荷移分光光度法測定腦脈康片中煙酸占替諾的含量

趙桂芝（遼寧醫學院，遼寧錦州 121000）

煙酸占替諾是腦脈康制劑中的有效成分，是小動脈平滑肌外周血管擴張劑，適用于治療腦血管障礙性疾病、冠心病、狹心癥等。目前對于煙酸占替諾含量測定分析方法的文獻報道很少，《中國藥典》2010年版[1]中采用高效液相色譜（HPLC）法進行含量測定。筆者利用煙酸占替諾與紅紫素之間的電荷轉移反應，即兩者在乙醇-水介質中發生荷移反應，形成穩定的1∶1型絡合物，再采用分光光度法來測定其含量。此方法與HPLC法相比，反應條件簡單、方便快捷，為煙酸占替諾的含量測定提供了新方法，且所得含量結果與文獻[1]方法結果一致。

1 儀器與試藥

7590型UV-VIS單光束自動掃描分光光度計（山東高密分析儀器廠）；752S紫外分光光度計（上海棱光技術有限公司）；HH-S數顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市醫療儀器廠）；FA1104N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）。

腦脈康（錦州黑龍藥業有限公司，批號：20090526、20091029，規格：每片100 mg）；煙酸占替諾對照品（錦州制藥二廠，批號：20071112，純度：99.9%）；紅紫素（固安恒業精細化工有限公司，批號：20050522）；本試驗所用試劑均為分析純。

2 方法[2]與結果

2.1 溶液制備

2.1.1 1×10－3mol·L－1紅紫素乙醇液：準確稱取紅紫素0.051 24 g，加入乙醇，充分溶解，定容于200 mL容量瓶中，備用。

2.1.2 1.0 g·L－1煙酸占替諾水溶液：準確稱取煙酸占替諾對照品100 mg，加入純水，充分溶解，定容于100 mL容量瓶中，備用。

2.2 反應原理

電荷轉移反應發生在電子給予體和電子接受體之間，煙酸占替諾分子內電子富集，可作為電子給予體，而紅紫素是一個很強的平面π電子受體，可作為電子接受體，二者可形成n-π型絡合物，發生電荷的轉移。應用摩爾比法和等摩爾連續變換法測得紅紫素與煙酸占替諾反應生成的荷移絡合物的組成比為1∶1。反應過程如圖1：

圖1 荷移反應式Fig 1 Equation of charge transfer reaction

2.3 檢測方法

準確量取1.0 g·L－1煙酸占替諾適量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，加入紅紫素乙醇液2.5 mL，用乙醇與水的混合液為溶劑，將反應液稀釋至刻度（控制乙醇與水的體積比為8∶2），搖勻，在25℃的水浴中恒溫10 min。取出后以流水冷卻，以相應的試劑空白（體積比為8∶2的乙醇-水混合液）作參比，用1 cm比色皿在538 nm波長處測吸光度值，測定時間為反應開始后10～60 min內。

2.4 反應條件的選擇

2.4.1 吸收光譜。以試劑空白作參比，取紅紫素乙醇液與“2.3”項下荷移絡合物在分光光度計上掃描，測得荷移絡合物的λmax＝538 nm，紅紫素的λmax＝485 nm，煙酸占替諾在可見光區沒有吸收，故后續試驗選定荷移絡合物的測定波長為538 nm，詳見圖2。

圖2 紫外吸收光譜圖1.紅紫素乙醇液；2.荷移絡合物Fig 2 UV absorption spectrum1.purpurin alcohol solution；2.charge transfer complexes

2.4.2 反應時間的選擇。按照“2.3”項下方法制備1組溶液，分別于反應不同時間（3、5、10、15、20、25、30、40、60、120 min）取反應液測定其吸光度值，結果分別為0.546、0.611、0.624、0.626、0.626、0.627、0.626、0.627、0.630、0.793。顯示：反應液的吸光度值在反應開始后的10～60 min內穩定，因此在反應開始的10 min后即可進行吸光度值的測定，控制測定時間在10～60 min內。

2.4.3 反應溫度的選擇。按照“2.3”項下方法制備7份溶液，其余條件不變，分別將其放入不同溫度（15、20、25、30、35、40、45℃）的恒溫水浴中恒溫10 min，反應完全后取出以流水冷卻終止其反應，然后測定其吸光度值，結果分別為0.529、0.633、0.633、0.631、0.605、0.489、0.490。表明當反應溫度在 20～30℃時，反應液的吸光度值最高。因此，確定反應的最佳溫度為25℃。

