靈芝多糖的急性毒性和抗腫瘤作用

崔永偉

江蘇省溧水縣中醫(yī)院藥劑科，江蘇溧水 211200

靈芝多糖的急性毒性和抗腫瘤作用

崔永偉

江蘇省溧水縣中醫(yī)院藥劑科，江蘇溧水 211200

目的：探討靈芝多糖的急性毒性和抗腫瘤作用。方法：觀察靈芝多糖的LD50及對S180小鼠肉瘤細胞的抑制作用。結果：靈芝多糖的LD50遠大于國家標準15 g/kg，屬無毒級別。同時當靈芝多糖的劑量為250 mg/kg時，對S180小鼠肉瘤細胞的抑瘤率為43.44%。結論：靈芝多糖有很好的抗腫瘤作用，同時無急性毒性，值得推廣應用。

靈芝多糖；急性毒性；抗腫瘤作用；中藥

靈芝又稱靈芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是多孔菌科植物赤芝或紫芝的全株。靈芝主要分布在中國、朝鮮半島和日本[1-2]。靈芝一般生長在濕度高且光線昏暗的山林中，主要生長在腐樹或其樹木的根部。靈芝的主要成分為靈芝多糖，它有希望作為腫瘤化學治療或放射治療的輔助治療藥，可增強機體免疫功能，提高腫瘤化學治療或放射治療的療效，并因其抗放射作用，改善骨髓造血功能，從而減輕化學治療或放射治療的副作用。此外，其“扶正固本”作用尚可全面提高患者的體質，有利于治療[3-4]。本實驗旨在探討靈芝多糖的急性毒性級別，對S180小鼠肉瘤細胞的體內(nèi)抑制作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試動物與瘤株 SPF級昆明小鼠 （安徽醫(yī)科大學）；S180小鼠肉瘤細胞（中科院上海細胞生物學研究所）。

1.1.2 主要試劑 靈芝多糖（人工栽培靈芝子實體，廣州市白云區(qū)大藥房）；RPMI-1640培養(yǎng)液（Gibco公司產(chǎn)品）；MTT（Amresco 公司產(chǎn)品）；ConA（Sigma公司產(chǎn)品）；光學顯微鏡（日本 Olympus Bx51）；全自動血球分析（日本 Sysmex Kx21）；其他試劑為市售分析純。

1.2 方法

1.2.1 靈芝多糖提取 人工培養(yǎng)靈芝子實體，粉碎，蒸餾水回流4次，每次40 min，合并回流液過濾，濾液經(jīng)60℃減壓濃縮，離心（6 000 r/min），去除沉淀，取上清液經(jīng)95%乙醇沉淀，離心（6 000 r/min）收集沉淀物，再由Sevag法去蛋白，透析，真空干燥得靈芝總多糖[5]。

1.2.2 小鼠急性毒性試驗設計 將小鼠分為6組，每組8只，雌雄各半。將靈芝多糖按劑量分為5組，分別為：L1，30 g/kg；L2，32 g/kg；L3，34 g/kg；L4，36 g/kg；L5，40 g/kg。 CN1 為對照組，溶劑采用蒸餾水。小鼠灌胃，每只每天1.5 ml，分兩次灌服，間隔0.5 h，記錄小鼠毒性情況與死亡情況，確定靈芝多糖的LD50。

1.2.3 小鼠抗腫瘤試驗設計 取生長最佳狀態(tài)的S180腹水瘤傳代細胞，小鼠右前肢腋下接種。將接種后小鼠隨機分為3組，每組6只，雌雄各半。分別為：靈芝多糖組（編號LZ），樣品劑量為250 mg/kg；陰性對照組（溶劑用蒸餾水，編號CN）；陽性對照（CTX），劑量為 100 mg/kg。24 h后開始灌胃，每只 0.2 ml/d，連續(xù)給藥12 d。停藥24 h后，小鼠脫頸處死后稱重解剖，計算抑瘤率，公式為：抑瘤率（%）=（陰性對照組－試驗組）/陰性對照組×100%。

1.2.4 統(tǒng)計方法 采用 SPSS 19.0軟件分析，兩個樣本的qtest比較，用t檢驗，結果以x±s表示。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 靈芝多糖的急性毒性實驗

靈芝多糖的LD50遠大于國家標準15 g/kg，屬無毒級別。

2.2 小鼠體內(nèi)抗腫瘤試驗

2.2.1 靈芝多糖對小鼠體重的影響 隨著灌胃天數(shù)增加，小鼠體重不斷變化，靈芝多糖組小鼠體重呈逐漸增加趨勢，而陽性對照CTX組小鼠體重逐漸下降。具體情況見圖1。

