HPLC 法測定醋酸潑尼松龍微乳中醋酸潑尼松龍的含量

呂青志，李珂珂，劉德勝，張曉帆（濱州醫學院藥學院，山東煙臺 264003）

醋酸潑尼松龍（Prednisolone acetate，PA）為腎上腺皮質激素類藥物，具有抗炎、抗過敏和抑制免疫等多種藥理作用，臨床主要用于活動性風濕、類風濕性關節炎的治療。目前，國內該藥的制劑形式有醋酸潑尼松龍注射液、醋酸潑尼松龍片和醋酸潑尼松龍滴眼液。由于長期全身給藥易引起庫欣綜合征、并發感染等不良反應，患者順應性較差[1]。為此，筆者將醋酸潑尼松龍制備成微乳經皮給藥制劑，以提高其經皮滲透速率和經皮滲透量，維持病變部位較高的藥物濃度，以減少全身治療引起的不良反應，提高患者的順應性[2，3]。同時，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法測定微乳中醋酸潑尼松的含量，藥物與輔料及溶劑得到了良好的分離。

1 儀器與試藥

600-2489型HPLC儀（美國waters公司）；ODS-2 C18柱（大連依利特有限公司）；EL-204型高精度電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；SH23-2型恒溫磁力攪拌器（上海梅穎浦儀器儀表制造公司）；KQ5200DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

醋酸潑尼松龍（河南利華制藥有限公司，含量：99.4%，批號：K07A20091003）；醋酸潑尼松龍對照品（中國食品藥品檢定研究院）；醋酸潑尼松龍微乳（濱州醫學院藥學院自制）；空白微乳（濱州醫學院藥學院自制）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS-2 C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-水（65∶35）；檢測波長：243 nm；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25 ℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液的制備 精密稱取醋酸潑尼松龍對照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取醋酸潑尼松龍微乳0.1 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲破乳（40 W，15 min），甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白微乳的制備 精密稱取空白微乳0.1 g，置于100 mL容量瓶中，加甲醇超聲破乳（40 W，15 min），甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統適用性試驗

分別制備一定濃度的醋酸潑尼松龍對照品溶液、空白微乳破乳液和醋酸潑尼松龍微乳破乳液，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，色譜見圖1。由圖1可見，醋酸潑尼松龍各組分間分離良好，對照品的保留時間約為6.6 min，空白微乳只在3 min之前有色譜峰，表明輔料和溶劑對藥物含量的測定無干擾。

2.4 線性關系考察

精密量取對照品貯備液適量，加甲醇稀釋成濃度為0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 μg?mL－1的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣分析。以濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程A＝44 755C－5 710.2（r＝0.999 9）。結果表明，醋酸潑尼松檢測濃度在0.5～10.0μg?mL－1范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖A.醋酸潑尼松龍對照品；B.空白微乳；C.醋酸潑尼松龍微乳；1.醋酸潑尼松龍Fig 1 HPLC chromatogramsA.prednisolone acetate control；B.blank microemulsion；C.prednisolone acetate microemulsion；1.prednisolone acetate

2.5 精密度試驗

取“2.2”項下的對照品貯備液（1.0、3.0、10.0 μg?mL－1）適量，各重復進樣5次，測得日內精密度和日間精密度，結果見表1。由表1可知，3個濃度的日內、日間精密度RSD均＜2%，表明該方法精密度良好。

表1 日內和日間精密度試驗結果（n＝5）Tab 1 Result of intra-day and inter-day RSD tests

2.6 穩定性試驗

取“2.2”項下的對照品貯備液（3.0 μg?mL－1）適量，室溫放置，按“2.1”項下色譜條件分別于0、2、4、6、8、12、24 h進樣測定。結果，RSD＝1.28%，表明樣品在24 h內穩定性良好。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取醋酸潑尼松龍微乳40 mg（約相當于醋酸潑尼松龍0.4 mg），共9份，置于100 mL容量瓶中，按照樣品中醋酸潑尼松量的80%、100%、120%分別精密加入對照品貯備液（醋酸潑尼松龍的濃度為0.2 mg?mL－1）1.6、2.0、2.4 mL，按“2.2”項下方法制備溶液，經0.22 μm微孔濾膜濾過，進樣分析，加樣回收率試驗結果見表2。

