阿托伐他汀對(duì)HTL導(dǎo)致大鼠血管內(nèi)皮功能損傷的保護(hù)作用

畢艷穎 (長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

〔2011-05-01收稿 2011-11-11修回〕

動(dòng)脈粥樣硬化是一種內(nèi)皮功能失調(diào)相關(guān)的炎癥性疾病，其發(fā)生、發(fā)展與內(nèi)皮功能、炎癥因子及多種體液因素之間的相互作用有關(guān)，內(nèi)皮功能障礙是動(dòng)脈粥樣硬化的始動(dòng)環(huán)節(jié)。許多心血管疾病危險(xiǎn)因素可導(dǎo)致內(nèi)皮功能損害，內(nèi)皮功能損害又常伴發(fā)和加重心血管疾病。阿托伐他汀除了降脂作用外，還有非調(diào)脂作用，如抑制炎癥反應(yīng)、影響平滑肌細(xì)胞增殖、干擾血小板聚集、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、改善血管內(nèi)皮功能等。因此，本文采用外源性同型半胱氨酸硫內(nèi)酯(HTL)誘導(dǎo)在體大鼠血管損傷模型，觀察阿托伐他汀對(duì)其的保護(hù)作用，并初步探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 50只Wistar大鼠，雌雄各半，體重170～190 g。阿托伐他汀、HTL、乙酰膽堿(ACh)、苯腎上腺素(Phe)、硝普鈉(SNP)均為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品。丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSHPx)、血脂檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程公司。內(nèi)皮素(ET)和降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)檢測(cè)采用放射免疫法(試劑盒購(gòu)自解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所)。阿托伐他汀用10%阿拉伯樹(shù)膠混懸液溶解。

1.2 試驗(yàn)方法 50只大鼠隨機(jī)分為五組，每組10只。①正常對(duì)照組:予生理鹽水0.1 ml·kg－1·d－1灌胃;②阿托伐他汀對(duì)照組:溶解于10%阿拉伯樹(shù)膠的阿托伐他汀40 mg·kg－1·d－1灌胃;③HTL損傷組:溶解于生理鹽水中的HTL 50 mg·kg－1·d－1灌胃;④阿托伐他汀低劑量治療組:HTL 50 mg·kg－1·d－1+ 阿托伐他汀 10 mg·kg－1·d－1灌胃;⑤阿托伐他汀高劑量治療組:HTL 50 mg·kg－1·d－1+阿托伐他汀40 mg·kg－1·d－1灌胃。各組均灌胃8 w，每周測(cè)體重，按體量調(diào)整藥量。大鼠灌胃8 w后，禁食12 h，腹腔注射3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，從頸總動(dòng)脈插管，收集新鮮全血，于4℃靜置1 h后，3000 r/min離心10 min，取上層血清標(biāo)本，按相應(yīng)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)及相關(guān)要求操作，測(cè)定 MDA、NO、ET、CGRP含量及SOD的活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均±s表示，兩樣本均數(shù)組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 阿托伐他汀對(duì)血管內(nèi)皮損傷大鼠血漿中NOS、CGRP、ET水平的影響 HTL損傷組血清NOS及CGRP明顯降低，ET明顯升高，與正常對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);阿托伐他汀低、高劑量治療組的NO及CGRP含量明顯升高，ET明顯降低。見(jiàn)表1。

表1 阿托伐他汀對(duì)血管內(nèi)皮損傷大鼠血漿中NOS、CGRP、ET水平的影響(n=6，±s)

表1 阿托伐他汀對(duì)血管內(nèi)皮損傷大鼠血漿中NOS、CGRP、ET水平的影響(n=6，±s)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與HTL損傷組比較:3)P ＜0.05，4)P ＜0.01;下表同

組別 NOS(μmol/L) CGRP(mg/L) ET(pg/ml)25.74±2.04 77.87±1.31 49.29±0.75阿托伐他汀對(duì)照組 25.89±1.69 77.94±9.24 49.34±9.98 HTL損傷組 11.14±1.032) 60.42±1.192) 68.44±0.841)阿托伐他汀低劑量組 12.98±5.83) 61.18±5.83) 67.49±0.493)阿托伐他汀高劑量組 24.63±1.464) 72.03±1.64) 60.43±0.844)正常對(duì)照組

