二十味沉香丸對低壓低氧暴露大鼠血紅蛋白、紅細胞比容及血清EPO表達的影響

曹成珠，靳國恩，舒星宇，李生花

(1青海大學醫學院，西寧 810001;2南京人口管理干部學院)

近年來，高原急慢性低氧對機體的影響備受關注。人進入高原低氧環境后，體內發生一系列變化，低氧干擾了機體的氧化反應，造成細胞代謝和功能紊亂。高原低氧可使血液中促紅細胞生成素(EPO)、血紅蛋白(Hb)水平升高，紅細胞(RBC)數量增多，從而增加氧的運輸與釋放，這在應對高原缺氧中具有重要意義。但紅細胞比容(Hct)過高則會顯著增加血液黏滯度，使血流緩慢，氧的傳遞受阻，反而加重組織缺氧。二十味沉香丸是在八味沉香丸基礎上改良而來的組方，其除了對腦細胞有很好的保護作用外，還能改善心肌缺血，對缺氧性心肌勞損也有一定的防治作用。2010年1月～2012年6月，本研究通過觀察二十味沉香丸對高原低壓低氧暴露大鼠Hb、Hct及血清EPO表達的影響，并探討其意義。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗動物:雄性Wistar大鼠165只，約45 d齡，體質量(180±30)g，由四川大學實驗動物中心提供［SCXK(111)2009-09］。試劑及儀器:25%烏拉坦(江蘇東邦醫藥化工有限公司)，ELISA試劑盒 (美國Santa Cruz公司)。

1.2 實驗方法 將165只大鼠由成都空運至西寧(海拔2 260 m)，隨機分為平原對照組(15只)、高原對照組(75只)和高原給藥組(75只)。平原對照組到達西寧即刻檢測Hb、Hct，采集血清并液氮儲存;高原對照組和高原給藥組大鼠從西寧直接運至海拔4 500 m(果洛州花石峽鎮)地區。高原對照組用0.9%生理鹽水灌胃，高原給藥組用二十味沉香丸制成的水劑(根據人的用量換算成大鼠的量，1 mL/100 g)灌胃。高原對照組、高原給藥組分別于1、3、7、15、30 d，各取 15 只大鼠，測定大鼠體質量、Hb、Hct，之后立即處死動物，收集血清，液氮保存。用ELISA法檢測血清EPO。

1.3 統計學方法 采用SPSS10.0統計軟件。數據以±s表示，行多組方差分析，相關性分析用Pearson法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 低壓低氧暴露不同時間三組大鼠Hb、Hct、血清EPO表達變化 平原對照組 Hb、Hct分別為(15.8 ±1.2)g/L 、54.89% ±2.5%。高原對照組大鼠高原暴露第3、7、15、30 天 Hb、Hct水平較平原對照組有所升高，但明顯低于高原給藥組(P均＜0.05)。詳見表1。隨著暴露時間的延長，高原對照組大鼠血清EPO表達逐步升高。平原對照組血清EPO水平為14.5 ng/mL，高原給藥組血清EPO一直維持在較低的水平，在暴露15 d左右略有升高(P＜0.05)，但30 d時又恢復至正常水平。詳見表2。

表1 暴露不同時間高原對照組與高原給藥組大鼠Hb、Hct變化(±s)

表1 暴露不同時間高原對照組與高原給藥組大鼠Hb、Hct變化(±s)

注:與高原給藥組相比，*P＜0.05

組別 Hb(g/L)第1天 第3天 第7天 第15天 第30天Hct(%)第1天 第3天 第7天 第15天 第30天高原對照組 15.7 ±0.6 16.3 ±0.9*16.4 ±0.78*18.8 ±0.4*22.8 ±2.0* 56.42 ±1.4 57.72 ±2.2*57.80 ±1.9*63.6 ±0.9*65.40 ±4.1*高原給藥組 15.4 ±1.4 15.7 ±1.1 15.9 ±0.54 16.4 ±0.6 16.2 ±1.1 55.72 ±2.4 56.22 ±2.5 54.78 ±1.48 58.23 ±1.457.33 ±1.2

表2 暴露不同時間高原對照組與高原給藥組血清EPO 表達變化(ng/mL，±s)

表2 暴露不同時間高原對照組與高原給藥組血清EPO 表達變化(ng/mL，±s)

