大腸癌手術前后外周血CEA蛋白、CEA mRNA的變化及臨床意義

秦海春 劉 俊 杜廷義 范 紅 (云南省第一人民醫院消化科，云南 昆明 65003)

大腸癌是一種常見惡性腫瘤，在我國惡性腫瘤中居第五位，其發病率和致死率均較高，嚴重危害人類的健康。癌胚抗原(CEA)作為腫瘤標志物已廣泛用于大腸癌的診斷〔1〕，然而其對大腸癌治療效果的判斷目前報道較少。本文檢測大腸癌患者手術前后血CEA蛋白、CEA mRNA水平，探討其在大腸癌治療效果判斷中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2009年1月至2011年6月在我院行手術治療的大腸癌患者48例，均經X線、腸鏡及病理檢查確診。年齡33～75〔平均(47.1±13.8)〕歲，其中男29例，女19例;一年內復發9例。同時選擇來我院進行體檢的健康體檢者50例作為正常對照組，年齡32～76〔平均(48.5±14.3)〕歲，其中男31例，女19例，均無肝、心、腎等臟器疾病。

1.2 方法

1.2.1 血漿CEA蛋白水平檢測 分別于治療前后采集空腹靜脈血1.5 ml，加入乙二胺四乙酸二鈉抗凝管，4℃ 3000 r/min離心5 min，分離血漿。采用電化學發光免疫法檢測CEA，應用Cobase601全自動電化學發光免疫分析儀及其配套試劑，嚴格按操作規程進行檢測，CEA＞10 ng/ml為陽性。

1.2.2 外周血CEA mRNA水平檢測 分別于手術治療前后采集空腹靜脈血5 ml，加入枸櫞酸鈉抗凝管，于1 h內利用TBD公司淋巴細胞分離液進行細胞分離，采用Invitrogen公司Trizol試劑提取總RNA。采用逆轉錄聚合酶鏈反應法檢測CEA mRNA，試劑盒購自大連寶生物技術有限公司。PCR反應在美國MJResearch公司產PTC－200型PCR儀上進行，反應條件:94℃ 2 min;92℃ 10 s、50℃ 25 s、72℃ 2 s，35 個循環;最后72℃5 min至4℃。引物序列參照相關文獻〔2〕，序列如下:上游引物為 5′－AGTGAGTGCAAACCGCAGTGAC－3′，下 游 引 物 為 5′－TTGAGGTTCGCTCCCGAAAG－3′。擴增產物經2.5%瓊脂糖凝膠電泳，出現108 bp條帶者判定為陽性。

1.3 統計學方法 應用SPSS11.5統計軟件，數據資料以±s表示，計數資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 對照組與大腸癌組治療前后CEA和CEA mRNA比較

大腸癌治療前、后CEA水平、CEA陽性率和CEA mRNA陽性率均明顯高于正常對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。大腸癌治療后CEA水平、CEA陽性率和CEA mRNA陽性率均明顯下降，與治療前比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 對照組與大腸癌組治療前后CEA和CEA mRNA比較

2.2 治療后CEA和CEA mRNA陽性與大腸癌復發間的關系

治療后CEA mRNA陽性組復發率均明顯高于治療后CEA mRNA陰性組，差異有統計學意義(P＜0.05)。而治療后CEA蛋白表達與復發無明顯相關性(P＞0.05)。見表2。

表2 治療后CEA和CEA mRNA陽性與大腸癌復發的關系〔n(%)〕

3 討論

大腸癌包括結腸癌和直腸癌，是大腸黏膜上皮和腺體發生的惡性腫瘤，是消化道常見的惡性腫瘤之一。盡管目前診斷及治療手段有很大進展，但5年生存率并無多大改觀，仍在50%左右〔3〕。大腸癌患者早期常無明顯癥狀，相當比例的大腸癌患者確診時已到晚期，多數患者最終死于局部復發或轉移(淋巴結轉移及遠處轉移)，嚴重影響了治療效果和預后。大腸癌發生、發展及轉移的機制尚未完全闡明，主要認為是與腺瘤向腺癌的轉化及多種癌基因和抑癌基因聯合失調有關，是多因素、多步驟逐漸演變而成的復雜過程〔4〕。隨著近年來腫瘤分子生物學研究不斷發展，尋找與大腸癌的發生、發展及預后相關的新的分子標志物，對于早期診斷、預后評估及治療方案制定具有一定的臨床意義〔1〕。

