血、尿β2－微球蛋白在高鹽高血壓大鼠早期腎損害診斷中的意義

陳景彥 范洪亮 張樹(shù)峰 (華北煤炭醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

眾所周知，高鹽可引起高血壓，而高血壓常引起嚴(yán)重的心、腦、腎損害，一般持續(xù)5年以上的高血壓患者大多出現(xiàn)不同程度的腎損傷〔1〕。由于在腎損害的早期，患者沒(méi)有明顯的癥狀，即使發(fā)展到相當(dāng)嚴(yán)重的階段，癥狀也不明顯，常單純用血清肌酐和尿素氮來(lái)評(píng)估高血壓患者的腎功能狀態(tài)，最后導(dǎo)致診斷的延遲〔2〕。目前大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為，血、尿β2－MG是診斷原發(fā)性高血壓早期腎損害的敏感指標(biāo)〔3〕。本文旨在進(jìn)一步比較血、尿β2－MG診斷高血壓早期腎損害的敏感性。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 3周齡雄性Wistar大鼠180只，體重40～60 g，SPF級(jí)，由天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(津)2009－001。

1.1.2 儀器及試劑 BP－6動(dòng)物套尾無(wú)創(chuàng)血壓儀(成都泰盟科技有限公司);低溫離心機(jī)、代謝籠、JA1003型精密天平、日立7180全自動(dòng)生化分析儀;FT－630G放免儀(北京核儀器廠);尿β2－MG放射免疫分析藥盒(北京原子高科股份有限公司)。

1.1.3 藥物 中藥飲片(承德醫(yī)藥集團(tuán)責(zé)任有限公司，批號(hào)0712002);纈沙坦(北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)X0796)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型制備 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，高鹽造成高血壓的周期長(zhǎng)，并且成模率低，故用3周齡雄性Wistar大鼠180只，選取尿蛋白和尿紅細(xì)胞均為陰性者作為觀察對(duì)象，預(yù)留10只作為正常對(duì)照組，其余170只通過(guò)連續(xù)22 w 8%高鹽飼料自然飼養(yǎng)，并從喂養(yǎng)第8周開(kāi)始每周一次進(jìn)行血壓測(cè)量。在喂養(yǎng)第18～22周時(shí)進(jìn)行血壓達(dá)標(biāo)(SBP＞130 mmHg)篩選(用鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)清醒狀態(tài)下大鼠的血壓)。模型篩選方法:(1)從血壓已達(dá)標(biāo)的大鼠中隨機(jī)抽出10只取腎組織行病理切片觀察，尚未發(fā)現(xiàn)病理改變者;(2)在大鼠分組前，每3 d測(cè)1次血壓，連測(cè)3次，每次每只大鼠測(cè)3遍，血壓均＞130 mmHg為造模成功。最后選用40只成模大鼠行8 w干預(yù)措施。

1.2.2 分組 從造模成功的大鼠中篩選40只，根據(jù)血壓值隨機(jī)分為模型組、纈沙坦組、中藥高劑量組、中藥中劑量組，每組各10只，加上預(yù)留的10只正常組，共50只。

1.2.3 給藥方法 正常組:普通飼料，灌蒸餾水;模型組:灌蒸餾水;纈沙坦組:予纈沙坦14.4 mg·kg－1·d－1(研磨，蒸餾水溶解;成人劑量的10倍);澤瀉湯加味方高劑量組:予中藥飲片16.2 g·kg－1·d－1(含生藥為 0.81 g/ml，成人劑量的 15 倍);澤瀉湯加味方中劑量組:予中藥飲片10.8 g·kg－1·d－1(含生藥為0.54 g/ml，成人劑量的10倍)。所有實(shí)驗(yàn)大鼠灌胃8 w;除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠繼續(xù)8%高鹽飼料喂養(yǎng)8 w。

1.2.4 血壓測(cè)量 采用無(wú)創(chuàng)性套尾法測(cè)定清醒大鼠收縮壓(SBP)，每次測(cè)量時(shí)記錄3次，取其平均值。測(cè)定前大鼠在38℃恒溫箱內(nèi)預(yù)熱15 min，使尾部血管充分?jǐn)U張，便于準(zhǔn)確測(cè)量。給藥前(0 w)、2 w、4 w、8 w各測(cè)一次血壓，每次服藥后2 h開(kāi)始測(cè)量。

1.2.5 血液指標(biāo)檢測(cè) 治療8 w后，用10%水合氯醛腹腔內(nèi)給藥麻醉，目?jī)?nèi)眥取血約 3 ml，放入肝素鈉管中，離心(4000 r/min，5 min)取血漿，放置 －80℃冰箱備用。用日立7180全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血BUN、血Crea、血β2-MG。

