美洲大蠊提取物對大鼠膀胱黏膜損傷后修復的影響

謝 波 舒 彥 梁 臻 陳建和 程一寧 張心男

浙江省立同德醫院泌尿外科 杭州 310000

因膀胱黏膜損傷導致的頑固性膀胱刺激癥臨床上并非少見，其中化療藥物所導致的膀胱黏膜損傷，引起一些并發癥，明顯降低了患者依從性[1]。美洲大蠊屬昆蟲綱，蜚蠊目，蜚蠊科，俗稱蟑螂[2]。美洲大蠊提取物對于惡性血液病口腔潰瘍、胃十二指腸潰瘍、潰瘍性結腸炎、皮膚皸裂、糖尿病皮膚潰瘍、頑固性鼻出血、鼻中隔糜爛均有良好療效，并得到廣泛應用，但與膀胱黏膜損傷的相關研究較少[3-5]。本研究旨在觀察美洲大蠊提取物對膀胱黏膜損傷后上皮愈合的影響，從而為臨床應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 清潔級健康雄性Wistar大鼠30只，購于浙江中醫藥大學實驗動物中心，體質量200～250g。美洲大蠊提取物（商品名：康復新）購于四川好醫生攀西藥業有限責任公司。熱休克蛋白60、70兔抗鼠多克隆抗體，購于武漢博士德生物工程有限公司。免疫組織化學超敏SP試劑盒購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.2 動物分組 應用隨機數字表法將30只大鼠隨機分成對照組、模型組和治療組，每組10只。

1.3 動物處理 用2%戊巴比妥鈉腹腔內注射法麻醉大鼠（30mg/kg），把3F導管經尿道插入大鼠膀胱，妥當固定后連接好1mL注射器，抽空膀胱尿液；各組大鼠均用生理鹽水0.25mL沖洗膀胱3次，并抽空膀胱；對照組再注入生理鹽水0.25mL，模型組和治療組各注入0.1moL/L鹽酸0.25mL，保留2min后抽空；各組再用生理鹽水0.25mL沖洗膀胱3次后并抽空；對照組和模型組各注入0.25mL生理鹽水，治療組注入0.25mL康復新液，均保留30min后拔管。

1.4 標本制作及結果判定 灌注72h后處死全部大鼠，取下新鮮膀胱標本，10%福爾馬林固定，用于石蠟切片的制備。組織切片HE染色光鏡下觀察膀胱黏膜的形態變化和炎性細胞浸潤情況，免疫組化法染色制片后顯微鏡下觀察。采用高壓鍋法修復抗原，SP法免疫組化染色，DAB顯色，蘇木精襯染，以胞質、胞核出現棕黃色為陽性，以細胞無棕黃色或與背景一致的淺棕色為陰性，在400倍光鏡下觀察，隨機挑選10個視野，計算陽性細胞和總細胞數，并計算出陽性細胞率。1.5 統計學方法 使 用SPSS11.0軟件進行統計分析，數據用（±s）表示，多組比較采用方差分析，兩組間比較采用LSD法。

表1 各組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達（±s）

表1 各組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達（±s）

注：與對照組比較，△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.01

組 別n/只熱休克蛋白60熱休克蛋白70對照組模型組治療組10 10 10 0.235±0.045 0.412±0.051△0.268±0.046*0.258±0.051 0.509±0.062△0.293±0.054*

2 結果

2.1 大體病理改變 對照組無明顯改變。模型組膀胱黏膜上皮有廣泛的壞死脫落，可見明顯潰瘍灶，中間被覆白苔，周圍黏膜水腫隆起，上皮可見廣泛的出血點。治療組膀胱黏膜上皮缺損少見，有少量散在小點狀潰瘍，潰瘍表淺，周邊黏膜無明顯水腫。

2.2 顯微鏡下病理改變 對照組無明顯病理改變。模型組可見黏膜嚴重充血、出血、上皮細胞壞死，大量炎性細胞浸潤，黏膜下各層有炎性水腫。治療組為散在小點狀出血，少量炎性細胞浸潤，受損膀胱黏膜表面有一層薄膜覆蓋。

2.3 大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達情況 模型組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達量較對照組顯著增高（P＜0.01），治療組大鼠膀胱組織熱休克蛋白60、70表達量較模型組顯著降低（P＜0.01），見表1。

