高效液相色譜法測定復方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定含量

王 璐

(河南省洛陽市食品藥品檢驗所，河南 洛陽 471003)

復方替硝唑氯己定含漱液的處方組成為替硝唑(0.5 g/L)和醋酸氯己定(0.2 g/L)、硼酸、糖精鈉等，以水作為溶劑，為抗菌消炎藥。醋酸氯己定為陽離子表面活性劑，抗菌譜廣，對多數革蘭陽性及陰性細菌都有殺滅作用。本試驗中建立了高效液相色譜法，測定復方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

美國Agilent 1260型高效液相色譜儀。醋酸氯己定對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100183－199902);復方替硝唑氯己定含漱液(批號分別為110102，110301，110506，由河南科技大學第一附屬醫院制劑室提供);甲醇為色譜純，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Agilent Zorbax Eclipse XDB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:三乙胺緩沖液(0.05 mol/L，用磷酸調 pH 至3.5)－乙腈 － 甲醇(42 ∶13 ∶45);流速:1.0 mL/min;檢測波長:259 nm;進樣量:10 μL。在此色譜條件下，醋酸氯己定與其對照品峰保留時間一致，無其他干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取醋酸氯己定對照品25.9 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。取對照品貯備液8.0 mL，置100 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。精密量取樣品溶液10 mL(約相當于醋酸氯己定2 mg)，置50 mL的量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取不含醋酸氯己定的樣品溶液，照供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品貯備液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，分別置 25 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，量取10 μL，在2.1色譜條件下測定，以峰面積 A與質量濃度 C繪制標準曲線，得回歸方程 A=29.44 X+4.828，r=0.9999(n=8)。結果表明，醋酸氯己定質量濃度線性范圍為10.36 ～ 82.88 μg/mL。

精密度試驗:取2.2項下同一對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復進樣5次。結果平均峰面積為1215，RSD=0.38%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，置無色容量瓶中，在自然光下，分別于 0，2，6，10，12，24 h 時測定，記錄主峰面積。結果平均峰面積為1218，RSD=0.55%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

重復性試驗:取同一批樣品5份，按2.4項下樣品測定方法操作。結果醋酸氯己定平均含量為0.2022 g/L，RSD=0.72%(n=5)，表明分析方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量(醋酸氯己定質量濃度為0.2046 g/L)的樣品2.0 mL，分別精密加入對照品貯備液(醋酸氯己定質量濃度為 0.518 g/L)0.6，0.8，1.0 mL，置 25 mL 的量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按2.4項下樣品測定方法測定。結果見表1。

表1 醋酸氯己定加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

按2.2項下制備對照品溶液和供試品溶液，在2.1項下色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算其含量。結果批號為110102，110301，110506的樣品中醋酸氯己定含量分別為0.2046，0.2022，0.1987 g/L。

3 討論

取醋酸氯己定對照品(10 μg/L)溶液，在220～360 nm波長內掃描，結果在259 nm波長處有最大吸收峰，且吸收光譜曲線較平滑，參考文獻[2]，選擇259 nm作為測定波長。

筆者曾選用三乙胺緩沖液(0.05 mol/L用磷酸調pH至2.5)－乙腈－甲醇流動相的比例為(45∶10∶45)，但醋酸氯己定峰拖尾，且pH過低恐對硅膠相連的化學鍵合相有影響，最終確定流動相三乙胺緩沖液(0.05 mol/L用磷酸調pH至3.5)－乙腈－甲醇比例為(42 ∶13 ∶45)，效果理想。

醋酸氯己定定量分析的研究有容量法[1]、紫外分光光度法[2－3]、高效液相色譜法[4－5]，本樣品為復方制劑，由于其他成分的干擾故不能用紫外分光光度法、容量法，而高效液相色譜法具有分離性能好，靈敏度高等特點。因此，用高效液相色譜法測定醋酸氯己定的含量，樣品不經過處理直接測定，操作簡便，精密度高，可用于復方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定的含量測定。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:1131.

[2]費克軍，朱曉萍.復方替硝唑含漱液的含量測定[J].中國醫院藥學雜志，2003，20(10):39.

[3]邊 疆，楊立延，陳奕樺.雙波長線性回歸測定醋酸氯己定和甲硝唑的含量[J].中華預防醫學雜志，2000，34(1):75.

[4]田兆紅，龐小蓮.HPLC法測定醋酸氯己定栓的含量[J].華夏醫學，21(2):219.

[5]董 煜，董 莉.HPLC法測定甲硝唑氯己定洗劑和復方氯己定含漱液中甲硝唑和葡萄糖氯己定含量[J].中國藥學雜志，2003，38(7):532.