老年骨肉瘤組織中MMP-7和VEGF的表達(dá)及其意義

吳同申 孟 彥 (濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院脊柱外科，山東 濟(jì)寧 272029)

老年骨肉瘤臨床較為少見，但其臨床表現(xiàn)的生物學(xué)行為常為進(jìn)展性，即預(yù)后較差。而且新近研究表明老年骨肉瘤生長(zhǎng)過程常依賴于血管生成，且血管生成作用明顯增強(qiáng)〔1〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一大類鋅依賴性內(nèi)肽酶家族，在腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中起重要作用，而且參與腫瘤血管生成〔2〕。MMP-7作為重要成員，與腫瘤進(jìn)展和血管形成具有重要關(guān)系。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是最早發(fā)現(xiàn)的血管內(nèi)皮促進(jìn)因子，能促進(jìn)腫瘤中新生血管形成，并在腫瘤生長(zhǎng)中有重要促進(jìn)作用。CD105作為血管內(nèi)皮新生的有效標(biāo)志物，特異性強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)老年骨肉瘤術(shù)后標(biāo)本中MMP-7、VEGF和CD105蛋白表達(dá)，探討其關(guān)系及臨床意義，以期為研究老年骨肉瘤患者生物學(xué)行為提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集我院、山大大學(xué)齊魯醫(yī)院、山東大學(xué)第二醫(yī)院2006年1月至2009年12月老年骨肉瘤患者術(shù)后存檔蠟塊90例為骨肉瘤組，患者年齡60～79(平均69.1)歲，其中男50例，女40例。納入均經(jīng)兩位病理科主任醫(yī)師確診，并符合WHO關(guān)于骨肉瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):①手術(shù)前進(jìn)行放、化療;②合并其他器官惡性腫瘤;③伴有嚴(yán)重內(nèi)臟器官疾病。同時(shí)選取50例老年骨性病變組織作為對(duì)照組，患者年齡60～80(平均68.6)歲，其中男30例，女20例。

1.2 MMP-7、VEGF和 CD105蛋白檢測(cè) MMP-7、VEGF和CD105均購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)SP法檢測(cè)蛋白表達(dá)，嚴(yán)格按說明書操作，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) MMP-7和VEGF陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒，每張切片觀察10個(gè)具有代表性的視野，取陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥25%陽(yáng)性，以＜25%為陰性。CD105免疫組化結(jié)果的判定:以微血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)染色呈棕黃色顆粒者為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，確定棕色染色的內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞叢為一個(gè)血管，先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內(nèi)血管密度最高處，即熱點(diǎn)處。再在高倍鏡下記錄3個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均數(shù)(MVD)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS 6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者M(jìn)MP-7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)和MVD值比較 骨肉瘤組 MMP-7〔65例(72.22%)vs13例(26.00%)，P ＜0.0001〕、VEGF陽(yáng)性表達(dá)〔70例(77.78%)vs24例(48.00%)，P=0.0003〕和 MVD 值〔27.57±4.58 vs 12.35±3.43，P=0.0006〕明顯高于對(duì)照組。

2.2 MMP-7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)和MVD值與骨肉瘤不同臨床病理指標(biāo)的關(guān)系 MMP-7和VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率及MVD值均與腫瘤直徑、軟組織浸潤(rùn)及Ennecking分期密切相關(guān)(P＜0.05)。見表1。

表1 MMP-7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率〔n(%)〕和MVD值(±s)與骨肉瘤臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

表1 MMP-7、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率〔n(%)〕和MVD值(±s)與骨肉瘤臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

臨床病理 n MMP-7 P值 VEGF P值 MVD P值腫瘤直徑(cm)≤4 4125(60.98)0.029328(68.29)0.0477 24.10±4.640.0283＞4 4940(81.63) 42(85.71) 30.64±3.54軟組織浸潤(rùn)無(wú) 4829(60.42)0.007533(68.75)0.0276 23.46±4.470.0128有 4236(85.71) 37(88.10) 31.56±4.76 Ennecking分期I+IIa 4426(59.09)0.006529(65.91)0.0081 25.47±4.350.0396 IIb+III 4639(84.78) 41(89.13)30.01±3.43