2.8 樣品含量測定

取3批（每批5份）醋酸潑尼松龍微乳樣品適量，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，經0.22 μm微孔濾膜濾過，進樣分析，記錄峰面積并根據標準曲線計算供試品中醋酸潑尼松龍的含量（標示量%），結果見表3。

2.9 穩定性試驗

取3批醋酸潑尼松龍微乳樣品灌封于安瓿中，室溫（25℃）放置，于0、10、20、30 d取樣，觀察外觀，測定放置前、后的藥物含量，結果見表4。

表2 加樣回收率試驗結果Tab 2 Results of recovery tests

表3 樣品含量測定結果（標示量%）Tab 3Results of content determination（labeled amount%）

表4 穩定性試驗結果（±s，n＝5）Tab 4Result of stability test（±s，n＝5）

表4 穩定性試驗結果（±s，n＝5）Tab 4Result of stability test（±s，n＝5）

時間/d 0 10 20 30外觀無色、透明無色、透明無色、透明無色、透明含量/%100.2±1.5 99.6±0.7 99.3±1.3 98.9±1.1黏度/mm2·s－1 7.19±0.13 7.24±0.32 7.33±0.45 7.34±0.37

由表4可知，室溫保存30 d時樣品色澤、澄明度未變，無分層、絮凝現象，含量無顯著變化，表明穩定性較好。

3 討論

3.1 破乳方法的選擇

微乳含量的測定涉及破乳提取藥物的過程，破乳的方法有物理法和化學法。物理法包括加熱和高壓電破乳，前者難以在短時間內破乳，后者不適于實驗室應用。本研究采用化學破乳法，通過加入破乳劑破壞乳化劑或界面膜改變分散體系的界面性質以達到破壞微乳結構的目的[4]。采用甲醇作為破乳劑，所得溶液澄清透明，且不干擾測定，符合檢驗要求。

3.2 分析方法的選擇

經試驗發現，采用紫外分光光度法進行含量測定時，微乳成分吐溫80及油酸在醋酸潑尼松龍的最大吸收波長243 nm處有吸收，干擾醋酸潑尼松龍含量的測定。因此，筆者采用HPLC法測定。

3.3 流動相的選擇

參照有關文獻[5～7]，選擇甲醇-水作為流動相，對流動相的不同比例進行篩選。結果發現，甲醇-水（65∶35）為最佳流動相，輔料和溶劑對醋酸潑尼松龍無干擾，保留時間在6.6 min，峰形較好。

綜上所述，該方法具有靈敏度高、專屬性強、回收率高的特點，能夠排除輔料的干擾，可用于醋酸潑尼松龍微乳的含量測定。

[1]王 馨，黃 華.醋酸潑尼松龍固體脂質納米粒的試制[J].中國醫藥工業雜志，2007，38（7）：499.

[2]Chen HB，Chang XL，Weng T，et al.A study of microemulsion systems for transdermal delivery of triptolide[J].J Control Rel，2004，98（3）：427.

[3]Zhu W，Yu A，Wang W，et al.Formulation design of microemulsion for dermal delivery of penciclovir[J].Int J Pharm，2008，360（1-2）：184.

[4]董武軍，劉玉玲.HPLC法測定黃芩素靜脈注射亞微乳劑的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2 121.

[5]林思榮.HPLC法測定醋酸潑尼松龍注射液的含量[J].海峽藥學，2008，20（12）：43.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：847.

[7]常 明，李 靖，李淑芳.高效液相色譜法同時測定強氯滴眼液中 2組分的含量[J].中國藥房，2005，16（14）：1 106.