蒲公英甾醇粗提物抗炎作用研究

劉婧陶，韓 普，劉利本，程 瑤，張雪梅＊

（1.延邊大學農學院動物醫學系，吉林延吉133002；2.永吉縣畜牧業管理局，吉林永吉132200）

蒲公英（Herba Taraxaci）為菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicum Hand-Mazz）的 干 燥 全草，具有清熱解毒、消腫散結、利濕、利尿通淋等功效，用于疔瘡腫痛、乳癰、眼痛目赤、肺癰、濕熱黃疸和熱淋澀痛等癥的治療［1］。現代藥理研究表明，其具有抗氧化、抗菌和抗炎等多種作用［2-4］。蒲公英含有多種有效成分，蒲公英甾醇為其主要有效成分之一［5］。本試驗從體內抗炎角度探討蒲公英甾醇對醋酸致小鼠毛細血管通透性增強，二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的保護作用，為蒲公英甾醇的藥理研究和進一步開發利用提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 蒲公英購于吉林省延吉市延西大藥房。

1.1.2 主要試劑 伊文思藍為北京索萊寶科技有限公司產品；角叉菜膠為Sigma公司產品；醋酸、二甲苯、無水乙醇、乙醚等均為天津市科密歐化學試劑有限公司產品。

1.1.3 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄各半，18g±2 g，Wistar大鼠，200g±20g，均購自延邊大學實驗動物中心。

1.1.4 儀器 RE-52AA旋轉蒸發器為上海亞榮生化儀器廠產品，U-3900紫外-可見分光光度計為日本天美株式會社日立制作所生產，6mm打孔器。

1.2 方法

1.2.1 蒲公英甾醇的提取 蒲公英干燥全草100g粉碎，無水乙醇浸泡過夜，加熱回流，過濾，重復2次，合并濾液，濃縮。100mL／L氫氧化鈉水解，40℃恒溫過夜。乙醚萃取，分離，回收乙醚得到蒲公英甾醇粗提物［6］。

1.2.2 小鼠腹腔毛細血管通透性試驗 小鼠30只，隨機分為模型組，藥物高、中、低劑量組和陽性組，每組5只。藥物組分別給予蒲公英甾醇粗提物750、375、187.5mg／kg，連續灌胃5d，模型組給予同體積生理鹽水，陽性組一次性腹腔注射地塞米松2.5mg／kg。末次給藥后1h各組小鼠尾靜脈注射5mL／L伊文思藍0.2mL／只，并立即腹腔注射6mL／L醋酸0.1mL／10g。20min后處死小鼠，生理鹽水沖洗腹腔，收集洗液，離心，取上清，分光光度計于590nm處測OD值［7］。

1.2.3 二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗 小鼠30只，分組與給藥方法同1.2.2。末次給藥后1h，將二甲苯50μL／只涂于小鼠右耳廓兩面致炎，左耳不涂為對照。30min后處死小鼠，用6mm打孔器分別在小鼠左耳和右耳同一位置打下組織塊，稱重，計算腫脹度。腫脹度=右耳組織塊重-左耳組織塊重［8］。

1.2.4 角叉菜膠致大鼠足趾腫脹試驗 大鼠30只，分組與給藥方法同1.2.2。末次給藥后1h，各組大鼠右后足足趾同一位置注射10g／L角叉菜膠0.1mL／只，分別在注射后0.5、1、2、4、6h測量足趾厚度，計算腫脹率。腫脹率=（致炎后足趾厚-致炎前足趾厚）／致炎前足趾厚［9］。

2 結果

2.1 蒲公英甾醇提取率

100g蒲公英全草中提取到5.36g蒲公英甾醇粗提物，即蒲公英甾醇提取率為5.36%。

2.2 蒲公英甾醇對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

與模型組小鼠相比，蒲公英甾醇粗提物低劑量組和中劑量組腹腔洗液OD值降低但無顯著差異，而高劑量組與模型組相比存在顯著性差異（P＜0.05）。結果表明，蒲公英甾醇對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性有一定抑制作用（表1）。

2.3 蒲公英甾醇對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

與模型組小鼠相比，蒲公英甾醇粗提物低劑量組耳廓腫脹程度減輕但無顯著差異（P＞0.05），而中劑量組與模型組相比存在顯著性差異（P＜0.05），高劑量組與模型組相比存在極顯著性差異（P＜0.01）。結果表明，蒲公英甾醇能夠有效抑制小鼠耳廓腫脹程度（表1）。

