HPLC法測定復方三七丸中有效成分的含量

梁盛

復方三七丸為我院自制的一種水蜜丸中藥制劑，是由中藥三七、元胡等組成，在臨床上具有活血化瘀、消腫止痛、舒絡通經、強身健體的功效。主要用于治療跌打損傷，各種痛癥、血癥，潰瘍以及心血管等疾病。三七是復方三七丸中主要的藥物，復方三七丸中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1為該藥制的主要有效成分。本文通過使用高效液相色譜對本院自制的復方三七丸中有效成分的含量進行測量，為更好的控制該藥的質量制定了很好的方法，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 美國進口高效液相色譜儀, 上海產電子分析天平，上海產超聲波清洗器，上海產索氏提取器[1]。

本院自制的復方三七丸樣品，三七皂苷R1的對照品，人參皂苷Rg1的對照品，人參皂苷Rb1的對照品，乙腈是色譜純，超純水，其它的試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液的制備方法[2]各取經過進行過減壓干燥的對照品：三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1適量，全部放置在量瓶中，加入甲醇溶液定容，配制成含量為每1毫升中含有三七皂苷R1為0.6毫克，人參皂苷Rg1為2.1毫克，人參皂苷Rb1為1.2毫克的混合溶液，搖晃均勻，制成了對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備方法 取復方三七丸，進行研磨，制成細粉，過80目篩，精密稱取1 克復方三七丸的細粉,放置到索氏提取器中，加入適量的乙醚，放置水浴上進行回流提取兩個小時，過濾除去乙醚液，將濾紙筒取出后揮發盡乙醚，將藥渣轉移到有塞的錐形瓶中，再精密量取并加入甲醇溶液100毫升，進行稱定其重量，再進行超聲處理30分鐘，取出放冷后，再進行稱重，使用甲醇溶液補足揮發減失的重量，進行過濾，取出續濾液制成為供試品的溶液。

1.2.3 系統適應性的試驗[3]為使試驗順利進行先進性系統適應性試驗，首先分別的精密吸取對照品溶液以及供試品的溶液各10 l，注入到液相色譜儀中，對照品溶液和供試品溶液出現了三個峰，是三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，保留時間分別是7.21 分鐘、8.64 分鐘、15.93分鐘。

1.2.4 線性關系的考察 分別精密吸取使用對照品溶液的制備方法制備的對照品混和溶液分別取0.5毫升、1毫升、2毫升、4毫升、6毫升、8毫升，分別將其放置于10 ml的量瓶中，加入甲醇溶液稀釋至量瓶刻度線，再每瓶精密吸取10μl，依次進樣后，記錄色譜圖。以色譜峰的面積做為縱坐標(Y)，以溶液中的對照品質量做為橫坐標(X)，進行回歸性運算。

1.2.5 精密度的試驗 進行精密吸取對照品溶液10μl，連續進樣五次，記錄色譜圖[4]，得出三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1的峰面積的相對標準偏差。

1.2.6 穩定性的試驗 分別精密吸取對照品的溶液10μL,分別配置好后在0小時、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12 小時進樣進行測定，記錄測量的色譜圖。

1.2.7 重復性試驗 分別精密稱取同一批次制作的復方三七丸的樣品五份，按照同樣的方法制備五份供試品的溶液并按色譜條件和系統適應性的試驗項下色譜條件進行分別測定。

2 結果

2.1 線性關系考察結果 測定出三七皂苷的R1、人參皂苷的Rg1、人參皂苷Rb1的回歸方程分別是：Y＝278.45X+7.987(r＝0.999 9)、 Y＝289.78X+20.156(r＝0.999 6)、 Y＝241.031 X＋13.341 (r＝0.999 8)，可得出三七皂苷的R1、人參皂苷的Rg1、人參皂苷Rb1的質量分別在0.305g～6.156g、1.108g～21.382g、0.6135g～12.473g有良好的線性關系。

2.2 精密度試驗結果 三七皂苷R1，人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1的峰面積的相對標準偏差—RSD分別是0.72%，0.81%，0.62%，試驗結果表明此試驗的精密度良好。

2.3 穩定性試驗結果 對照品中三七皂苷R1和人參皂苷Rg1以及人參皂苷Rb1的峰面積相對標準偏差—RSD分別是1.86%，1.58%，1.35%。試驗結果表明此試驗對三七丸中有效成分的測定，在對照品在進行制備后十二小時內進行測定，實驗結果均穩定。

2.4 重復性試驗結果 試驗結果表明復方三七丸中的三七皂苷R1，人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1的峰面積的相對標準偏差—RSD分別是3.85%，2.56%和3.21%。試驗結果表明此試驗具有非常好的重復性。

3 討論

用高效液相色譜法對復方三七丸中有效成分的含量測定具有操作簡便、方便、準確、重復性好的特點,可用于復方三七丸中有效成分的含量檢測，并經考察同樣適用于三七中藥材的質量檢測。

[1]唐云,倪瑋燁,束志凌.HPLC法測定散結鎮痛膠囊中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量[J].藥學進展,2009,33(7):328-329.

[2]張玲,李濤,李秀娟,等.HPLC法測定元胡及配伍藥對中元胡索乙素的含量[J].蘭州大學學報,2007,33(2):48-51.

[3]李延雪,蘇玉娟,宋寶鵬.HPLC法測定元胡止痛片中延胡索乙素的含量[J].中國藥事,2006,20(9):544-545.

[4]陳玉霞,曾偉杰,楊麗雅.HPLC法快速測定三七提取物中皂苷的含量[J].現代食品科技,2010,26(7):753-755.