胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質的動態變化

王添敏， 徐士釗， 張 慧， 陳虎彪， 康廷國*

(1.遼寧中醫藥大學藥學院，遼寧大連 116600;2.佳木斯大學藥學院，黑龍江佳木斯 154007;3.香港浸會大學中醫藥學院，香港九龍塘)

胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.又名核桃楸、山核桃，為胡桃科Juglandaceae胡桃屬植物，屬落葉喬木，主要分布于我國東北及華北地區［1］。《開寶本草》記載胡桃楸有補腎固精、斂肺定喘、抑菌鎮咳及抗癌之功效。胡桃楸的樹皮、莖枝和果皮在民間用于治療腫瘤;現代研究表明胡桃楸的莖枝、樹皮、根、葉和果皮均具有抗腫瘤作用［2-6］。鞣質是胡桃楸不同藥用部位中普遍存在的主要化學成分之一［7-9］，近年來越來越多的研究表明鞣質具有較好的抗腫瘤活性［10-12］。關于胡桃楸中總鞣質的測定研究較少，曾測定了不同產地胡桃楸不同藥用部位中含總鞣質的量［13］，本實驗考察了不同時間采收的胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質的動態變化，為胡桃楸資源的合理開發利用提供理論依據。

1 材料

U—3010型紫外-可見分光光度計 (日本Hitachi)，AS5150型超聲波清洗機 (北京華瑞博遠科技發展有限公司)，ALC—110.4型電子分析天平(德國賽多利斯公司)，RE—300型旋轉蒸發儀(上海亞榮旋轉蒸發儀廠)。沒食子酸對照品 (純度≥98%)購自比利時Acros Organics公司。實驗中所用試劑均為市售分析純試劑。

胡桃楸的莖枝、葉和果實分別于2010年2月—2011年1月期間每月28日在遼寧省普蘭店市蓮山鎮老白山上固定區域采收，受氣候、人為因素影響，胡桃楸莖枝采得12個樣品，葉采得5、6、7、8月4個樣品，胡桃楸果采得6、7月2個樣品，經遼寧中醫藥大學王冰教授鑒定為胡桃楸科植物胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.，憑證標本保存于遼寧中醫藥大學中藥鑒定教研室。

2 方法與結果

2.1 胡桃楸樣品的處理 采集的胡桃楸樣品在24 h內運回實驗室處理。將胡桃楸葉切段，莖枝和果實切成1～2 cm厚的薄片，放入-40℃冰箱中凍存。實驗前取出預凍的藥材樣品放入冷凍干燥儀中在-50℃、6 Pa的條件下冷凍干燥，約40 h后藥材干燥完全，取出，粉碎，過40目篩，備用。

2.2 胡桃楸樣品中總鞣質的測定［13］取胡桃楸樣品粉末0.5 g，精密稱定，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%丙酮25 mL，密封，稱定質量;超聲提取40 min，取出，用70%丙酮補足失質量;搖勻，靜置后濾過，精密吸取續濾液5 mL，25℃下減壓回收溶劑至無丙酮味，轉至25 mL棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置后濾過，取續濾液作為供試品溶液。以沒食子酸對照品為標準重新繪制標準曲線，得回歸方程為Y=4.651 8X-0.046 2，r=0.999 3。采用分光光度法于760 nm處分別測定供試品溶液中總多酚和游離多酚的吸光度，依據標準曲線計算出樣品中總鞣質的含有量。

2.3 不同采收期胡桃楸樣品中總鞣質的含有量及其動態變化 經測定，胡桃楸12個莖枝、4個葉和2個果實樣品中總鞣質的含有量見表1。

表1 不同時間采收的胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質Tab.1 Total tannins content in stem，leaf and fruit ofJuglans mandshurica collected in different months

胡桃楸不同藥用部位總鞣質的含有量相差較大，由高到低的順序為葉＞果實＞莖枝，其中胡桃楸葉中總鞣質的平均質量分數約是胡桃楸莖枝中的2.3倍。胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質的動態變化見圖1。不同時間采收的胡桃楸莖枝樣品中總鞣質的質量分數變化無一定的規律;胡桃楸葉中總鞣質的質量分數從5月底開始迅速升高，6月底采收的胡桃楸葉樣品中總鞣質的質量分數為5月底采收的1.6倍，此后胡桃楸葉中總鞣質的質量分數相對平穩;對于6、7月采收的2個胡桃楸果實樣品，7月采收的樣品中總鞣質的質量分數約是6月采收的1.5倍。

圖1 胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質的動態變化Fig.1 Dynamic variation of total tannins content in the stem，leaf and fruit of Juglans mandshurica

3 討論

3.1 干燥方法對胡桃楸果實中總鞣質的影響 本實驗所測定的胡桃楸莖枝和葉中總鞣質的量與文獻［13］的研究結果一致，而果實中總鞣質的平均質量分數 (38.91 mg/g)較文獻［13］測得的 (3.58 mg/g)高約10倍。這可能是因為文獻［13］采用陰干的方法干燥樣品，果實樣品在陰干過程中顏色迅速由綠色變為褐色，其中鞣質類成分發生了變化;而本實驗采用的樣品干燥方法為冷凍干燥，果實干燥后仍保持綠色，其中鞣質類成分未發生變化。該研究結果提示胡桃楸果實中含有較多的鞣質，該成分在陰干過程中易發生變化;而胡桃楸莖枝和葉中鞣質類成分在陰干過程中不易發生變化。

3.2 胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質的動態變化規律 采集到1～12月12個胡桃楸莖枝樣品，其中總鞣質的質量分數在平均值上下波動，其動態變化無一定的規律。胡桃楸葉從5月開始長出，其中總鞣質的質量分數最低;到6月底胡桃楸葉已經逐漸茂盛，其中總鞣質的質量分數迅速增高;此后總鞣質的質量分數趨于平穩。8月胡桃楸果實已經成熟，被人采收，因此本實驗只收集到6、7月2個胡桃楸果實樣品。胡桃楸果實在6月底初長成，其內果皮沒有木質化，全果中總鞣質的質量分數較低;至7月底果實近成熟，其中總鞣質的質量分數也隨之增高。綜上所述，胡桃楸葉和果實中總鞣質的質量分數與各自的生長周期基本吻合。

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