高效液相色譜法測定復(fù)光顆粒中芍藥苷含量

梁 帥 ，王路宏 ，李 巖

(1.吉林省四平市食品藥品檢驗所，吉林 四平 136000; 2.吉林省腦科醫(yī)院，吉林 四平 136000)

復(fù)光顆粒為吉林省四平市第二榮復(fù)軍人醫(yī)院的中藥制劑，由白芍、當歸、茯苓、白術(shù)、柴胡、熟地、山藥、生地等15味中藥材組方，具有滋腎、養(yǎng)肝、散風(fēng)明目的功效，主治視物昏渺、蒙昧不清、視功能減退、青盲、內(nèi)障、視網(wǎng)膜炎、玻璃體混濁、視神經(jīng)萎縮等眼病，是該院臨床應(yīng)用多年的協(xié)定處方。為更好地控制其內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床療效穩(wěn)定可靠，本試驗中采用高效液相色譜法測定了本品白芍中主要有效成分之一芍藥苷的含量，為控制其質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

島津2010AHT全自動高效液相色譜儀，紫外檢測器，Class－vp工作站。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢驗所)，批號為110736－200629，供含量測定用;批號為110736－200934，含量為95.7%;批號為110736 －200629，含量為 98.1%;批號為 110736 －201035，含量為96.5%);復(fù)光顆粒(吉林省四平市第二榮復(fù)軍人醫(yī)院提供);甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Zorbax－SB C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Apollo C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Shim －Pack VP －ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(35∶65);檢測波長:230 nm;進樣量:10 μL。理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2000，芍藥苷峰與相鄰峰之間的分離度大于1.5，分離度良好。高效液相色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取約 2.0 g，精密稱定，置 50 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液2 mL潤濕，加水35 mL，搖勻，超聲處理20 min，放冷，加水至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得供試品溶液。取不含白芍的陰性樣品，同法制得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密稱取芍藥苷對照品10.42 mg(批號為110736－200629)，置 50 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，制成每 1 mL 含 208.40 μg的溶液，作為對照品溶液Ⅰ;精密吸取 5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每 1 mL 含 41.68 μg 的溶液，作為對照品溶液Ⅱ;分別取對照品溶液Ⅱ(2，5，10 μL)和對照品溶液Ⅰ(4，8，10，20 μL)注入液相色譜儀，記錄峰面積值，以對照品進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線。計算得回歸方程 Y=1477.1 X－7577.6，r2=1(n=7)。結(jié)果表明，芍藥苷進樣量在 0.075 ～40 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，符合外標法定量測定的要求。

精密度試驗:取批號為20110119的樣品，按含量測定正文方法制備供試品溶液，吸取10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測定其色譜峰面積值。結(jié)果的 RSD=0.08%(n=6)，表明方法具良好的精密度。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，按擬定的色譜條件于0，2，5，12，24 h 時進樣測定。結(jié)果峰面積的 RSD=0.81%(n=5)，表明24 h內(nèi)供試品溶液中芍藥苷的含量基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取樣品(批號為050105)6份，每份約0.4 g，精密稱定，照2.2項下方法制備供試品溶液，獨立試驗。結(jié)果含量的RSD=0.6%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為20110119，含量為1.1254 mg/g)6份，分別精密加入0.2028 g/L的對照品溶液5 mL，依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 芍藥苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

依法測定5批樣品，結(jié)果見表2。可見，5批樣品含量測定結(jié)果差異較大。根據(jù)2010年版《中國藥典(一部)》白芍藥材的含量測定限度按干燥品計算不低于1.6%和該處方中白芍的量，得出本品每袋含芍藥苷全部轉(zhuǎn)移時最低不得少于15.36 mg/袋，提取過程轉(zhuǎn)移率按50%計算，制成顆粒時轉(zhuǎn)移率為80%計算，結(jié)果為6.14 mg/袋，比較切合實際。樣品中的3批白芍藥材平均含量為2.9%，5批樣品含量測定結(jié)果的最低值為8.38 mg/袋，考慮藥材由于產(chǎn)地及采收時間的不同導(dǎo)致質(zhì)量存在較大的差異，因此，暫訂本品每袋含芍藥苷(C23H28O11)總量不得少于4.0 mg。

表2 5批樣品中芍藥苷含量測定結(jié)果(n=5)

3 討論

采用高效液相色譜法，選用芍藥苷為指標性成分，對復(fù)光顆粒中白芍的有效成分之一芍藥苷進行含量測定，并分別對精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性和回收率進行了考察。試驗結(jié)果表明，所建立的方法穩(wěn)定、準確、可行，能有效控制復(fù)光顆粒的內(nèi)在質(zhì)量，確保臨床療效。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:96.