豬附紅細胞體病流行病學調查及不同藥物治療效果

趙駐軍，蔣祿峰，秦建華

（河北農業大學動物科技學院，河北保定071001）

豬附紅細胞體（Eperythrozoon suis）是一種寄生于紅細胞表面或游離于血漿的病原體，主要引起豬的貧血、黃疸、高熱等，表現為仔豬虛弱和貧血、肥育豬生長緩慢、母豬繁殖障礙、生產力下降等綜合性癥狀［1-2］。該病多呈隱性感染，不表現出臨床癥狀，但當機體的抵抗力下降，其他病原菌混合感染時，造成機體死亡［3-5］。近幾年來附紅細胞體在保定市多個地區都有發生，因感染附紅細胞體或與附紅細胞體混合感染等多種疫病對生豬生產造成了很大損失。為了解保定市豬群中豬附紅細胞體感染情況，有效地防治該病，本研究對保定市部分地區不同規模的豬場進行了本病的流行病學調查，篩選有效藥物進行治療試驗，為豬附紅細胞體病的防治提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器及藥品 Nikon光學顯微鏡（YS100）；貝尼爾，河北遠征藥業生產，批號：100718；咪唑苯脲，蘭州正豐藥業公司生產，批號：100102；鹽酸多西環素，華北制藥集團生產，批號：100408；磺胺間甲氧嘧啶，華北制藥集團生產，批號：100615；土霉素，河北遠征藥業生產，批號：100427。

1.1.2 血樣 2011年2月至2012年1月，選取唐縣、徐水縣、高碑店、滿城縣、清苑縣、容城縣等6個縣30個不同規模的豬場和20個散養戶，分別在春、夏、秋、冬不同的季節，隨機采集哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬、種母豬的靜脈血，共2 040份，加抗凝劑處理后于4℃保存。

1.2 方法

1.2.1 豬附紅細胞體病原學檢測

1.2.1.1 血液壓片鏡檢 取1滴抗凝豬血于載玻片上，再加入等量生理鹽水混勻后，蓋上蓋玻片鏡檢。

1.2.1.2 血液涂片染色鏡檢 取抗凝血涂片后以姬姆薩染色、鏡檢。

1.2.1.3 紅細胞溶解后鏡檢 經血液壓片鏡檢和血液涂片染色鏡檢結果陽性的血液，取1滴此抗凝血于載玻片上，再加1滴1mL／L稀鹽酸溶解紅細胞鏡檢。

1.2.1.4 碘制動試驗 經血液壓片鏡檢和血液涂片染色鏡檢結果呈陽性的血液，取1滴此抗凝血于載玻片上，再加入等量生理鹽水混勻后，于顯微鏡下觀察附紅細胞體的各種運動，而后再加1滴1g／L碘液，觀察其運動情況是否發生變化。

1.2.1.5 判斷標準 利用血液壓片和血液涂片染色鏡檢發現附紅細胞體的血樣，再用滴加鹽酸或碘液的方法進一步確診，以提高附紅細胞體檢出的準確性。

陽性判定：對采集的每份血樣涂片，400倍鏡檢。檢查200個視野，在細胞上和血漿里只要查到1個附紅細胞體存在，此份樣本則判為陽性；檢查不到附紅細胞體，此份樣品判為陰性。

感染強度的判定［3-6］：每份血樣記數200個紅細胞，紅細胞感染率≤25%的判為＋；25%＜紅細胞感染率≤50%的判為＋＋；50%＜紅細胞感染率≤75%的判為＋＋＋；75%＜紅細胞感染率≤100%判為＋＋＋＋。

1.2.2 豬附紅細胞體感染率的檢測 采自上述不同豬群血樣2 040份，采用血液壓片鏡檢法檢測附紅細胞體感染率及感染強度。

1.2.3 不同生長階段豬附紅細胞體感染率的檢測

采自上述保定市部分地區哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬、種母豬等不同生長階段豬血樣2 040份，采用血液壓片鏡檢法檢測不同生長階段豬附紅細胞體感染率及感染強度。