3 討論

膀胱黏膜損傷是化學性膀胱炎、放射性膀胱炎、腺性膀胱炎、慢性細菌性難治性膀胱炎和間質性膀胱炎等多種膀胱炎癥的病理基礎，可引起尿急、尿頻和膀胱充盈后恥骨上方或會陰部持續疼痛等癥狀，嚴重影響患者的生活質量和身心健康[1]。膀胱黏膜表面葡萄糖氨基聚糖的缺陷是導致膀胱黏膜損傷的病理基礎。葡萄糖氨基聚糖缺陷導致膀胱黏膜通透性增高，減弱了膀胱壁對化學物質的抵御力及修復能力，導致尿液中有毒有害物質進入到膀胱壁內，引發膀胱壁損害[6-7]。現針對膀胱黏膜葡萄糖氨基聚糖的治療僅起到保護黏膜覆蓋物，不能促進膀胱上皮修復，故長期療效不確定，易反復。目前認為修復膀胱上皮，保護黏膜完整性才是療效能夠持久的根本原因，但仍缺乏療效明確的上皮修復藥。

近年來，醫學昆蟲的藥用價值逐漸被認知。美洲大蠊作為藥用的最早記載見于《神農本草經》，以蜚蠊名列為中品，“味咸，寒，生川澤，治血瘀癥堅、寒熱，破積聚，喉咽痹，內寒無子”。歷代本草典籍如《新修本草》、《本草綱目》亦有記載[2]。根據文獻報道，美洲大蠊提取物含有多元醇類、表皮生長因子、黏氨酸、黏糖氨酸及多種氨基酸等活性物質，具有抗炎、消腫、促進細胞增殖和新生肉芽組織增長，加速病損組織修復，加快壞死組織脫落，提高機體免疫功能等作用。

熱休克蛋白又稱應激蛋白，是細胞受各種應激原刺激后誘導產生的一組蛋白，具有維持細胞蛋白穩定、促進細胞生存等功能，其中熱休克蛋白60、70分布廣泛，在應激后產生最為顯著[8-9]。本研究借助熱休克蛋白60、70在炎癥中的表達情況來反映美洲大蠊提取物對受損膀胱黏膜炎癥減輕的作用。本研究證實，美洲大蠊提取物不僅可以從大體上減少膀胱黏膜缺損，減輕炎癥浸潤，也可減少膀胱黏膜熱休克蛋白60、70表達。因此，美洲大蠊提取物可修復損傷的膀胱黏膜，加強膀胱壁的屏障作用，阻止炎癥反應。

[1]Parsons CL.The role of the urinary epithelium in the pathogenesis of interstitial cystitis/prostatitis/urethritis[J].Urolo-gy，2007，69（4 Suppl）:9-16.

[2]焦春香，劉光明，周萍.天然藥物康復新的研究進展[J].時珍國醫國藥，2008，19（11）:2623-2624.

[3]高黎黎，王魯平，李光輝.康復新的臨床新用途[J].中國誤診學雜志，2006，6（7）:1390-1393.

[4]丁娟英，高金星，李德芳.康復新液加維生素E膠丸治療復發性口腔潰瘍療效觀察[J].浙江中西醫結合雜志，2010，20（8）:497-498.

[5]段陽日.康復新液聯合奧美拉唑治療消化性潰瘍96例[J].浙江中西醫結合雜志，2011，21（9）:619-620.

[6]Soler R，Bruschini H，Truzzi JC，et al.Urinary glycosaminoglycans excretion and the effect of dimethyl sulfoxide in an experimental model of non-bacterial cystitis[J].Int Braz J Urol，2008，34（4）:503-511.

[7]Soler R，Bruschini H，Martins JR，et al.Urinary glycosaminoglycans as biomarker for urothelial injury:is it possible to discriminate damage from recovery[J].Urology，2008，72（4）:937-942.

[8]Multhoff G.Heat shock protein 70（Hsp70）:membrane location，export and immunological relevance[J].Methods，2007，43（3）:229-237.

[9]Grundtman C，Kreutmayer SB，Almanzar G，et al.Heat shock protein 60 and immune inflammatory responses in atherosclerosis[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2011，31（5）:960-968.