注:與高原對照組相比，*P＜0.05

組別EPO第1天 第3天 第7天 第15天 第30天高原對照組 14.9 ±0.6 15.9 ±0.8 17.6 ±0.8 19.8 ±0.3 20.0 ±1.1高原給藥組 14.8 ±1.0 15.0 ±1.0 14.1 ±0.5* 16.2 ±0.5* 15.1 ±0.9*

2.2 高原對照組大鼠Hb與血清EPO表達的相關性 高原對照組大鼠血清中EPO表達水平與Hb呈正相關關系(r=0.83，P＜0.05)，見圖1。

圖1 高原對照組大鼠Hb與血清EPO表達的相關性

3 討論

研究證實，血液系統Hb，Hct和EPO是慢性低氧反應最敏感的指標，主要表現為骨髓造血增強，RBC增多，Hb含量增加，血清EPO表達升高，進一步提高RBC數量和Hb的濃度，從而增加氧的運輸與釋放［1］。如果Hct過高則顯著增加血液黏滯度，使氧的傳遞受阻，反而加重組織缺氧。至于低氧可刺激大鼠 Hb、Hct升高的原因，多認為與 HIF-1-EPO-RBC調節系統有關。HIF-1α作為調控氧穩態的主要轉錄因子，對維持機體氧平衡和適應低氧環境具有關鍵作用［2］。EPO是一種相對分子量為34 000、受缺氧調節的糖蛋白激素，在調節紅細胞生成和成熟過程中具有關鍵作用，能發揮多種旁分泌和自分泌功能。EPO對紅細胞生成的作用可歸結為:①刺激有絲分裂，促進紅系祖細胞增殖;②激活紅系特異基因，誘導分化;③加速網織紅細胞的釋放和提高紅細胞膜的抗氧化功能。此外，EPO還有抗氧化、穩定紅細胞膜的作用，對多向祖細胞(CFUGEMM)、巨核系祖細胞(CFU，Meg)、粒單系祖細胞(CFU-GM)也有一定的刺激作用。EPO的產生受氧分壓的調控，決定其合成的主要因素是EPO基因在肝和腎的轉錄活性，而HIF-1α控制這一過程。以往的研究已證實，EPO基因序列中含有與HIF-1α相結合的區域，即低氧反應元件，HIF-1α能激活EPO基因的表達，EPO進而促進RBC增殖。

藏藥二十味沉香丸經過長期的臨床應用，在高血壓、冠心病、心律失常、偏癱、神志紊亂、口眼歪斜、四肢麻木、失眠等心血管和神經系統疾病的治療方面顯示了獨特的療效，是最常用的藏藥之一。本研究中，高原對照組大鼠暴露于低壓低氧后，其Hb、Hct水平顯著升高，并隨著高原暴露時間延長而持續增高，這與以往研究結果［1］一致。但在高原給藥組二者增高并不明顯，與平原對照組相比，無顯著性差異，表明二十味沉香丸能抑制RBC過度增殖，降低血液黏滯度，加快氧傳遞速度和氧利用效率，從而起到機體抗缺氧的效果。這與其活血化瘀、改善血液循環的藥理特性相符合［3～6］。

本研究發現，高原對照組大鼠血清EPO表達與Hb水平呈正相關關系，表明在高原低氧環境下Hb的升高主要與EPO的高表達有關。高原對照組大鼠血清EPO表達在暴露第1天略上升，第3天后隨暴露時間延長表達增強，而高原給藥組血清EPO表達在暴露15 d左右略有升高，但30 d時又恢復至正常水平，表明低氧暴露初期EPO的升高與機體低氧應激有關，長期低氧引起EPO表達輕微下降，是機體或細胞適應低氧的表現。高原給藥組血清EPO表達水平明顯低于高原對照組，提示二十味沉香丸對EPO表達有抑制作用。推測該藥可能是通過干預HIF-EPO-RBC信號傳導途徑，抑制EPO表達，使Hb水平在高原低氧時有所增加，增強Hb的攜氧能力，但不增加血液黏滯度，從而改善組織缺氧，促使機體適應低氧環境［7～9］。

綜上所述，二十味沉香丸可能是通過降低血清EPO表達，降低低壓低氧暴露下大鼠的Hb和Hct，起到抗缺氧的效果，但其具體作用機制還有待進一步的實驗研究來證實。

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