1.2.4 不同季節豬附紅細胞體感染率的檢測 采自上述不同季節豬血樣2 040份，采用血液壓片鏡檢法檢測附紅細胞體感染率及感染強度。

1.2.5 豬附紅細胞體垂直傳播檢測 隨機抽取感染與非感染的懷孕母豬各50頭，所生仔豬出生第1天、第5天采血，采用血液壓片鏡檢法進行豬附紅細胞體病原檢驗，檢測此病是否存在垂直傳播。

1.2.6 臨床治療試驗

1.2.6.1 試驗分組和治療方法 將附紅細胞體感染的斷奶仔豬隨機分為6組，每組為10頭。

第1組，用貝尼爾治療，劑量為5mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第2組，用咪唑苯脲治療，劑量為3mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第3組，用鹽酸多西環素治療，劑量為3 mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第4組，用磺胺間甲氧嘧啶治療，劑量為5 mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第5組，用土霉素治療，劑量為7mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第6組，為對照組，不用任何藥物治療。

臨床治療試驗期間，每日定時測體溫，并觀察各組豬的臨床表現如采食、飲水、精神狀態，是否發生貧血、黃疽以及腹瀉等；治療前和治療后第3天、第5天和第7天采血，鏡檢豬附紅細胞體，檢測感染強度在50%～75%（＋＋＋）的豬附紅細胞體的感染率。

1.2.6.2 療效判定 有效：臨床癥狀的減輕、附紅細胞體感染率降低。

治愈：臨床癥狀消失、病原學檢查結果陰性。

無效：癥狀未見好轉，附紅細胞體感染率無降低。

1.2.7 體外藥敏試驗 取感染附紅細胞體（感染率90%以上）的抗凝豬血1滴于載玻片，分別滴加上述各種藥液1滴，混勻后立即在高倍鏡下觀察，計算豬附紅細胞體從紅細胞上脫落并在血漿中停止擺動的時間。同時不加藥物做對照。觀察豬附紅細胞體對各種藥物的敏感程度。

判定標準：在5min內使豬附紅細胞體從紅細胞上脫落并停止擺動，判為敏感藥物；如在5min以上，則判定為不敏感藥物。

2 結果

2.1 豬附紅細胞體原學檢測結果

2.1.1 血液壓片鏡檢結果 血液壓片鏡檢可見紅細胞上有大量圓形小體存在，多為環形、球形、短桿形、豆點狀、桿狀、月牙狀、串珠狀的小體，附著于紅細胞表面單個或成團寄生。暗視野下有較強的折光性，外圍有白環。該小體姬姆薩染色為紫紅色。嚴重感染病例的每個紅細胞上附紅細胞體可達十幾個，紅細胞猶如布滿突起的蓖麻球。附紅細胞體在血漿中呈游離狀，常作擺動、扭轉，翻滾、上升、下降等運動；一旦附著在紅細胞上后，則停止運動。運動中以個體小者顯得最活潑。紅細胞被附紅細胞體感染在50%以內的，紅細胞變形為齒輪狀的居多；感染在50%以上的，紅細胞出現多形態、星芒狀；紅細胞感染在100%的，紅細胞變形以星芒狀為主。

2.1.2 血液涂片染色鏡檢結果 血液涂片經姬姆薩染色后觀察可見，感染附紅細胞體的紅細胞邊緣不整齊，呈鋸齒狀，表面有許多圓形、橢圓形或月牙形病原體，附紅細胞體被染成淡紫色，紅細胞上附紅細胞體的個數從1個到20個以上不等，呈鏈狀或串錢狀排列。

2.1.3 紅細胞溶解后鏡檢結果 將感染奶牛血液滴于載玻片上，加入1mL／L的稀鹽酸溶解紅細胞，鏡檢，可見游離的蟲體增多，且運動加強。

2.1.4 碘制動試驗鏡檢結果 感染病豬血液懸滴鏡檢，可見附紅細胞體做擺動、扭動、上下翻滾等運動，滴加1g／L碘液后，附紅細胞體停止運動。此時，即使用或生理鹽水洗滌后，附紅細胞體活動力也不恢復，也不被碘著色。碘制動試驗鏡檢結果表明，分離的病原為豬附紅細胞體［7］。