2.2.2 靈芝多糖對小鼠采食量的影響 各樣品組小鼠采食量隨著飼養(yǎng)天數(shù)增多，變化較明顯，靈芝多糖組采食量穩(wěn)定增加，而陽性對照CTX組由于副作用太大，陰性對照CN組在腫瘤的作用下，病情加重，食欲下降，采食量減少。具體情況見圖2。

圖1 靈芝多糖對S180肉瘤小鼠體重的影響

圖2 靈芝多糖對S180肉瘤小鼠采食量的影響

2.2.3 靈芝多糖對小鼠脾均重、瘤均重的影響 靈芝多糖實驗組的小鼠脾臟指數(shù)高于CN和CTX，但方差分析差異無統(tǒng)計學意義。而小鼠的瘤均重測定結果顯示，靈芝多糖的抑瘤率為43.44%，具有統(tǒng)計學意義。具體情況見表1。

3 討論

靈芝所含的多糖、多肽等有著明顯的抗腫瘤功效，它可顯著提高機體的免疫功能，增強患者自身的抗癌能力[5]。靈芝可以促進白細胞介素-2的生成，促進單核巨噬細胞的吞噬功能，提升人體的造血能力尤其是白細胞的指標水平以及其中某些有效成分對癌細胞的抑制作用，成為抗腫瘤、防癌以及癌癥輔助治療的優(yōu)選藥物[6-7]。靈芝對人體幾乎沒有任何毒副作用。這種無毒性的免疫活化劑的優(yōu)點，恰恰是許多腫瘤化療藥物和其他免疫促進劑都不具有的[8]。本文結果顯示，靈芝多糖對S180小鼠肉瘤細胞的體內(nèi)抑制極顯著，對脾臟等免疫器官的功能有調(diào)節(jié)作用，效果明顯優(yōu)于化療藥物環(huán)磷酰胺，其抗腫瘤作用與文獻中確定的靈芝菌子實體來源的靈芝多糖對S180小鼠肉瘤細胞抑制效果相當[6-7]。

表1 靈芝多糖對S180肉瘤小鼠脾臟及腫瘤的影響

[1]趙繼鼎，徐連旺，張小青.中國靈芝[M].北京：科學出版社，1981.

[2]林志彬，靈芝的現(xiàn)代研究[M].北京：北京大學中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社，1996.

[3]戴則林，蕫昌武.靈芝多糖的生物活性研究進展[J].安徽中醫(yī)學院學報，2005，24（5）：60-62.

[4]LeiL S，Lin ZB.Effects of ganodem a polysaccharides on T cell subpopulations and production of interleukin 2 in mixed lymphocyte response[J].Acta Pham Sin，1992，27（5）：331-335.

[5]陳文星，陸茵，王愛云，等.不同提取工藝靈芝多糖抗腫瘤作用比較[J].南京中醫(yī)藥大學學報，2003,19（4）：227-228.

[6]寧安紅，曹婧，黃敏，等.靈芝多糖對小鼠腫瘤的抑制作用及免疫指標的觀察[J].腫瘤研究與臨床，2004，16（3）：147-149.

[7]李建軍，雷林生，余傳林，等.靈芝多糖抗腫瘤作用的免疫學相關性研究[J].中藥材，2007，30（1）：71-73.

[8]張明軍.枸杞多糖對小鼠腹腔巨噬細胞作用的定量細胞化學研究[J].寧夏醫(yī)學院學報，1994，16（4）：307.

The acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides

CUI Yongwei

Pharmacy of Lishui County Hospital in Jiangsu Province,Lishui211200,China

Objective:To investigate the acute toxicity and antitumor of ganoderma lucidum polysaccharides.Methods:Observed the inhibition of the LD50 of ganoderma lucidum polysaccharides to the mouse sarcoma S180 cells.Results:The results showed that the LD50 of the ganoderma lucidum polysaccharides were greater than the national standard of 15 g/kg,it had non-toxic.At the same time,when the dose of Ganoderma lucidum polysaccharides was 250 mg/kg,the inhibition was 43.44%of S180 mouse sarcoma cells.Conclusion:Ganoderma lucidum polysaccharides has a good anti-tumor effect,and no acute toxicity,should be widely applied.

Ganoderma lucidum polysaccharides;Acute toxicity;Anti-tumor effect;Traditional Chinese medicine

R285.5

A

1674-4721（2012）01（b）-046-02

2011-11-01）