2.2 阿托伐他汀對(duì)血管內(nèi)皮損傷大鼠氧化應(yīng)激的影響 與正常對(duì)照組相比，HTL損傷組血清MDA、GSH-Px含量明顯增加，而SOD活性明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)。與HTL損傷組比較，阿托伐他汀治療組的血清MDA含量顯著降低(P＜0.05)，SOD活性顯著提高，GSH-Px活性顯著降低(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 對(duì)血管內(nèi)皮損傷大鼠血清MDA、SOD及GSH-Px含量的影響(n=10，±s)

表2 對(duì)血管內(nèi)皮損傷大鼠血清MDA、SOD及GSH-Px含量的影響(n=10，±s)

組別 SOD(nU/ml)MDA(nmol/L/ml)GSH-Px(U/L)385.5 ±3.8 4.6±0.2 45.8±12.8阿托伐他汀對(duì)照組 376.1±2.6 4.6±0.2 45.3±14.2 HTL損傷組 227.5±10.12) 6.6±1.22) 40.2±12.01)阿托伐他汀低劑量組 234.9±2.53) 5.6±0.53) 42.1±11.03)阿托伐他汀高劑量組 366.1±2.64) 4.3±0.24) 4.5±9.04)正常對(duì)照組

3 討論

阿托伐他汀10、40 mg/kg與HTL共同灌胃時(shí)，可呈濃度依賴(lài)性減輕HTL對(duì)血管內(nèi)皮依賴(lài)性損傷(EDR)，HTL在抑制血管EDR的同時(shí)，也降低了血清中的NO含量，所以HTL損傷EDR的作用可能與干擾NO的合成或釋放有關(guān)。而阿托伐他汀在拮抗HTL對(duì)EDR抑制的同時(shí)維持了血清中NO的含量，說(shuō)明阿托伐他汀抗HTL對(duì)EDR的損傷作用可能與促進(jìn)NO的合成或釋放有關(guān)。NO是最具代表性的內(nèi)源性血管舒張因子，CGRP也具有很強(qiáng)的擴(kuò)張血管和細(xì)胞保護(hù)作用，參與機(jī)體損傷中的自穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)。ET是較強(qiáng)的縮血管物質(zhì)〔1〕，MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的共同產(chǎn)物，細(xì)胞中MDA的量常可反映機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化程度，間接反映心肌細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度和細(xì)胞損傷的程度，因此MDA是評(píng)價(jià)心肌缺血損傷的較好指標(biāo)之一〔2〕。SOD能清除氧自由基，體內(nèi)的氧自由基可以轉(zhuǎn)變?yōu)榱u自由基，后者活性更強(qiáng)，能引起細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能更大的損傷，SOD作為超氧離子清除劑作用極為重要〔3，4〕。而GSH-Px是生物機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶，GSH-Px可以消除機(jī)體內(nèi)的過(guò)氧化氫及脂質(zhì)過(guò)氧化物，阻斷活性氧自由基對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷，是生物體內(nèi)重要的活性氧自由基清除劑，它以硒代半胱氨酸(Sec)的形式發(fā)揮作用，以谷胱甘肽(GSH)為還原劑分解體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化物，因而可防止細(xì)胞膜和其他生物組織免受過(guò)氧化損傷〔5〕。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，HTL灌胃大鼠8 w后，可導(dǎo)致大鼠血清中NO水平降低、MDA濃度增加、SOD與GSH-Px活性降低;而阿托伐他汀顯著改善了HTL所致NO濃度的降低及MDA水平的升高，保護(hù)了SOD與GSH-Px的活性，提示阿托伐他汀的保護(hù)作用可能與抑制HTL觸發(fā)的氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，表明阿托伐他汀對(duì)HTL引起的在體大鼠血管內(nèi)皮功能的損傷有顯著保護(hù)作用;其機(jī)制可能與其降低體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)、維持NO水平有關(guān)。而此保護(hù)作用不依賴(lài)其降血脂作用。

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