2.3 骨肉瘤組織MMP-7、VEGF表達(dá)和MVD值的關(guān)系 經(jīng)相關(guān)分析，MMP-7和VEGF表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.43，P=0.0295)，MMP-7表達(dá)和MVD呈正相關(guān)(r=0.41，P=0.0298)，VEGF表達(dá)和MVD呈正相關(guān)(r=0.49，P=0.0126)。

3 討論

老年骨肉瘤患者與年輕患者并不完全相同，主要表現(xiàn)為部位不同及并發(fā)癥的出現(xiàn)，而且老年人在手術(shù)過程中，較難對(duì)腫瘤組織切除干凈。因此腫瘤內(nèi)可能存在旺盛的血管新生及相關(guān)的影響因素。血管新生在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展中有重要意義，血管生成使腫瘤能夠獲得足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)〔3〕。VEGF是目前研究最多的促血管生成因子，對(duì)腫瘤基質(zhì)血管形成及腫瘤生物學(xué)行為均有重要影響〔4〕。而血管新生標(biāo)記物是研究腫瘤血管新生的基礎(chǔ)。CD105是一種與增生有關(guān)的內(nèi)皮細(xì)胞膜成分的抗原，又名Endoglin，是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β受體復(fù)合物成分之一，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中有豐富表達(dá)，可以成功標(biāo)記腫瘤中新生毛細(xì)血管，特異性明顯優(yōu)于CD34、F8因子等血管內(nèi)皮標(biāo)記物。相關(guān)研究認(rèn)為CD105在增殖的腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)較高，而在正常血管中表達(dá)較少〔5〕。MMPs是一組結(jié)構(gòu)上具有極大同源性、能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)蛋白的內(nèi)肽酶總和，因含有金屬離子(鋅、鈣)而得名〔6〕。MMP-7是MMPs家族中的重要成員，因能降解基底膜和ECM的多種成分而倍受關(guān)注，近來其在腫瘤中的作用引起學(xué)者關(guān)注〔7〕。

本文結(jié)果顯示MMP-7、VEGF和CD105標(biāo)記的血管密度在骨肉瘤中高表達(dá)，提示三者在腫瘤發(fā)生和進(jìn)展中具有重要作用。MMP-7可通過調(diào)節(jié)ECM合成與降解代謝而影響細(xì)胞之間、細(xì)胞與基質(zhì)之間的信息傳遞，調(diào)節(jié)細(xì)胞分化及遷移，進(jìn)而可能影響腫瘤生物學(xué)行為〔7〕。在骨肉瘤發(fā)生發(fā)展過程中，瘤細(xì)胞可分泌大量的MMP-7，其不僅能降解Ⅳ型膠原，影響腫瘤細(xì)胞間黏附作用，還可以降解ECM，促進(jìn)骨肉瘤向周圍軟組織浸潤(rùn)。本結(jié)果顯示MMP-7、VEGF和MVD之間具有正相關(guān)性，提示MMP-7、VEGF和MVD具有正向調(diào)節(jié)作用，協(xié)同參與老年骨肉瘤進(jìn)展;亦提示MMP-7可能作為上游蛋白，調(diào)節(jié)VEGF表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤MVD增多，促進(jìn)腫瘤血管形成〔8〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MMP-7、VEGF和MVD均與腫瘤體積、浸潤(rùn)及Ennecking臨床分期密切相關(guān)，由于浸潤(rùn)及臨床分期均與骨肉瘤的預(yù)后相關(guān)，因此，聯(lián)合檢測(cè)MMP-7、VEGF和MVD可能對(duì)判斷老年骨肉瘤預(yù)后有一定價(jià)值，即MMP-7、VEGF和MVD高表達(dá)的患者預(yù)后差。

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