CEA是一種具有人類胚胎抗原決定簇的酸性糖蛋白，由幼稚細胞以及胃腸道腫瘤細胞合成，在正常胎兒和成人消化道均少量產生，而失去極性的癌細胞分泌的CEA則進入血液和淋巴液，常應用于消化系統腫瘤的輔助診斷和動態監測判斷療效及轉歸〔5〕。本研究結果顯示，大腸癌組血漿CEA蛋白水平和陽性率明顯高于正常對照組，并且治療后CEA蛋白水平和陽性率明顯下降，可以反映大腸癌的發生及轉歸情況，但其缺點是敏感性太低;并且，血漿中CEA的表達與復發無相關性，不利于判斷大腸癌患者手術后情況。近年來，微轉移檢測作為一項獨立的高危因素用于預測腫瘤患者復發轉移的風險及預后，而外周血對存在于循環系統的微轉移都可以檢測，提示風險的意義更大〔6〕。CEA mRNA是細胞惡變時有關腫瘤基因的轉錄產物，只存在于某些腫瘤細胞內，細胞之外不能存在游離的CEA mRNA，因此，在外周血中檢測到CEA mRNA則表示外周血中已存在能表達CEA mRNA的腫瘤細胞或轉移腫瘤細胞〔1〕。王金芝等〔7〕對50例大腸癌患者外周血中 CEA mRNA水平進行檢測，發現其對大腸癌診斷的敏感性為62.0%，并且其陽性表達與患者的Dukes分期及有無遠處轉移有關，可以作為大腸癌病情發展和判斷預后的指標。本研究結果顯示，大腸癌組血漿CEA mRNA陽性率明顯高于正常對照組，而治療后CEA mRNA陽性率明顯下降;同時，治療后CEA mRNA陽性表達者其1年內的復發率明顯高于CEA mRNA陰性者，從而有望成為一種判斷手術效果、防止患者復發的指標。總之，血CEA蛋白、CEA mRNA在大腸癌患者中表達明顯升高，并且治療后明顯下降，其中治療后CEA mRNA的陽性表達與大腸癌復發明顯相關，對預測大腸癌的復發有重要意義。

1 何仰東.血清腫瘤標志物TSGF、CEA和CA199聯檢對大腸癌的診斷價值探討〔J〕. 中國醫藥指南，2010;8(20):24－6.

2 馬育華.CEA蛋白、CEA mRNA的檢測在大腸癌、胃癌早期診斷中的應用價值〔J〕.菏澤醫學專科學校學報，2010;22(2):8－10.

3 郭小剛，王建國，張 彬.血清CEA、TPA和CRP檢測在大腸癌手術前后的變化及意義〔J〕.現代腫瘤醫學，2010;18(9):1783－4.

4 楊光勇，呂永庭，羅 浩，等.血清CEA水平在大腸癌術后復發早期診斷中的意義探討〔J〕.醫學理論與實踐，2011;24(11):1251－2.

5 楊小文，孫楊安.聯合檢測血清CEA、VEGF、CA19－9在大腸癌診治中的價值〔J〕. 實用臨床醫學，2009;10(12):9－10.

6 申東蘭，胡金森，鄭海霞，等.外周血癌胚抗原mRNA在大腸癌組織中的表達及其臨床意義〔J〕.腫瘤防治雜志，2005;12(22):1732－4.

7 王金芝，燕善軍.Survivin mRNA、CEA mRNA在大腸癌患者外周血中表達及意義〔J〕. 腫瘤學雜志，2010;16(2):93－6.