 RSD為1.36%。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，室溫放置12 h，每隔一段時間進樣10 μL，記錄峰面積。結(jié)果靛玉紅峰面積平均值為177.6，RSD 為 0.32%。

加樣回收試驗:取靛玉紅適量，配制成質(zhì)量濃度為23.5139 μg/mL 的溶液，分別取 1.0，2.0，3.0 mL，加入到已知含量的樣品中，依法測定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取供試品溶液和對照品溶液，各進樣10 μL，讀取峰面積值，按外標(biāo)法計算含量。結(jié)果3批樣品中靛玉紅含量分別為32.83，32.51，32.30 μg/g。

3 討論

通過試驗得知，靛玉紅在289 nm波長處有較大吸收，其他成分在該波長處無干擾，因此可選擇此波長作為檢測波長。試驗過程中曾嘗試0.1%磷酸－甲醇(30∶70)[4]及甲醇－水(62∶38)[5]為流動相，經(jīng)比較，選用甲醇－水(75∶25)[6]為流動相最佳，峰形及柱效較好。曾嘗試直接超聲提取，所制得供試品溶液峰面積太小，幾乎測不到，故選擇文中的提取方法。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(上冊)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2011:998.

[2]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志(第一冊)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1979:355.

[3]WS3－10028(ZD－0028)－2002，國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)[S].

[4]林夕霆.RP－HPLC法測定青黛中靛玉紅的含量[J].海峽藥學(xué)，2004，3(6):54－56.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:16.

[6]徐成志.反相高效液相色譜法測定利肝隆片中靛玉紅含量[J].中國藥業(yè)，2007，22(16):28.