2.4.4 試劑用量的選擇。在其余反應條件不變的情況下，改變紅紫素的用量，分別于100 mg·L－1的煙酸占替諾水溶液中加入不同摩爾濃度（1.0×10－4、2.0×10－4、3.0×10－4、4.0×10－4、5.0×10－4、6.0×10－4mol·L－1）的紅紫素乙醇溶液，制備系列反應液，然后測定其吸光度值，結果分別為0.179、0.252、0.299、0.399、0.655、0.648。表明當紅紫素的摩爾濃度為 5.0×10－4mol·L－1時，反應進行完全。當試劑用量超過此用量時，由于背景顏色的加深，吸光度值反而隨著顏色的加深而略有降低。

2.4.5 溶劑的選擇。分別用甲醇、乙醇、異丙醇、三氯甲烷、水與丙酮作溶劑，加入到反應體系中，制備系列反應液，然后測定吸光度值。結果顯示，以乙醇與水混合液作溶劑，反應液的吸光度值高，且通過進一步的試驗證明，混合液中乙醇與水的體積比為8∶2時，此反應體系的吸光度值最高，故選用乙醇與水體積比為8∶2的混合液作溶劑。因煙酸占替諾易溶于水，反應體系為水溶液的應調節酸堿度，但紅紫素加入酸堿后即變色，所以整個反應體系盡管用水作溶劑，也無須調節酸堿度。

2.5 方法的重復性

按“2.3”項下方法制備6份平行溶液（濃度為100 mg·L－1），于試驗確定的最佳條件下進行反應。結果，RSD＝0.98%（n＝6），表明方法的重復性良好。

2.6 比爾定律線性范圍

按上述試驗確定的條件進行反應，分別向一系列紅紫素乙醇液中加入不同濃度（20、40、60、80、100、120、140、160、180、200 mg·L－1）的煙酸占替諾水溶液，測定其吸光度（y）值。結果，煙酸占替諾檢測濃度（c）在20～140 mg·L－1范圍內與吸光度呈線性關系，其回歸方程為y＝2.101 1c+0.049 8（r＝0.998 9）。表觀摩爾吸光系數為2.46×103L·mol－1·cm－1，桑德爾靈敏度為0.176 7 μg·cm－2，此數值表明此反應靈敏度較高。

2.7 干擾試驗

在上述條件下，考察了藥物制劑中常見輔料對煙酸占替諾測定的干擾情況。制備6份反應液，分別向反應液中加入相當于煙酸占替諾含量1 500倍量的萄葡糖、1 000倍量的蔗糖、1 000倍量的谷氨酸、1 000倍量的乳糖、50倍量的淀粉、20倍量的糊精等輔料，然后測定其吸光度值，結果顯示各反應液吸光度值基本不變，說明上述常見藥物輔料對主藥測定不造成干擾。

2.8 回收率試驗

按照檢測方法，取已測得實際含量的適量樣品6份置于5 mL比色管中，制備反應溶液，然后加入不同濃度煙酸占替諾水溶液，測定其吸光度值，計算回收率，詳見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測定

取腦脈康片10片，將其充分研細，精密稱定，然后準確加入100 mL純水溶解、定容、過濾，取濾液10 mL稀釋至100 mL（濃度約為1.0 g·L－1）。取適量（≤0.7 mL）置于5 mL比色管中，制備反應液，分別以本法和文獻法[1]進行含量測定，結果2種方法含量結果一致，分別為101.9%和101.8%（批號20090526）、100.4%和101.2%（批號20091029）。

3 討論

由于煙酸占替諾結構中具有含孤對電子的N原子，此結構的物質可與缺電子的醌式結構的物質發生電荷轉移反應，使反應體系的光譜發生紅移，顏色發生改變。根據這一特點，可利用缺電子的醌式結構物質與具有富含孤對電子的物質發生反應，用以測定富含孤對電子物質的含量。但應注意此反應體系中反應時間的控制與試劑的有效選擇，因不同試劑可致反應的靈敏度有很大不同。

本法與文獻[1，3]方法相比，具有成本低、操作簡便、快速、靈敏、準確的特點，從而提供了一種快速測定煙酸占替諾含量的新方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：859.

[2]趙桂芝，李華侃.荷移分光光度法測定煙胺羥丙茶堿[J].藥物分析雜志，2002，22（1）：32.

[3]王澤民，康 葵，馮 梅.當代結構藥物全集[M].北京：北京科技出版社，1993：1 446.