2.2 豬附紅細胞體感染率檢測結果

對保定市6個縣2 040份樣品進行血液學鏡檢，豬附紅細胞體感染率檢測結果見表1。

表1 保定市豬附紅細胞體感染結果Table 1 Infection situation of Eperythrozoon suis in pigs in Baoding

由表1可知，豬附紅細胞體的平均感染率為74.25%。附紅細胞體感染在保定地區豬群中廣泛存在，在不同規模豬場均有不同程度的感染。

2.3 不同生長階段豬附紅細胞體感染率檢測結果

哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬、種母豬等不同生長階段豬附紅細胞體感染情況見表2。感染頭數由表2可知，不同發育階段的豬均有感染，斷奶仔豬感染率最高為82.9%，其次是哺乳仔豬，育肥豬和種母豬偏低，但各生長階段之間感染率差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 不同季節豬附紅細胞體感染率檢測結果

不同季節豬附紅細胞體感染率檢測結果見表3。

表2 不同年齡豬附紅細胞體感染率Table 2 The Eperythrozoon suis infection rate in different ages of pigs

表3 不同季節豬附紅細胞體感染率檢測結果Table 3 Detecting results of Eperythrozoon suis infection in different seasons

由表3可見，豬附紅細胞體感染一年四季均可發生，其中夏季7、8、9月感染率最高86.67%，其次是秋季、春季，冬季稍低。

2.5 豬附紅細胞體垂直傳播檢測結果

感染附紅細胞體的懷孕母豬所生仔豬在出生第1天、第5天采血，病原學檢測結果見表4。

表4 豬附紅細胞體垂直傳播檢測結果Table 4 Results of vertical transmission of Eperythrozoon suis infection

由表4可見，陽性母豬所產的仔豬第1天附紅 細胞體陽性率為56%，在出生第5天陽性率為61%，而陰性母豬所產仔豬在第1天感染率為0，陰性母豬所產仔豬陽性率為2%。結果表明，豬附紅細胞體在母豬仔豬間存在垂直傳播。

2.6 治療試驗結果

2.6.1 附紅細胞體感染率檢測結果 用藥前及用藥后第3天、5天、7天血樣壓片鏡檢，檢測附豬紅細胞體（感染強度＋＋＋）的感染率，附紅細胞體（感染強度＋＋＋）轉陰率結果見表5。

由表5可知，第1、2、3、4、5組豬附紅細胞體（感染強度＋＋＋）檢出率由治療前的最高值83.20%降到3.2%。治療后7d轉陰率分別為92.86%、94.88%、96.15%、95.78%、93.79%。與治療前相比，其差異極顯著（P＜0.01）。對照組第6組附紅細胞感染率有上升趨勢。治療后各藥物組的轉陰率明顯提高。

表5 附紅細胞體感染轉陰率檢測結果Table 5 The results of negative conversion rates of Eperythrozoon suis in pigs

2.6.2 臨床治療療效 不同藥物對斷奶仔豬附紅 細胞病的治療效果見表6。

表6 不同藥物對豬附紅細胞體病的治療效果Table 6 Therapeutic effect of different drugs on porcine eperythrozoonosis

由表6可知，用貝尼爾、咪唑苯脲、鹽酸多西環素、磺胺間甲氧嘧啶、土霉素這幾種藥物治療均有療效，其中第3組用鹽酸多西環素治療治愈率最高，達到80%。

2.7 體外藥敏試驗結果

豬附紅細胞體對各種藥物的敏感性檢測結果見表7。

表7 豬附紅細胞體藥敏試驗結果Table 7 Drug sensitivity test results of Eperythrozoon suis

由表7可知，對照組與各藥物試驗組之間，附紅細胞體從紅細胞上脫落的時間、在血漿中停止活動的時間差異均極顯著（P＜0.01）；鹽酸多西環素組和貝尼爾組差異極顯著（P＜0.01）；磺胺間甲氧嘧啶組和貝尼爾組差異顯著（P＜0.05）；其他組差異不顯著（P＞0.05）。