2.4 蒲公英甾醇對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響

造模后0.5h和1h，蒲公英甾醇粗提物低、中、高劑量對大鼠足趾腫脹的抑制作用不明顯（P＞0.05）；2h和4h時，低、中、高劑量組能顯著性抑制腫脹程度（P＜0.05）。造模后6h，低、中、高劑量組與模型組比較，對腫脹抑制程度存在極顯著性差異（P＜0.01）。結果表明，蒲公英甾醇能夠抑制由角叉菜膠誘導的大鼠足趾腫脹（表2）。

表1 蒲公英甾醇對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增強和二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響Table 1 The effects of taraxasterol on acetic acid-induced capillary permeability of abdominal cavity and dimethyl benzene-induced ear swelling in mice

表2 蒲公英甾醇對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響Table 2 The effect of taraxasterol on carrageenan-induced rat paw swelling

3 討論

炎癥是動物機體對各種致炎因素及其所引起的損傷產生的防御性反應。其早期為急性炎癥，病理過程一般表現為毛細血管擴張、通透性亢進、滲出和水腫。從炎癥的本質上看，炎癥消除與消滅各種致炎因素，促進損傷組織修復，是一種以防御為主的病理過程，但也會給機體帶來損害和痛苦，嚴重的炎癥反應可危及生命。因此，在醫學理論指導下，抵抗有害性炎癥近年來成為熱門研究課題［10］。

蒲公英是我國重要的傳統中藥，在民間和臨床上具有廣泛的應用，特別是用于多種炎性疾病的治療。本實驗室已證明蒲公英提取物具有明顯的體內外抗炎作用［11-12］，但蒲公英抗炎成分不清。蒲公英甾醇是蒲公英的主要有效成分之一，本試驗從體內抗炎角度探討蒲公英甾醇的體內抗炎作用，從而確定蒲公英抗炎成分，為新藥開發和臨床應用提供理論基礎。試驗結果顯示，蒲公英甾醇對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增強、二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹炎癥反應均有抑制作用。表明蒲公英甾醇對早期炎癥有抑制作用，對慢性炎癥或炎癥后期抗炎效果還有待于研究。

［1］ 路保通，張 鴦，胡新安.蒲公英有效成分提取及其抑菌活性作用［J］.中國獸醫雜志，2008，44（5）：45-47.

［2］ Hu C，Kitts D D.Antioxidant，prooxidant，and cytotoxic activities of solvent-fractionated dandelion（Taraxacum officinale）flower extracts in vitro［J］.J Agric Food Chem，2003，51（1）：301.

［3］ 呂俊華，邱士翠，張連同，等.蒲公英體外抑菌作用研究［J］.時珍國醫國藥，2002，13（4）：215-216.

［4］ Kristo T S，Terdy P P，Simandi B，et al.Efficiency of supercritical fluid extraction for the production of non-volatile terpenoids from Taraxaci radix［J］.Acta Pharm Hung，2001，71（3）：318.

［5］ 姜 寧，宋新波.蒲公英的藥理研究進展［J］.中國中醫藥雜志，2008，6（12）：12-23.

［6］ 龐利蘋，徐雅琴.植物甾醇提純及單體分離工藝的研究進展［J］.中國糧油學報，2010，25（3）：124-128.

［7］ 唐 瓊，朱 玲，楊云霞，等.痛風舒浸膏粉對血液流變性及毛細血管通透性的影響［J］.四川生理科學雜志，2002，24（3）：121-123.

［8］ 郝 偉，李田文，張沈平.濃止喘消咳液的抗炎及調節免疫作用的實驗研究［J］.沈陽醫學院學報，2002，4（1）：19-21.

［9］ 景志杰，牛拴成，張軒萍.化痔靈片對大鼠實驗性炎癥模型的抗炎作用［J］.山西醫科大學學報，2006，37（3）：264-265.

［10］ 陳艷梨.余甘子提取物的抗炎作用研究［J］.國際醫藥衛生導報，2011，17（1）：17-20.

［11］ 平家奇，劉利本，鄒 娟，等.蒲公英提取物體內抗炎作用的實驗研究［J］.延邊大學農學學報，2010，32（1）：52-55.

［12］ Liu L B，Xiong H Z，Ping J Q，et al.Taraxaum officinale protects against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice［J］.J Ethnopharmacol，2010，20（2）：392-397.