1.2.6 尿中指標(biāo)檢測(cè) 在治療8 w后，將每只大鼠分別置于代謝籠中，收集24 h尿量(自由飲水、禁食)。尿β2-MG用放免儀檢測(cè)。

1.2.7 取材 干預(yù)8 w末，10%水合氯醛腹腔麻醉，并取每只大鼠的雙腎置電子天平稱重，然后把腎組織放入10%甲醛溶液固定保存(石蠟切片備用)。

1.2.8 光鏡觀察腎臟組織病理學(xué)變化 將10%甲醛固定好的腎臟，經(jīng)酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)學(xué)改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組實(shí)驗(yàn)大鼠干預(yù)8 w后，血β2-MG、尿β2-MG的變化纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組與正常組比，血β2-MG無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。正常組與模型組比，尿β2-MG降低，有顯著性差異(P＜0.05);中藥中劑量組與模型組比，尿β2-MG降低，有顯著性差異(P＜0.05);纈沙坦組、中藥高劑量組與模型組比，尿β2-MG有所降低，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠干預(yù)8 w后，血BUN、血Crea的變化 纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組與正常組比，血BUN升高，均有非常顯著性差異(P＜0.01)。纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組與正常組比，血Crea無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血、尿β2-MG水平的變化( ± s，n=10，mg/L)

表1 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血、尿β2-MG水平的變化( ± s，n=10，mg/L)

與模型對(duì)照組比較:1)P＜0.05

-MG正常對(duì)照組 0.120±0.04216 0.116±0.1031)組別 血β2-MG 尿β2模型對(duì)照組 0.120±0.06325 0.226±0.164纈沙坦組 0.140±0.05164 0.153±0.113中藥高劑量組 0.100±0.06667 0.154±0.095中藥中劑量組 0.120±0.06325 0.119±0.1041)

表2 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血BUN、血Crea的變化( ± s，n=10)

表2 各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，血BUN、血Crea的變化( ± s，n=10)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.01

組別 BUN(mmol/L) Crea(μmol/L)7.614±1.12928 36.800±10.37947模型對(duì)照組 12.407±1.718761) 35.300±5.27152纈沙坦組 11.972±3.108551) 32.600±7.57481中藥高劑量組 11.989±2.465441) 32.000±4.73756中藥中劑量組 11.754±1.692441)正常對(duì)照組35.000±6.59966

3 討論

β2-MG是由100個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，分子量為11800，人體內(nèi)幾乎所有有核細(xì)胞都能合成。它存在于淋巴細(xì)胞表面，白細(xì)胞、血小板、上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞膜上，同時(shí)存在于血清、腦脊液、尿液等體液中。它主要有人體淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，所以當(dāng)人體淋巴細(xì)胞被激活時(shí)，合成β2-MG明顯增多，在細(xì)胞損傷時(shí)，便以游離的形式釋放于體液中。正常人體內(nèi)β2-MG含量較為恒定，在通過(guò)腎臟循環(huán)時(shí)經(jīng)腎小球?yàn)V過(guò)并由腎小管重吸收和降解，是反映腎臟功能的較理想的內(nèi)物質(zhì)〔4～6〕。當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)功能下降時(shí)，血β2-MG水平上升，故血β2-MG是測(cè)定腎小球?yàn)V過(guò)功能減退的一個(gè)極好標(biāo)志;尿β2-MG絕大部分在近端小管被重吸收，故尿中含量極微，如血中含量正常，尿中含量增多，則說(shuō)明近端腎小管重吸收功能受損〔7〕。目前，許多研究已經(jīng)證實(shí):血BUN、血Crea是反映中晚期腎功能損害的指標(biāo);Viberti〔8〕的研究表明，Crea出現(xiàn)異常時(shí)，腎小球?yàn)V過(guò)率已低于50 ml/min，而腎小球?yàn)V過(guò)率＞80 ml/min時(shí)，β2-MG即開(kāi)始出現(xiàn)異常。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:(1)在高鹽高血壓大鼠腎損害的早期，尿β2-MG有明顯升高，但是血β2-MG無(wú)明顯變化。(2)在高鹽高血壓大鼠腎損害的早期，血BUN、血Crea無(wú)明顯改變;纈沙坦組、中藥中劑量組、中藥高劑量組、模型組的血BUN升高可能與進(jìn)食高鹽有關(guān)。提示尿β2-MG對(duì)高鹽高血壓大鼠早期腎損害的診斷比血β2-MG特異性強(qiáng)。研究證實(shí)〔2〕，高血壓腎損害時(shí)，腎小管損傷出現(xiàn)時(shí)間明顯早于腎小球損傷，且程度亦較重。臨床上，原發(fā)性高血壓腎損害最早出現(xiàn)腎小管功能障礙，也佐證了這一觀點(diǎn)。

總之，對(duì)高鹽高血壓大鼠早期腎損害的診斷，尿β2-MG比血β2-MG更敏感;并且尿β2-MG較常規(guī)的腎功能檢查能更早地發(fā)現(xiàn)腎功能的異常改變，從而為臨床診斷原發(fā)性高血壓早期腎損害提供可靠的檢測(cè)手段。

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