3 討 論

本次調查的6個縣區豬附紅細胞體的感染率均達到68.75%以上，其結果與國內其他報道基本一致［8-9］。保定市部分縣區豬附紅細胞體平均感染率為74.25%，各縣之間病感染率差異不顯著（P＞0.05）。表明附紅細胞體的感染在保定地區豬群中廣泛存在，該病已給當地養豬業發展造成了較大的影響，因此，應采取有效措施，預防和控制豬附紅細胞體病的發生和流行。

在本次豬附紅細胞體流行病學調查中，不同發育階段的豬均可感染附紅細胞體，斷奶仔豬感染率最高可達82.9%。仔豬斷奶階段可因母子分離、飼料、環境等變化，使其存在較多的應激因素，過度的應激刺激會造成仔豬免疫力低下，對附紅細胞體病原的易感性增高，甚至繼發其他條件致病菌感染，因此，此階段應高度重視疫病的預防工作［10］。從季節分析可知，一年四季均可發生豬附紅細胞體病，其中夏季7、8、9月發病率較高，最高可達86.67%，其次是秋季、春季，而冬季發病率相對較低，這說明附紅細胞體感染發病率受昆蟲活動影響，昆蟲是重要的傳播媒介，因夏季是昆蟲孳生繁殖季節，故發病率較高［11］。感染附紅細胞體的懷孕母豬，所生仔豬出現附紅細胞體陽性率較高，說明豬附紅細胞體存在垂直傳播。

從體外藥敏試驗結果可知，抗血液原蟲藥物、抗生素類藥物等對豬附紅細胞體都具有良好的殺滅作用［12］，其中鹽酸多西環素的效果最好；在臨床治療試驗中也證明這些藥物對豬附紅細胞體病治療效果顯著。但是，不同藥物治療對豬附紅細胞體感染率的轉陰效果不一，鹽酸多西環素轉陰效果最好，其次是磺胺間甲氧嘧啶，因此臨床上可將鹽酸多西環素作為治療豬附紅細胞體病的首選藥物。

［1］ 韓一超，焦福林，張玉換，等.豬附紅細胞體病流行病學調查［J］.山西農業科學，2006，34（4）：73-75.

［2］ Li W，Du N，Xu B，et al.Alteration of integrin-associated protein（CD47）on experimental porcine eperythrozoonosis［J］.Vet Res Commun，2008，32（5）：411-418.

［3］ 劉永夏，劉建柱，成子強，等.應用重組 MSG1蛋白檢測豬附紅細胞體抗體的ELISA檢測方法的建立［J］.中國農業科學，2011，44（21）：4508-4515.

［4］ Hoelzle K，Peter S，Sidler M，et al.Inorganic pyrophosphatase in uncultivable hemotrophic mycoplasmas：identification and properties of the enzyme from Mycoplasma suis［J］.Microbiology，2010，10（1）：194-202.

［5］ Hoelzle L E.Haemotrophic mycoplasmas：Recent advances in Mycoplasma suis［J］.Vet Microbiol，2008，130：215-226.

［6］ 秦建華，楊鵬華，劉占民，等.舍飼小尾寒羊附紅細胞體病的流行病學調查［J］.河北農業大學學報，2004，27（1）：86-88.

［7］ 華修國，李宏全，嚴麗華，等.犬附紅細胞體病診斷方法的研究［J］.上海農學院學報，1998，15（4）：251-255.

［8］ 方素芳，崔 平.河北省豬附紅細胞體病的流行病學調查［J］.河北北方學院學報，2007，23（1）：39-40.

［9］ 許耀臣，王達軍，陳愛林，等.豬附紅細胞體病流行病學調查及防治［J］.中國獸醫雜志，2001，37（3）：14-15.

［10］ 拜廷陽，趙德明，吳志明，等.豬附紅細胞體病診斷與防控［J］.動物醫學進展，2010，31（8）：106-109.

［11］ 李子平，王 鵬，胡自然，等.冀西北地區奶牛附紅細胞體病的流行病學研究［J］.安徽農業科學，2011，39（27）：16803-16804，16925.

［12］ 姜富成，劉聚祥，王克寧，等.豬附紅細胞體培養方法及藥敏試驗研究［J］.動物醫學進展，2011，32（7）：39-44.